Detección del síndrome de caída de huevo en el kit ELISA de anticuerpos EDS76 aviares

Kit ELISA de anticuerpos EDS76 para aves

No de catálogo LSY-30015

1. Uso

El kit ELISA de anticuerpos para el virus de la síndrome de caída de huevo 76 (EDS76) se utiliza para detectar anticuerpos para el virus EDS76 aviar en suero de pollo,para evaluar la condición de los anticuerpos por la vacuna Avian EDS76 en las granjas de pollos y ayudar al diagnóstico de pollos infectados serológicamente.

2Principio.

El kit de ELISA de anticuerpos aviares EDS76 se basa en un ensayo inmunológico enzimático indirecto (ELISA indirecto).El antígeno EDS76 purificado se recubre en placas.después de la incubación, si la muestra de suero contiene anticuerpos específicos contra el virus EDS76, se unirán al antígeno recubierto en placas.Luego añadir un enzima específico conjugadoDespués de la incubación y el lavado, desechar el conjugado enzimático no combinado; añadir el sustrato TMB.añadir solución de parada, medido por un espectrofotómetro (450 nm).

3.Reactivos

4.Materiales requeridos pero no suministrados

1) Micropipettores y puntas desechables: 0,5 μL~10 μL,10 μL~100 μL,100 μL~1000 μL

2) Las puntas desechables

3) Incubadora a 37 °C

4) Botella de medición: 500 ml

5) Lector de microplacas de 96 pozos

6) Agua destilada o agua desionizada

5Preparación de las muestras

Tomar sangre animal entera, hacer suero de acuerdo con los métodos regulares, el suero debe ser transparente, no tienen hemólisis.

6. Preparación del tampón de lavado

Antes de usar, devuelva el tampón de lavado a temperatura ambiente, si hay cristales salados, agite para que los cristales se disuelvan, luego use agua destilada o agua desionizada para diluirlo 10 veces.El tampón de lavado diluido puede conservarse durante una semana a 4 °C.

7. Dilución de la muestra

En la placa de dilución del suero, diluir el suero a 1:100 con dilución de la muestra (por ejemplo: 297μL de dilución de la muestra + 3μL de suero))

Nota: el control negativo y el control positivo no necesitan diluir.Agitar uniformemente la muestra antes de agregarla.

8. Notas

1) Todos los reactivos deben ajustarse a temperatura ambiente, ponerlos a temperatura ambiente durante al menos 1 hora y agitarlos uniformemente antes de usar, conservarlos a 2-8 °C después de usar.

2) Las puntas desechables deben sustituirse para cada muestra cuando se aspiren muestras adicionales.

3) No intercambiar los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.

4) La solución de sustrato y parada puede ser excitante para la piel y los ojos, tenga cuidado al usarla.

5) No exponga el sustrato a la luz y evite su contacto con antioxidantes.

6) Los pozos deben evitar la humedad o el contacto con el agua después de la apertura (Ponga la microplaca no utilizada de nuevo en la bolsa con desecante a 2 ~ 8 ° C pronto)

7) Tratar todos los residuos razonablemente antes de verterlos para evitar la contaminación.

8) Siga estrictamente las instrucciones para obtener el mejor resultado. Todos los procedimientos, incluida la pipetación, el tiempo y el lavado, etc., deben ser precisos.

9) La placa de dilución del suero es desechable, no se utilice por segunda vez; su volumen máximo es de 300μL/pozo.

9Procedimiento ELISA

1) Se toma una microplaca pre-revestida (se puede abrir durante varias veces de uso según la cantidad de muestra), se añade 100 μL de suero diluido al pozo de muestra, mientras se pone 1 pozo para el control negativo,2 pozos para el control positivo por separado. añadir 100 μl de suero de control negativo/positivo a sus pozos en consecuencia. agitar suavemente, no desbordar, cubrir la placa con película adhesiva,Incubación a los 37 años°Cdurante 30 minutos.

2) Descifrar la película adhesiva, verter el líquido fuera de los pozos, añadir 250 μL de solución de lavado diluida a cada pozo, luego verter. Repita 4-6 veces, en el último golpear para secar en papel absorbente.

3) Añadir 100μL de enzima conjugada a cada pozo, agitar suavemente, cubrir la placa con película adhesiva yIncubación a los 37 años°Cdurante 30 minutos.

4) Repita el paso 2 (lavado).

5) Añadir 100μL de sustrato a cada pozo, mezclar adecuadamente, cubrir la placa con película adhesiva yreaccionar durante 10 minutos en la oscuridad a 37°Cen la oscuridad.

6. Añadir 50 μl de solución de parada en cada pozo y medir el resultado en 10 min.

10Resultados

Se leerá el valor de la DO con el lector de microplacas a 450 nm (630 nm como referencia).

Para que el ensayo sea válido:

El valor de OD del control negativo (N) < 0.2, mientras que el valor de OD del control positivo (P) es de ¥0.4.

Método de cálculo:

Valor OD de las muestras/valor medio OD del control positivo = valor S/P

Juez de resultados:

S/P ≥ 035Eso es.

S/P < 0.35, negativo;

Especificaciones:96*2 pozos por equipo.

Fecha de caducidad:- 12 meses. - ¿Qué es eso?

El almacenamiento:Almacenamiento a 2-8°C, en la oscuridad.

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