LSY-10008 Florfenicol (FF) Kit de ensayo ELISA para la inspección de la seguridad de los huevos de leche y productos acuáticos

Kit de ensayo ELISA para el florfenicol

No de catálogo LSY-10008

1Principio.

Este kit de prueba se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de florfenicol en muestras.El florfenicol en la muestra y los antígenos conjugados pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por los anticuerpos contra el florfenicolDespués de la adición del conjugado enzimático, se añade el sustrato TMB para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) tiene una correlación negativa con la concentración de florfenicol en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de florfenicol..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,1 ppm

Temperatura de la incubadora: 25°C

Tiempo de la incubadora: 30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección:

Miel, tejido, huevo 0,1 ppm

Leche, piensos, orina ((Método 1)

Orina (método 2) 1 ppm

Tasa de recuperación:

Tejidos, miel, leche, huevos, piensos, orina................................... 90 ± 30%

Tasa de reacciones cruzadas:

Florfenicol 100%

Florfenicol Amina 11%

Tiamfenicol < 0,1%

El cloramfenicol < 0,1%

3. Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipamiento:Lector de microplacas, homogeneizador, impresora, dispositivo de secado de nitrógeno, oscilador, centrífuga, pipetas de medición, balanza (con una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora.
2. Los micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de varios canales de 30 a 300 μl;
3. Los reactivos:Acetonitrilo, acetato de etilo, N-hexano

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1. Para los experimentos se podrán utilizar únicamente las puntas desechables y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
2. Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados del experimento.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

Solución I Solución de redisolución de la muestra:

Diluir la solución de redisolución concentrada 2× con agua desionizada a 1:1 (1 parte de solución de redisolución concentrada 2× + 1 parte de agua desionizada).

SoluciónⅡSolución de extracción de muestras:

Mezclar el acetonitril y el acetato de etilo en proporción de 1:2 (1 parte de acetonitril + 2 partes de acetato de etilo)

Preparación de las muestras

a) Tejido (pollo/hígado, cerdo/hígado, camarón, pescado, etc.)

1. Pesar 3,0 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir primero 3 ml de agua desionizada para mezclar uniformemente, luego añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 2 min.Centrifugado a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min..
2. Se toman 2 ml del supernatante, se soplan para secar con nitrógeno a 50-60 °C.
3. Se añaden 2 ml de N-hexano para disolver los residuos secos, luego se añade 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, se mezcla durante 30 segundos; se centrifuga a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min.Eliminar la fase orgánica de la capa superior.
4. Se tomarán 50 μL de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 1

b) Miel

1 Colocar 2 ± 0,05 g de muestra de miel en un tubo centrífugo, disuelto con 4 ml de agua desionizada. Añadir 4 ml de acetato de etilo, agitar durante 2 minutos. Centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 minutos.

2 Transfiere 2 ml de supernatante a otro tubo de centrifugadora, sopla para secar con nitrógeno a 50-60 °C. Añade 1 ml de la solución de redisolución de la muestra para disolver el residuo seco, mezcla durante 30 segundos.

3 Tomar 50 μL para análisis.

Doble de dilución de la muestra: 1

c) Leche

1. Tomar 1 ml de muestra de leche homogeneizada en un tubo centrífugo de 5 ml, añadir 2 ml de solución de extracción de la muestra, agitar durante 1 min, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min.

2Se toma 1 ml del supernatante, se sopla para secar con nitrógeno a 50-60 °C.

3Se añade 1 ml de N-hexano para disolver los residuos secos, luego se añade 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, se mezcla durante 30 segundos; se centrifuga a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min.Eliminar la fase orgánica de la capa superior.

4Se tomarán 50 μl de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 2

d) Alimentos para animales

1. Pesar 1 ± 0,05 g de la muestra de pienso homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir primero 3 ml de agua desionizada, luego añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 1 min.Centrifugado a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min..
2. Se toman 3 ml de supernatante, se soplan para secar con nitrógeno a 50-60 °C.
3. Añadir 1 ml de N-hexano para disolver los residuos secos, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min.Eliminar la fase orgánica de la capa superior.
4. Se tomarán 50 μL de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 2

e) Huevo

1. Pesar 2,0 ± 0,05 g (o 2 ml) de la muestra homogeneizada fresca en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 1 min.Centrifugado a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min..
2. Se toman 3 ml de supernatante, se soplan para secar con nitrógeno a 50-60 °C.
3. Añadir 1 ml de N-hexano para disolver los residuos secos, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min.Eliminar la fase orgánica de la capa superior.
4. Se tomarán 50 μL de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 1

(Si no se puede obtener el supernatante de 3 ml durante el procesamiento, la solución puede tomarse después de centrifugarse repetidamente, o se puede extraer 5 ml después de añadir 10 ml de acetato de etilo,y se puede mantener la dilución¿ Por qué?

f) Método de orina 1

1) Pesar 1 ± 0,05 g (o 1 ml) de muestra en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 1 min, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min.

2) Se toman 3 ml del supernatante, se soplan para secar con nitrógeno a 50-60 °C.

3) Añadir 1 ml de N-hexano para disolver los residuos secos, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min.Eliminar la fase orgánica de la capa superior.

4) Tomar 50 μL de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 2

g) Método de orina 2

1) Tomar 100 μl de orina clara descongelada, añadir 900 μl de solución de redisolución de la muestra, vortexarlo.

2) Se tomarán 50 μL del líquido mezclado anterior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 10

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1. Antes de su uso, se deben poner todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C).
2. Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.
3. La reproductibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos, siendo el correcto funcionamiento del lavado de platos el punto clave de los procedimientos ELISA.
4. Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Ejecución del ensayo

1) Sacar todos los reactivos necesarios de un ambiente de 2 a 8 °C, llevarlos a temperatura ambiente (20 a 25 °C) durante al menos 30 min. Tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse uniformemente antes de su uso.

2) Tomar las tiras de micro-pozo necesarias y los marcos de las placas.

3) Preparación de la solución: disolver 40 ml del tampón de lavado 20 × concentrado con agua desionizada a 1:19 (1 parte de 20 × tampón de lavado concentrado + 19 partes de agua desionizada) o sólo al volumen requerido para su uso.

4) Numeración: numeración de los micro pozos según las muestras y la solución estándar; cada muestra de ensayo y solución estándar deben realizarse en duplicado; registrar sus posiciones.

5) Añadir 50 μL de la muestra o solución estándar a los pozos duplicados separados, añadir 50 μL del conjugado enzimático y luego añadir 50 μL de la solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos.Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación a los 25 años°Cdurante 30 minutos.

6) Lavar la microplaca con el amortiguador de lavado a 250 μL/pozo durante 4-5 veces.cortarlos con las puntas limpias).

7) Coloración: añadir 50 μL de la solución de sustrato A y luego 50 μL de la solución de sustrato B en cada pozo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yIncubación a los 25 años°Cdurante 15 minutos en la oscuridad para la coloración.

8) Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo, mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en un plazo de 5 min).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de florfenicol..

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, el valor OD de las soluciones estándar es: 2.243 para 0ppb, 1.816 para 0.1ppb, 1.415 para 0.2ppb, 0.74 para 0.4ppb, 0.313 para 0.8ppb, 0.155 para 1.6ppb,Por consiguiente, el rango de concentración de la muestraI es 0..8 a uno.6, y el de la muestra II es de 0,2 a 0,4 ppm.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor medio de OD (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibujar la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de florfenicol (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de florfenicol en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor estándar de DO inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada de situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.
3. Mezclar uniformemente, de lo contrario se producirá la reproducibilidad indeseable;
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evitar el contacto con la piel.
5. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la DO.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.
6. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla.
7. Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

D Edificio, Parque industrial biológico nacional de la vida marina, calle Binhai No. 2, Dapeng, Shenzhen, China, 518120

Telefono: 86-755-28438788 Fax: 86-755-28938800 El número de teléfono es el siguiente:

El correo electrónico:Información sobre las medidas de seguridad

La Comisión ha adoptado una decisión sobre la aplicación de la presente Decisión.