LSY-10042 Kit de prueba ELISA de dexametasona para tejidos, leche, piensos, miel y orina

ELISA de dexametasonapruebaEquipo

N.º de catálogo LSY-10042

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de dexametasona en la muestra.El antígeno de acoplamiento está recubierto previamente sobre las tiras de los micropocillos.La dexametasona de la muestra y el antígeno de acoplamiento recubierto previamente en las franjas de los micropocillos compiten por el anticuerpo anti-dexametasona.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la dexametasona que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de Dexametasona.

2. T.especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.1ppb

Temperatura de incubación: 25 ℃

Tiempo de incubación: 30 minutos~15 minutos

Dlímite de detección:

Tejido 0,1 ppb

Pienso, leche, miel, orina 0,2 ppb

Leche en polvo 0,3 ppb

Cruz-velocidad de reacción:

Dexametasona 100%

Rrecuperacióntasa

Tejido, alimentación 90±25%

Leche en polvo 85±25%

Orina, leche, miel………………………………………………………….95±25%

3. Componentes

4.Materiales necesarios pero no proporcionados.

• Equipos:lector de microplacas, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, centrífuga, pipetas medidoras y balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora, impresora.
• Micropipetas:monocanal 20-200 µL, 100-1000 µL y multicanal 30～300 µl.
• Ragentes:Acetato de etilo, acetonitrilo (CH₃CN), N-hexano.

5.Sampliopagretratamiento

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra se deben abordar los siguientes puntos:

1) Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, se debe verificar que cada equipo experimental esté limpio y se debe volver a limpiar si es necesario, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Spreparación de soluciónantes de la muestrapagretratamiento

• Solución de mezcla de acetonitrilo y acetato de etilo: 1 parte de acetonitrilo + 1 parte de acetato de etilo
• Solución de redisolución de muestra: la solución de redisolución concentrada 5x se diluye con agua desionizada a 1:4.

5.1 Tejido

• Tome 2,0 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo de centrífuga de 50 ml;Agregue 2 ml de solución para redisolver la muestra, luego agregue 6 ml de acetato de etilo, agite durante 3 minutos, centrifugue a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos.
• Tome 3 ml de fase orgánica transparente en un recipiente seco, séquelo con nitrógeno o aire a 50-60 ℃.
• Disolver los residuos secos en 1 mL de N-hexano, agregar 1 mL de la solución redisoludora de la muestra, mezclar durante 30 segundos;Centrifugar a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos, eliminar la fase de N-hexano de la capa superior.
• Tome 50 l de la capa inferior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:1

5.2 Alimentación

1. Pesar 1,0 ± 0,05 g de muestra de alimento homogeneizada en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 6 ml de acetato de etilo, agitar durante 3 minutos, centrifugar a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos.

2. Tome 3 ml de fase orgánica transparente en un recipiente seco, séquelo con nitrógeno o aire a 50-60 ℃.

• Disolver los residuos secos en 1 ml de N-hexano, agregar 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos, centrifugar a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos, eliminar la fase de N-hexano de la capa superior.
• Tome 50 l de líquido de capa inferior para realizar más análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:2

5.3 Leche en polvo

• Pesar 1,0 ± 0,05 g de leche en polvo en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 2 ml de solución para redisolver la muestra, luego agregar 6 ml de solución mezcladora de acetonitrilo y acetato de etilo, agitar durante 3 minutos, centrifugar a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos.
• Tome 2 ml de fase orgánica transparente en un recipiente seco, séquelo con nitrógeno o aire a 50-60 ℃.
• Disuelva los residuos secos en 2 ml de N-hexano, agregue 1 ml de solución para redisolver la muestra, mezcle durante 20 segundos, centrifugue a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos, retire la fase de N-hexano de la capa superior.
• Tome 50 l de líquido de capa inferior para realizar más análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:3

5.4 Miel

• Pese 1,0 ± 0,05 g de miel en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregue 2 ml de solución para redisolver la muestra, luego agregue 6 ml de acetato de etilo y agite durante 3 minutos.Centrifugar a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 min.
• Tome 3 ml de fase orgánica transparente en un recipiente seco, séquelo con nitrógeno o aire a 50-60 ℃.
• Disuelva los residuos secos en 1 ml de N-hexano, agregue 1 ml de solución de redisolución de muestra, mezcle durante 30 segundos, centrifugue a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos, retire la fase de N-hexano de la capa superior.
• Tome 50 l de líquido de capa inferior para realizar más análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:2

5.5 Orina

• Tome 1,0 ml de muestra de orina en un tubo de centrífuga de 5 ml, agregue 2 ml de acetato de etilo, agite durante 1 minuto, centrifugue a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos.
• Tome 1 ml de fase orgánica transparente en un recipiente seco, séquelo con nitrógeno o aire a 50-60 ℃.
• Disuelva los residuos secos en 1 ml de N-hexano, agregue 1 ml de solución de redisolución de muestra, mezcle durante 30 segundos, centrifugue a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos, retire la fase de N-hexano de la capa superior.
• Tome 50 l de líquido de capa inferior para realizar más análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:2

5.6 Leche

1. Tome 1,0 ml de muestra de leche en un tubo de centrífuga de 5 ml, agregue 2 ml de solución mezcladora de acetonitrilo y acetato de etilo, agite durante 1 minuto, centrifugue a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos.

• Tome 1 ml de fase orgánica transparente en un recipiente seco, séquelo con nitrógeno o aire a 50-60 ℃.
• Disuelva los residuos secos en 1 ml de N-hexano, agregue 1 ml de solución de redisolución de muestra, mezcle durante 30 segundos, centrifugue a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 minutos, retire la fase de N-hexano de la capa superior.
• Tome 50 l de líquido de capa inferior para realizar más análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:2

6. Procedimientos ELISA

6.1Instrucciones

• Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25 ℃) antes de su uso;
• Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso;
• La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos ELISA;
• Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

6.2Operaciónprocedimientos

• Saque todos los reactivos necesarios del kit y colóquelos a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 min.Tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse para que se mezcle uniformemente antes de su uso.
• Tome las tiras de micropocillos y los marcos de placas necesarios.Vuelva a sellar la microplaca no utilizada, guárdela a 2-8 ℃, no congelada.
• Preparación de la solución: diluya 15 ml del tampón de lavado concentrado (20 x concentrado) con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado 20 x + 19 partes de agua desionizada), o prepárelo según la cantidad necesaria.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado, registre sus posiciones.
• Agregue 50 µL de la muestra o solución estándar para separar los pocillos duplicados;y agregue el conjugado enzimático, 50 µl/pocillo, luego agregue la solución de trabajo de anticuerpo, 50 µl/pocillo.Mezcle suavemente agitando la placa manualmente, selle la microplaca con la membrana de cubierta yincubar en25 ℃ durante 30 minutos.
• Vierta el líquido, lave la microplaca con el tampón de lavado a 250 l/pocillo de 4 a 5 veces.Cada vez remoje el pozo con el tampón de lavado durante 15-30 segundos, agite para secar con papel absorbente (si quedan burbujas después de aletear, córtelas con las puntas limpias).
• Coloración: agregue 50 µL de la solución del sustrato A y luego 50 µL de la solución B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar a los 25℃para 15mín.enoscuropara coloración.
• Determinación: añadir 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD.(Se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 5 minutos).

7.Rresultado juicio

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de DO de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de dexametasona.

7.1determinación cualitativaación

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestraⅠ es 0,3 y el de la muestraⅡ es 1,0, mientras que los de las soluciones estándar son los siguientes: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,1 ppb, 1,415 para 0,3 ppb, 0,74 para 0,9 ppb, 0,313 para 2,7 ppb y 0,155 para 8,1 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestraⅠ es de 2,7 a 8,1 ppb, y el de la muestraⅡ es de 0,3 a 0,9 ppb.

7.2 qdeterminación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir,

B: el valor OD promedio de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de la solución estándar y los valores de semilogaritmo de la solución estándar de dexametasona (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el factor de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de Dexametasona en la muestra.

Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software).

8.Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada.
• Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción de manera uniforme y lave bien la microplaca; de lo contrario, se producirá una reproducibilidad no deseada.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel;
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) inferior a 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Salmacenamiento yfecha de caducidad

Salmacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;La fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el paquete al vacío de la microplaca tiene fugas, su uso aún es válido, no afecta el resultado de la prueba, no dude en usarlo.