LSY-10050 equipo de la prueba de la eritromicina ELISA para la leche, miel, tejido

Eritromicina ELISA Test Kit

No. LSY-10050 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de eritromicina en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. La eritromicina en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para el anticuerpo anti de la eritromicina. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la eritromicina en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de la eritromicina se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,2 ppb

Temperatura de la incubación: 25℃

Tiempo de la incubación: 30min-15min

Límite de detección:

Leche cruda sobre 10ppb

Miel (método 1) sobre 4ppb

Miel (método 2) sobre 0.2ppb

Tejido sobre 15ppb

Nota: ppb=ng/mL o ng/g

Tarifa del reacción cruzado:

Eritromicina 100%

Tarifa de recuperación:

el 90%±30%

3. Componentes

• Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
• Solución estándar (1ml/bottle): 0ppb, 0.2ppb, 0.6ppb, 1.8ppb, 5.4ppb, 16.2ppb.
• 11X concentró la conjugación de la enzima (0,7 ml)
• Dilución conyugal de la enzima (7 ml)
• Substrato A (7 ml)
• Substrato B (7 ml)
• Pare la solución (7 ml)
• 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba (30 ml)
• 1× que redisuelve la solución (50 ml)

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: lector del microplate (450nm, 630nm), dispositivo del evaporador rotatorio/de la nitrógeno-sequedad, homogeneizador, oscilador, centrifugadora (4000g y arriba), balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), midiendo mide con una pipeta, la incubadora (25℃ ajustable), contador de tiempo
• Micropipettors: µL 20~200 µL monocanal y 100~1000, y µL del ocho-canal 30~300;
• Reactivo: Agua desionizada, ácido tricloroacético, NaOH, ácido clorhídrico, NaCl, Na₂ CO₃, NaHCO₃, metanol, acetato de etilo.

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

1) Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

• Solución del NaCl del 2%: pese NaCl 2.0g, añada 100ml desionizó el agua para disolverla y para mezclar uniformemente;
• 2:1 del NaCl Solution= del metanol-2%: tome el metanol 100ml, añada en la solución del NaCl de 50ml el 2% para disolverla y para mezclar uniformemente;
• Solución ácida tricloroacética del 1%: pese el ácido tricloroacético 5g, añada 500ml desionizó el agua al dissovle y la mezclan uniformemente;
• los 0.1M CB Solution: pese 4.66g Na₂ CO₃ y 0.5g NaHCO₃, añaden 500ml desionizaron el agua para disolverla y para mezclar uniformemente;
• solución del NaOH de los 0.05M: pese NaOH 1g, añada 500ml desionizó el agua para disolverla y para mezclar uniformemente;
• los 0.1M HCl Solution: tome el ácido clorhídrico 100ul, añada 10.9ml desionizó el agua, la mezclan uniformemente;
• Almacenador intermediario que se lava: 1 porción 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba + 19 porciones de agua desionizada

5,1 leche

• Recoja la muestra de la leche 1ml en el tubo de centrífuga del poliestireno 2ml, añada la solución ácida tricloroacética de 1ml el 1%, vórtice para 3min;
• Centrifugadora en 3000g antedicho en la temperatura ambiente (20 - ℃ 25) para 5min;
• Tome el líquido de la para arriba-capa 50ul en el tubo de centrífuga del poliestireno 2ml, añada 450ul que redisuelve la solución, vórtice para 1min;
• Tome a 50 el µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 20

5,2 miel (método 1)

1) Recoja la muestra de la miel 1.0±0.05g en el tubo de centrífuga del poliestireno 50ml;

2) Añada la solución del NaCl del metanol-2% 2ml, vórtice para 2min hasta que la miel se disuelva totalmente, centrifugadora en 3000g en la temperatura ambiente (20 - el ℃ 25) para 5min;

3) Tome a 100ul la solución brillante en el tubo de centrífuga del poliestireno 2ml, añada 900ul que redisuelve la solución;

4) Tome a 50 el µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 20

5,2 miel (método 2)

1) Recoja la muestra de la miel 2.0±0.05g en el tubo de centrífuga del poliestireno 50ml;

2) Añada la solución de los CB de 2ml los 0.1M, vórtice hasta muestra de la miel se disuelve, después añaden totalmente 6ml el acetato de etilo, sacudida para 5min;

3) Centrifugadora en 3000g en la temperatura ambiente (20 - ℃ 25) para 5min;

4) Tarde a para arriba-capa 3ml la fase orgánica en 10ml el tubo de cristal seco limpio, soplo para secarse en el baño de agua 50-60℃ por el nitrógeno;

5) Añada 0.5ml que redisuelve la solución, vórtice para 5min, mézclelo uniformemente;

6) Tome a 50 el µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 0,5

5,3 tejido

1) Recoja la muestra de tejido 1.0±0.05g en el tubo de centrífuga del poliestireno 50ml;

2) Añada la solución del NaOH de 4ml los 0.05M, vórtice para 5min hasta la muestra de tejido separada;

3) Centrifugadora en 4000g en la temperatura ambiente (20 - ℃ 25) para 5min;

4) Tome el líquido claro de la para arriba-capa 200ul, añada 750ul que redisuelve la solución y 50ul los 0.1M HCl Solution, el vórtice para 1min y la mezcla (si la muestra está demasiado nublada, por favor centrifuga uniformemente y analiza);

5) Tome a 50 el µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 25

6. Procedimientos de ELISA

Instrucciones

1. Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25).

2. Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso.

3. La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

4. Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

Procedimientos de la operación

• Saque todos los reactivo necesarios del equipo y del lugar en la temperatura ambiente (20 al ℃ 25) por lo menos 30 minutos. Observe que cada reactivo líquido se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar.
• Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2-8, no congelado.
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones.
• Preparación conyugal de la enzima: tome la conjugación concentrada 11X de la enzima de 1 porción, añada 10 porciones de dilución conyugal de la enzima, dilúyalas en el 1:10, consiga la conjugación lista para utilizar de la enzima.
• Añada 50µL de la muestra o la solución estándar para separar pozos duplicados, entonces añade la conjugación de la enzima, µL 50 cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 en la oscuridad por 30 minutos.
• Vierta el líquido fuera de microwell, añada 250 µL/well del almacenador intermediario que se lava por 15-30 segundos, repita tres a cuatro veces, entonces aleta de secarse (si hay las burbujas después del aleteo, las corta con las extremidades limpias).
• Coloración: añada la mezcla de 100 µL del substrato A y del substrato B en cada pozo (nota: el substrato A de la mezcla y el substrato B en el 1:1, la mezcla se deben utilizar en 10min, nunca envase del metal del uso o metal para revolver la solución, si no el substrato puede ser inválido.). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, e incube en el ℃ 25 por 15 minutos en la oscuridad para la coloración.
• Determinación: añada el µL 50 de la solución de la parada en cada uno bien (el color del substrato del azul a amarillear, significa que la parada tiene éxito). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo de 5 minutos).

7. Juicio del resultado

Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar de la eritromicina (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, así finalmente obteniendo la concentración de la eritromicina en la muestra.

8. Precauciones

• La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
• La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
• Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción uniformemente y lave el microplate a fondo, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
• La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.