Detección antibiótico del equipo de la prueba de LSY-10049 Chlortetracyline ELISA

Chlortetracyline ELISA Test Kit

No. LSY-10049 del catálogo
1. Principio
Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de Chlortetracyline en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. El Chlortetracyline en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para el anticuerpo anti de Chlortetracyline. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Chlortetracyline en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de Chlortetracyline se obtiene posteriormente.
 
2. Especificaciones técnicas
Sensibilidad: 0,2 ppb
Temperatura de la incubación: 25℃
Tiempo de la incubación: 30min-15min
Límite de detección:
Tejido sobre 3ppb
Tarifa del reacción cruzado:
Chlortetracyline 100%
Tetraciclinas el 80%
Oxytetracyline el 40%
Doxycycline el 8%
Tarifa de recuperación:
Tejido el 90±15%
 
3. Componentes

• Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
• 10× concentró la solución estándar (0.5ml/bottle): 0ppb, 2ppb, 6ppb, 18ppb, 54ppb
• Conjugación de la enzima (6 ml)
• Solución de funcionamiento del anticuerpo (6 ml)
• Substrato A (6 ml)
• Substrato B (6 ml)
• Pare la solución (7 ml)
• 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba (30 ml)
• 20× concentró la redisolución de la solución (10 ml)

 
4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: lector del microplate (450nm, 630nm), dispositivo del evaporador rotatorio/de la nitrógeno-sequedad, homogeneizador, oscilador, centrifugadora (4000g y arriba), balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), midiendo mide con una pipeta, la incubadora (25℃, 37℃, 60℃ ajustables), contador de tiempo
• Micropipettors: µL 20~200 µL monocanal y 100~1000, y µL de varios canales 30~300;
• Reactivo: agua desionizada

 
5. Tratamiento previo de la muestra
Instrucciones
Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:
1) Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.
Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

• 20× diluído concentró la redisolución de la solución con agua desionizada en el 1:19 (1 porción concentrada redisolviendo la solución + 19 porciones de agua desionizada).
• Almacenador intermediario que se lava: 1 porción 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba + 19 porciones de agua desionizada

5,1 tejido

• Tome 1± 0,01 g de la muestra de tejido homogeneizada en el tubo de centrífuga de 10 ml, añada 5 ml de agua desionizada, sacudida con el oscilador para 2min, centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (20 - el ℃ 25) por 10 minutos.
• Tome el sobrenadante 500ul, añada 500ul diluido redisolviendo la solución, sacuda con el oscilador para 10min;
• Tome a 50 el µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 12
 
6. Procedimientos de ELISA
Instrucciones
1. Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25).
2. Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso.

3. La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

4. Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.
Procedimientos de la operación

• Saque todos los reactivo necesarios del equipo y del lugar en la temperatura ambiente (20 al ℃ 25) por lo menos 30 minutos. Observe que cada reactivo líquido se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar.
• Diluya los 5 concentró la solución estándar por separado: tome 5 pedazos de tubo de centrífuga 2ml, marca 0,0.2, 0,6, 1,8, 5.4ppb por consiguiente, añada 900µL la solución de redisolución diluida en cada tubo, después añada la solución estándar concentrada cinco 10X en arriba 5 tubos por consiguiente, 100ul/tube. Los 5 diluyeron soluciones estándar serán: (0-0,0.2-2,0.6-6,1.8-18,5.4-54);
• Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2-8, no congelado.
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones.
• Añada 50µL de la muestra o la solución estándar para separar pozos duplicados, entonces añade la conjugación de la enzima, µL 50 cada pozo, después añade el µL 50 de la solución del anticuerpo en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 en la oscuridad por 30 minutos.
• Vierta el líquido fuera de microwell, añada 250 µL/well del almacenador intermediario que se lava por 15-30 segundos, repita tres a cuatro veces, entonces aleta de secarse (si hay las burbujas después del aleteo, las corta con las extremidades limpias).
• Coloración: añada la mezcla de 100 µL del substrato A y del substrato B en cada pozo (nota: el substrato A de la mezcla y el substrato B en el 1:1, la mezcla se deben utilizar en 10min, nunca envase del metal del uso o metal para revolver la solución, si no el substrato puede ser inválido.). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, e incube en el ℃ 25 por 15 minutos en la oscuridad para la coloración.
• Determinación: añada el µL 50 de la solución de la parada en cada uno bien (el color del substrato del azul a amarillear, significa que la parada tiene éxito). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo de 5 minutos).

 
7. Juicio del resultado
Determinación cuantitativa
Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,
 

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL
Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar de Chlortetracyline (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, así finalmente obteniendo la concentración de Chlortetracyline en la muestra.
 
8. Precauciones

• La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
• La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
• Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción uniformemente y lave el microplate a fondo, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
• La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

 
9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento
Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.
Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.
 
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