Los metabilitos ELISA Test Kit ISO de LSY-10046 MQCA Olaquindox certificaron

Metabilitos de Olaquindox (MQCA) ELISA Test Kit

No. LSY-10046 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de MQCA en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. Los MQCA en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para el anticuerpo anti-MQCA. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el MQCA en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de MQCA se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,5 ppb

Temperatura de la incubadora: ℃ 25

Tiempo de la incubadora: 30min~15min

Límite de detección:

Ppb del tejido 1

Tarifa del reacción cruzado:

MQCA 100%

Olaquindox <0>

Tarifa de recuperación:

Tejido el 85%±10%

3. Componentes

• Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
• solución estándar 6× (1 ml cada uno): 0 ppb, 0,5 ppb, 1,5 ppb, 4,5 ppb, 13,5 ppb, ppb 40,5
• Casquillo rojo concentrado de la conjugación de la enzima (1 ml)
• Casquillo azul de la solución de funcionamiento del anticuerpo (8 ml)
• Casquillo blanco de la solución del substrato A (7 ml)
• Casquillo negro de la solución del substrato B (7 ml)
• Pare el casquillo amarillo de la solución (7 ml)
• 20× concentró el casquillo blanco del almacenador intermediario que se lavaba (40 ml)
• Redisolución del casquillo transparente de la solución (50 ml)

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: el lector del microplate (450 nanómetro nanómetro/630), homogeneizador, oscilador, centrifugadora, midiendo mide con una pipeta, dispositivo y balanza (una sensibilidad de la nitrógeno-sequedad recíproca de 0,01 g), incubadora.
• Micropipettors: µL monocanal 20 a 200 µL y 100 a 1000 y µl de varios canales 30~300;
• Reactivo: Acetato de etilo, n-hexano, ácido clorhídrico, NaCl, CH3CN

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

• Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
• Antes del experimento, cada utensilio experimental se debe comprobar para ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la muestra

1) Extracto de muestra (tienda en el ℃ 2~8 para 1 mes): Tome el ácido clorhídrico concentrado 8.6ml, añada el agua desionizada a 500ml, después añada NaCl 10g para conseguir el extracto de muestra.

5,1 tejido del ganado y de las aves de corral (pollo, pato, cerdo):

• Tome 2± 0,05 g de la muestra homogeneizada en el tubo de centrífuga 50ml;
• Añada el extracto de muestra de 4 ml, sacuda a fondo para 1min;
• Añada el acetato de etilo 4ml y el NC de 2ml CH₃, sacude correctamente para 10s; Centrifugadora en 4000 r/min en la temperatura ambiente (20 - ℃ 25) para el minuto 10 (nota: Esta única sacudida de la necesidad del paso para 10s, sacude llevará demasiado de largo a la emulsificación, si apareció la emulsificación, toma cierto sobrenadante, entonces tubo de la sacudida ligeramente para 5s, centrifugadora entonces puede conseguir otra vez bastante sobrenadante);
• Tarde a para arriba-capa de 3 ml la fase orgánica en un envase claro, abajo para secarse con nitrógeno o aire en

baño de agua 56℃;

• Añada 1ml el n-hexano, sacudida para 30s, después añada 0.5ml que redisuelve la solución, la sacudida y la mezcla a fondo para 30s; centrifugadora en 4000 r/min en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para 5 mínimos.
• Quite la fase orgánica de la para arriba-capa. Tome la abajo-capa de 50 µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 0,5

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

• Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;
• Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;
• La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA;
• Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

• Saque todos los reactivo y lugar necesarios en la temperatura ambiente (20-25 ℃) por lo menos 30min. Observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar;
• Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2 - 8;
• Preparación de la solución: los 40 ml diluídos del 20× concentraron el almacenador intermediario que se lavaba con agua desionizada at1: 19 (el almacenador intermediario concentrado 20× del lavado de 1 porción + 19 porciones desionizó el agua), o se preparan como cantidad necesaria;
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones;
• Prepare la solución de la mezcla de la solución de funcionamiento del anticuerpo y de la conjugación concentrada de la enzima: Solución de funcionamiento del anticuerpo de la mezcla y conjugación concentrada de la enzima en el 10:1 uniformemente (la solución de funcionamiento del anticuerpo 1000ul + la conjugación concentrada 100ul de la enzima, esta solución de la mezcla se deben utilizar una vez que está preparada, él no se pueden almacenar, la cantidad del paquete tiene cantidad adicional, se preparan como proporción está MUY BIEN.)
• Añada el µL 20 la muestra o la solución estándar para separar pozos duplicados, entonces añade la solución de la mezcla de 70 µL de la solución de trabajo del anticuerpo y de la conjugación concentrada de la enzima en cada pozo. Mézclese por la sacudida suavemente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el℃ 25 en la oscuridad para el minuto 30;
• Lave el microplate con el almacenador intermediario que se lava en 250 µL/well por cuatro a cinco veces; empape el pozo con el almacenador intermediario que se lava para el sec 15-30, aleta para secarse con el papel absorbente (si hay las burbujas después de agitar, las corta con las extremidades limpias);
• Coloración: añada el µL 50 el µL de la solución del substrato A y 50 de la solución de B en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente, e incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración;
• Determinación: añada 50 que el µL para la solución en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD. (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo del minuto 5).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de MQCA.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) se puede obtener de la comparación el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, mientras que los de las soluciones estándar están como los seguidores: 2,043 para 0 ppb, 1,716 para 0,5 ppb, 1,215 para el ppb 1,5, 0,74 para el ppb 4,5, 0,313 para el ppb 13,5 y 0,155 para el ppb 40,5, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 13,5 a 40.5ppb, y el del Ⅱ de la muestra es el ppb 1,5 a 4,5.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar de MQCA (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, así finalmente obteniendo la concentración de MQCA en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software)

8. Precauciones

• La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD
• La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable
• Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción uniformemente y lave el microplate a fondo, si no habrá la reproductibilidad indeseable
• La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel;
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz
• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 indica su degeneración
• La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.

Nota: Si el envasado al vacío del microplate tiene salida, es todavía válido utilizar, no afecta al resultado de la prueba, sea relajarse para utilizar.