Enfermedad de Gumboro (IBD) Kit de prueba de anticuerpos del virus Enfermedad infecciosa del bursal elisa

Anticorpo VP2 contra el virus de la enfermedad infecciosa de las aves

(IBDV-VP2 Ab) El kit ELISA

No de catálogo LSY-30014

1. Introducción

Este kit se utiliza para detectar el virus de la Enfermedad Infecciosa Bursal Aviar (EIBV) Anticorpos neutralizantes en suero de pollo.para evaluar la condición de los anticuerpos por el virus de la enfermedad infecciosa de las aves, la vacuna VP2 en las granjas de pollos y ayudar al diagnóstico de pollos infectados serológicamente.

La proteína VP2 del virus de la enfermedad bursal infecciosa del pollo tiene un determinante antígeno de neutralización conformacional (discontinuo).Los estudios han encontrado que los anticuerpos contra este determinante del antígeno pueden proteger pasivamente a los pollos de la infección por el virus de la enfermedad bursal infecciosaEste kit utiliza un método ELISA competitivo, compuesto por la reacción de micro-placa recubierta con antígeno IBDV-VP2 de alta pureza, IgG anti-pollo marcado con peroxidasa de rábano picante y otros reactivos.El mecanismo de reacción es la unión del antígeno recubierto con IBDV-VP2-Ab en la muestra, y luego con el anticuerpo IgG antipollinario etiquetado por la enzima para formar un complejo "antigeno revestido + IBDV-VP2-Ab + anticuerpo IgG HRP antipollinario", añadir sustrato,Tendrá coloración por la reacción catalítica enzimáticaLa profundidad de color es proporcional a la cantidad de IBDV-VP2-Ab, cuando la reacción cromogénica de la muestra, los resultados detectados por el lector de microplacas exceden un valor umbral establecido, el resultado se considera positivo.,indicando la existencia de anticuerpos producidos por el sistema inmune o de una infección natural.

2.Los componentes del kit

3Materiales requeridos pero no proporcionados

1) Micropipettores y puntas desechables: 0,5μL~10μL,10μL~100μL,100μL~1000μL,1mL-10mL

2) Las puntas desechables

3) Incubadora a 37 °C

4) Botella de medición: 500 ml

5) Lector de microplacas de 96 pozos

6) Agua destilada o agua desionizada

7) Lavadora de botellas o microplacas

4Preparación de las muestras

Tomar sangre animal entera, hacer suero de acuerdo con los métodos regulares, el suero debe ser transparente, no tienen hemólisis.

5. Preparación del tampón de lavado

Antes de usar, devuelva el tampón de lavado a temperatura ambiente, si hay cristales salados, agite para que los cristales se disuelvan, luego use agua destilada o agua desionizada para diluirlo 10 veces.El tampón de lavado diluido puede conservarse durante una semana a 4 °C.

6Preparación de solución de trabajo de anticuerpos monoclonales VP2 (Preparación para uso inmediato)

Primero se calcula la cantidad requerida de solución de trabajo de anticuerpos monoclonales VP2, y luego se diluye el anticuerpo monoclonal VP2 concentrado 101X con dilución monoclonal a 1:101 (por ejemplo,900 uL de dilución monoclonal + 9 uL de anticuerpo monoclonal VP2 concentrado 101X, que puede satisfacer la cantidad de 10 pozos; debe diluir 100ul más por cada dilución para evitar la pérdida durante la adición de la muestra y causar líquido insuficiente).

7. Notas

1) Todos los reactivos deben ajustarse a la temperatura ambiente y agitarse uniformemente antes de usar, almacenarse a 2-8 °C después de usar.

2) No intercambiar los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.

3) El sustrato y la solución de parada pueden ser excitantes para la piel y los ojos, tenga cuidado al usar.

4) No exponga el sustrato a la luz y evite su contacto con antioxidantes.

5) Los pozos deben evitar la humedad o el contacto con el agua después de su apertura (Ponga la microplaca no utilizada de nuevo en el saco con deshidratador a 2 ~ 8 °C pronto)

6) Tratar todos los desechos razonablemente antes de verterlos para evitar la contaminación.

7) Siga estrictamente las instrucciones para obtener el mejor resultado. Todos los procedimientos, incluida la pipetación, el tiempo y el lavado, etc., deben ser precisos.

8Procedimiento ELISA

1) Se toma una microplaca pre-revestida (puede desbloquearse durante varios usos según la cantidad de muestra), se añade una muestra de suero de 10 μL a los pozos de muestreo, mientras tanto se establece 1 pozos para el control negativo.Control positivo y control en blanco bien separadosAñadir 10 μL de control negativo/positivo a sus pozos en consecuencia, y luego añadir inmediatamente 90 μLVP2 Solución de trabajo de anticuerpos monoclonalespara los pozos de muestreo y los pozos de control; sólo añadir 100 μl de dilución monoclonal en el pozos de control en blanco. Agitar suavemente (no derramar),

2) Cubrir el plato e incubar a 37°C durante 30 min.

3) Despejar el líquido de los pozos, añadir aproximadamente 350 μl de tampón de lavado diluido a cada pozo completamente, estático durante 1 minuto, verter.

4) Añadir 100 μL de Enzima Conjugado a cada pozo, cubrirlo e incubar a 37°C durante 30 min.

5) Repita el paso 3 (lavado).

6) Añadir 50 μL de sustrato A y luego de sustrato B (50 μL) a cada pozo, mezclar adecuadamente, cubrir y reaccionar durante 10 minutos a 37 °C en la oscuridad.

7) Añadir 50 μL de solución de parada en cada pozo y medir el resultado en 10 min.

9Resultados

Establecer cero para el pozo en blanco y probar el valor de A450 nm (630 nm como referencia) en el lector de microplacas.

Para que el ensayo sea válido:

El valor OD del control positivo (P) / el valor OD del control negativo (N) < 0.7;

Si el ensayo es inválido, la operación está en duda, volver a ensayar y observar cuidadosamente todos los reactivos.

Método de cálculo:

Valor OD de las muestras/valor OD del control negativo = valor S/N

Juez de resultados:

S/N ≥ 07, negativo;

S/N < 0.7Eso es.

Especificaciones:96*2 pozos por equipo.

Fecha de caducidad:- 12 meses. - ¿Qué es eso?

El almacenamiento:Almacenamiento a 2-8°C, en la oscuridad.

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