Equipo de prueba ELISA de carne del equipo de inmunoensayo de ractopamina LSY-10013 (Ract) para orina, tejido

ELISA de ractopaminaPrueba kél

N.º de catálogo LSY-10013

1. Principio

El kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de ractopamina en la muestra.Los antígenos conjugados están recubiertos previamente en las tiras de los micropocillos.La ractopamina de la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por los anticuerpos anti-ractopamina.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de ractopamina en la muestra.El valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de ractopamina.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.05ppb

Temperatura de la incubadora:25 ℃

Tiempo de incubadora: 30 min ~ 15 min

Límite de detección

Orina 0.1ppb

Tejido………………………………………………………………………… 0.2 ppb

Reacciones cruzadas

Ractopamina 100%

Dobutamina <1%

Salbutamol <0,1%

Clenbuterol <0,1%

Índice de recuperación

Orina, tejido 60~120%

3. Componentes

• Tiras de micropocillos: 12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una
• Solución estándar 6× (1 ml cada una): 0 ppb, 0,05 ppb, 0,15 ppb, 0,45 ppb, 1,35 ppb, 4,05 ppb
• Conjugado enzimático (7 ml) tapa roja
• Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml) con tapa azul
• Solución de sustrato A (7 ml) tapa blanca
• Solución de sustrato B (7 ml) tapa negra
• Solución de parada (7 ml) tapa amarilla

• Tampón de lavado concentrado 20× (15 ml) tapa blanca
• Tapa transparente de solución de extracción concentrada 2× (50 ml x 2)

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos:lector de microplacas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, oscilador, centrífuga, pipetas medidoras, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g)
• Micropipetas:monocanal 20-200 µL y 100-1000 µL, y multicanal 30-300 µL;
• Reactivos:NaOH, HCl

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben abordarse antes del pretratamiento)

• Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;
• Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

Solución IHCl 0,2 M:

Tome 17,2 ml de HCl y agregue agua desionizada hasta 1 litro.

SoluciónII NaOH 1M:

Tome 4 g de NaOH y agregue agua desionizada hasta 100 ml.

Solución Ⅲ Solución de extracción de muestra:

Diluir 2 veces la solución de extracción concentrada con agua desionizada a 1:1.

Preparación de muestras

5.1Orina

Tomar 50 µL de orina clara, detectarla directamente (si la orina está turbia, se debe filtrar o centrifugar a 4000 r/min durante 10 min, luego tomar orina clara).Guárdelo en un ambiente congelado si no lo usa.

Pliegue de dilución de la muestra: 1

5.2 Tejido

• Pesar 2 ± 0,05 g de muestra de tejido homogeneizado en un tubo de centrífuga de 50 ml, añadir 3 ml de HCl 0,2 M y agitar bien durante 3 minutos.
• Luego agregue 600 ul de NaOH 1 M y 2,4 ml de solución de extracción de muestra, agite bien durante 3 minutos, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante 10 minutos.
• Tome 50 l de líquido de capa transparente para su análisis.(Nota: si hay grasa, quitar la grasa o separar la grasa, tomar líquido claro para análisis)

Pliegue de dilución de la muestra:4

6. Procedimientos ELISA

6.1 Instrucciones

• Deje que todos los reactivos y las tiras de micropocillos alcancen la temperatura ambiente (20-25 ℃) antes de su uso.
• Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.
• La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas son los puntos clave en los procedimientos de ELISA.
• Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

6.2 Procedimientos de operación

• Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos; tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de usarlo.
• Coloque las tiras de micropocillos necesarias en marcos de placas.Se volvió a sellar la microplaca no utilizada, se almacenó a 2-8 ℃, no se congeló.
• Prepare el tampón de lavado: diluya 15 ml de tampón de lavado concentrado 20X con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado 20X + 19 partes de agua desionizada) o prepárelo según la cantidad necesaria.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.
• Agregue 50 µL de la muestra o la solución estándar en pocillos duplicados separados;agregue 50 µL de conjugado enzimático y 50 µL de la solución de trabajo del anticuerpo en cada pocillo, selle la microplaca con la membrana de cubierta, mezcle suavemente agitando la placa manualmente yincubar a los 25 ℃ durante 30 mín..
• Vierta el líquido del micropocillo, agite para secar sobre papel absorbente;agregue 250 µL/pocillo de tampón de lavado, lave durante 15-30 segundos, luego saque y agite para secar con papel absorbente, repita 4-5 veces.(si quedan burbujas después del aleteo, córtelas con las puntas limpias)

6 Coloración: agregue 50 µL de la solución del sustrato A y 50 µL de la solución B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar a 25 ℃ durante15min en la oscuridad para colorear.

7 Determinación: agregue 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD de cada pocillo.(Se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 5 minutos).

7. Juicio de resultados

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de DO de la muestra tiene una correlación negativa con la ractopamina en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestraⅠ es 0,3 y el de la muestraⅡ es 1,0, el valor de DO de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,05 ppb, 1,415 para 0,15 ppb, 0,74 para 0,45 ppb, 0,313 para 1,35 ppb , 0,155 para 4,05 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestraⅠ es de 1,35 a 4,05 ppb, y el de la muestraⅡ es de 0,15 ppb a 0,45 ppb.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir

B: el valor OD promedio de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores de semilogaritmo de las soluciones estándar de ractopamina (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el factor de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración real de Ractopamina en la muestra.

Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software)

8. Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada;Continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
• Mezcle uniformemente, lave la placa completamente; la reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de la placa.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 0 inferior a 0,5 (A450 nm < 0,5) indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el paquete al vacío de la microplaca tiene fugas, su uso aún es válido, no afecta el resultado de la prueba, no dude en usarlo.