Los kits de diagnóstico de virus de la fiebre aftosa (FMDV) para pruebas de anticuerpos tipo O (bloque ELISA) en animales

Kit de ensayo de anticuerpos para el virus de la fiebre aftosa tipo O para bovinos o cabras (bloque ELISA)

No de catálogo LSY-30031

1. Principio

Este kit se basa en el método ELISA de bloque para detectar cualitativamente anticuerpos específicos contra el virus de la fiebre aftosa (VAMF) de tipo O en suero o plasma de bovinos y caprinos,para el monitoreo de anticuerpos después de la inmunidad al virus de la fiebre aftosa tipo O.

Si la muestra contiene anticuerpos del virus de la fiebre aftosa tipo O,bloquearía el anticuerpo monoclonal HRP conjugado con el virus de la fiebre aftosa tipo O y la combinación de placas de microtiter recubiertas con antígeno recombinante del virus de la fiebre aftosa tipo O.. FMD virus package is bound O board monoclonal antibody HRP conjugate and chromogenic substrate reaction can reflect the status of FMD virus type O whether the sample contains antibodies level of protection.

1. Reactivos y contenido

3.El matRequerido no proporcionado

1) Lector de microplacas con 450nm y 630nm

2) Dispositivo termostático de 37 °C

3) Micropipetas, ajustables.

4Requisito de muestra

1) Este kit sólo puede detectar suero o plasma de bovino y caprino.

2) Para obtener el mejor resultado de la prueba, evitar el uso de muestras con hemólisis severa, precipitados, contaminados por bacterias o suspensión de proteínas.

3) La muestra de suero debe conservarse a 2-8 °C durante el tiempo de almacenamiento (en 3 días), si es a largo plazo, debe mantenerse a -20 °C o menos, evitar la congelación y descongelación repetidas.

5Procedimiento de ensayo

1Preparación de amortiguador de lavado: diluir 10 veces el amortiguador de lavado con agua destilada o agua desionizada a 1:10 (por ejemplo: tomar 100 ml de amortiguador de lavado 10 veces, mezclar con 900 ml de agua destilada o agua desionizada),mezclar uniformemente.

2. Añadiendo diluyente de muestra, 50 ul/pozo.

3. Adición de muestras: para los pozos de muestreo, añadir la muestra 50ul/pozo; establecer 2 pozos para el pozo de control en blanco, añadir diluyente de la muestra, 50ul/pozo; establecer 2 pozos para el control negativo, añadir el control negativo, 50ul/pozo;se establecen 2 pozos para el control positivo, añadir control positivo, 50ul/pozo; cubrir con papel adhesivo,Incubación en la oscuridad a 37 °C durante 60 minutos.

4. Placa de lavado: desechar el líquido del pozo, añadir tampón de lavado diluido lleno de pozos (si se utiliza lavadora ELISA, añadir tampón de lavado a 250ul/pozo), lavar durante 3 veces, permanecer estático durante 1 minuto cada vez,La última vez, seco con el papel absorbente.

5. Añadir el conjugado de enzimas en todos los pozos (excepto el pozo en blanco), 100ul/pozo, cubrir con papel adhesivo e iincubar a 37°C durante 60 minutos.Desechar el contenido de los pozos y lavar 3 veces como se describe en el paso 4.

6- Añadir sustratos: mezclar los substratos A y B de forma uniforme antes de su uso según la cantidad necesaria, añadir la mezcla 100ul/pozo, cubrir con papel adhesivo,Incubación a 37 °C en la oscuridad durante 15 minutos.

7. Añadir solución de parada, 50ul/pozo. Establecer cero en el control en blanco, leer el valor de OD en el lector de ELISA 450nm (630nm como referencia).

6. Referencia

1) Cálculo del PI

PI =el valor medio de la OD del control negativo - valor de la OD de la muestra o valor de la OD del control positivox 100%

Valor OD medio del control negativo

2) Juez de validación

Control negativo Valor OD ≥ 0,15 (Si es inferior a 0,5, el ensayo es inválido

El PI del control positivo ≥ 50% (si es inferior al 50%, el ensayo no es válido)

7Interpretación de los resultados

PI de la muestra ≥ 50%: positivo;

PI de la muestra < 50%: negativo.

8Limitación

Este kit solo es adecuado para suero de bovino y caprino.

9. Notas

1) La placa MicroWell extraída del ambiente refrigerado debe estar equilibrada con humedad para secarse a temperatura ambiente, luego puede abrirse.Colocar de nuevo la placa MicroWell no utilizada en una bolsa de papel seco y sellarla a 2 ~ 8 °C.

2) Antes de añadir el reactivo, agitar suavemente el frasco de descarga y mezclar incluso el reactivo.

3) En el caso de la incubadora, no utilice de nuevo la lámina adhesiva.

4) No mezcle los componentes entre diferentes kits de lotes diferentes.

5) El kit de ensayo y las muestras deben considerarse como la fuente de infección para manejarlas adecuadamente.

10. Almacenamiento y fecha de caducidad

Conservar a una temperatura de 2 a 8°C en la oscuridad, sin congelación, fecha de caducidad: 12 meses.