Kit de ensayo ELISA de anticuerpos para el diagnóstico del virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) en el ganado

Virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV)) Kit ELISA de anticuerpos

No de catálogo LSY-30010

1- Es muy breve.

La Primavera Verde^®El kit de prueba de anticuerpos del virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV Ab) se utiliza para la detección de anticuerpos del PRRSV en suero porcino.evaluación de las condiciones de inmunidad contra el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino en las explotaciones porcinasLa investigación epidemiológica del PRRSV.

2.Principio

La Primavera Verde^®El kit de ensayo PRRSV Ab ELISA está hecho de la placa de microtiter recubierta de antígeno, IgG-HRP anti-cerdo de cabra y otros reactivos.Aplica el principio de ELISA indirecto para evaluar los anticuerpos contra el PRRSV en suero porcinoEn el ensayo, el antígeno recubierto se combina con PRRSV-IgG en suero, luego se agrega IgG-HRP para unirse específicamente con el complejo de anticuerpos-antígenos en la microplaca.generará una cantidad de colorLa profundidad de color es relativa al contenido de PRRSV-IgG.

3. Componentes

4.Material requerido no suministrado

1 Lector de microplacas (longitud de onda doble: 450/630 nm).

2 Lavadora de microplacas.

3 micropipetas, ajustables (longitud de onda única de 1 a 100 ul,0.5-10 pulgadas, longitud de onda múltiple 30-300 pulgadas).

4 Caja de temperatura constante o caja de baño de agua.

5 Oscilador.

6 puntas desechables (10ul, 200ul)

7 Agua desionizada

5Requisito de muestra

1 Las muestras son de suero porcino, que debe recogerse sin bacterias. El tiempo de almacenamiento debe ser inferior a 1 semana a 2-8 °C, si es a largo plazo, debe mantenerse a -20 °C.

2 Evitar el uso de muestras con hemólisis severa, precipitados, contaminados por bacterias o suspensión proteica.

El EDTA, la heparina sódica y otros anticoagulantes no afectarán los resultados.

6Preparación

1) Para obtener los mejores resultados, los reactivos de ELISA deben mantenerse a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 30 minutos.

2) Diluir la muestra: Diluir la muestra con la solución del diluyente de la muestra a 40 veces. ((Habrá un cambio de color después de agregar la solución), la muestra diluida debe mezclarse uniformemente para obtener mejores resultados.

3) Preparación de la solución de lavado: diluir el tampón de lavado concentrado 20 × con agua desionizada 20 veces.

7.Procedimiento

1 Añadir muestra: extraer las placas recubiertas requeridas de acuerdo con la cantidad de muestra (se puede separar) y registrar la posición de la muestra en una hoja de trabajo.Conjunto de 2 pozos para el suero de control negativo y 2 pozos para el suero de control positivo, añadir suero de control negativo y positivo sin diluir a su pozo, 100 μL/pozo, respectivamente.(Puede hacerse tanto para ensayo de pozo único como para ensayo de pozo doble).

2 Mezclar suavemente para 10s,Incubación a los 37 años°Cdurante 30 minutos.

3 Retire la lámina adhesiva. Verter el líquido fuera de los pozos, añadir la solución de lavado en cada pozo completamente, estar estático durante unos 10 segundos, verter directamente. Repita 3 veces,Por última vez seco el papel absorbente..

4 Añadir 100 μL de enzima conjugada en cada pozo.

5 Placa de cubierta con nueva lámina adhesiva.Yo...Incubado en 37 °Cpara30 minutos.

6 Repita el paso 3 (lavado).

7 Añadir 100ul de sustrato en cada pozo, mezclar adecuadamente,Incubación durante 10Min en 37 °Cen la oscuridadcon una nueva lámina adhesiva.

Añadir 50 μL de solución de parada en cada pozo, mezclar suavemente durante 10 segundos y determinar el resultado.

9 Medir el valor de la DO con un fotómetro a 450 nm/630 nm.

8.Análisis ELISA

Se medirá el valor de OD de cada pozo, para que el ensayo sea válido deberán cumplirse las siguientes especificaciones: la media del control PRRS positivo debe ser igual o superior a 0.60, la media de control PRRS-negativo debe ser inferior a 0.15.

El resultado se juzgará por el valor S/P,

S/P=(OD de la muestra_{No incluidos}- El NC.el número)/( PCel número- El NC.el número), NCel númerosignifica la OD media del control negativo_{No incluidos}Valor en PCel númerosignifica la DO media del control positivo_{No incluidos}Valor

Si S/P≥0.2, es positivo; menor que 0.2, es negativo.

9Interpretación del resultado

1. La hemólisis severa, la fibra proteica en el suero de separación no es suficiente, que contiene eritrocitos, un precipitado, una muestra con bacterias puede conducir a un falso positivo.

2Los resultados negativos pueden ocurrir en cerdos individuales después de las vacunas debido a las diferencias individuales o la duración de la inmunidad.

3Los resultados positivos para el diagnóstico serológico y la investigación epidemiológica de los cerdos se combinarán con otros métodos y datos clínicos.

10. Límites del método de ensayo

El PRRSV-IgG puede utilizarse para evaluar el efecto de la vacuna contra el PRRSV y los indicadores de diagnóstico serológico de la infección por el virus del PRRSV, pero no puede distinguirlos,si desea distinguir los anticuerpos causados por la vacuna o la infección por virus silvestres, se debe combinar con datos clínicos, programas de inmunización, etc.

11. Desempeño del producto

1Especificidad: utilizar este kit para detectar suero de referencia, la tasa de cumplimiento alcanza el 100%.

2- Sensibilidad: puede alcanzar max. 1:5120.

3Precisión: CV (%) no superior al 8%.

4Estabilidad: almacenar a 2°C ∼ 8°C durante 12 meses o almacenar a 37°C durante 3 días, el resultado puede alcanzar los 3 estándares anteriores.

12. Precauciones y advertencias para los usuarios

1Este kit de prueba es adecuado para el diagnóstico in vitro.

2No utilice reactivos caducados, no mezcle reactivos de lotes diferentes.

3Leer cuidadosamente el manual antes de usar.

4Los desechos de experimentación deben ser tratados con esterilización por vapor a alta presión a 121 °C durante 30 minutos, o tratados con desinfectante de hipoclorito de sodio de 5,0 g/l durante 30 minutos, y luego desechados.

5. La placa de micropozo retirado del ambiente refrigerado debe ser equilibrada humedad para secar a temperatura ambiente, luego se puede abrir.Colocar la placa MicroWell no utilizada en una bolsa de papel seco y sellarla a 4 °CEl reactivo líquido no utilizado debe cubrir las tapas, almacenarse a 2-8 °C en la oscuridad con otros componentes del grupo.

6Si el tampón de lavado concentrado 20× parece cristalino, es normal, ponerlo a 37°C hasta disolverse.

7Se debe utilizar un Micropipettor para añadir la muestra y los reactivos, y a menudo probar su exactitud.

8Cuando se añade tampón de lavado, debe estar lleno pero sin desbordamiento, evitar la aparición de enzimas libres en la boca del pozo o la contaminación cruzada entre los pozos.

9La solución de stop es corrosiva, use una gran cantidad de agua para lavarse inmediatamente al tocar la piel o la ropa.

Especificación

Embalaje: 96 pozos por 2.

Fecha de caducidad: 12 meses.

Almacenamiento: Almacenamiento a 2 ~ 8 °C en la oscuridad, no congelación.