Prueba de elisa de aves de corral con kit de diagnóstico de anticuerpos IgG de bronquitis infecciosa

Kit de ELISA de anticuerpos contra el virus de la bronquitis infecciosa (VIB)

No de catálogo LSY-30017

1. Uso

Este kit se utiliza para detectar anticuerpos contra el virus de la bronquitis infecciosa (VIB) en suero de pollo.para evaluar la condición de los anticuerpos por la vacuna contra la bronquitis infecciosa en las granjas de pollos y ayudar al diagnóstico de pollos infectados serológicamente.

2Principio.

El kit de ELISA de anticuerpos contra el virus de la bronquitis infecciosa (VIB) se basa en un inmunoensayo enzimático indirecto (ELISA indirecta).El antígeno se recubre en placas.Cuando una muestra de suero contiene anticuerpos específicos contra el virusLavar los anticuerpos no unidos y otros componentes. Luego agregar un conjugado de enzima específica. Después de la incubación y el lavado, agregar el sustrato TMB.Una reacción colorimétrica aparecerá, medido por un espectrofotómetro (450 nm).

3. Reactivos

4.Materiales requeridos pero no suministrados

1) Micropipettores y puntas desechables: 0,5 μL~10 μL,10 μL~100 μL,100 μL~1000 μL

2) Incubadora a 37 °C

3) Botella de medición: 500 ml

4) Lector de microplacas de 96 pozos

5) Agua destilada o agua desionizada

6) Lavadora de botellas o microplacas

5Preparación de las muestras

Tomar sangre animal entera, hacer suero de acuerdo con los métodos regulares, el suero debe ser transparente, no tienen hemólisis.

6. Preparación del tampón de lavado

Antes de usar, devuelva la solución de lavado a temperatura ambiente, si hay cristales salados, agite para que los cristales se disuelvan, luego use agua destilada o agua desionizada para diluirla 10 veces.La solución de lavado diluida puede conservarse durante una semana a 4 °C.

7. Dilución de la muestra

En la placa de dilución del suero, diluir el suero a 1:101 con dilución de la muestra (por ejemplo: 200μL de dilución de la muestra + 2μL de suero))

Nota: el control negativo y el control positivo no necesitan diluir.Agitar uniformemente la muestra antes de agregarla.

8. Notas

1) Todos los reactivos deben ajustarse a temperatura ambiente y agitarse uniformemente antes de usar, conservarse a 2-8 °C después de usar.

2) No intercambiar los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.

3) El sustrato y la solución de parada pueden ser excitantes para la piel y los ojos, tenga cuidado al usar.

4) No exponga el TMB (Substrato B) a la luz y evite su contacto con antioxidantes.

5) Los pozos deben evitar la humedad o el contacto con el agua después de su apertura (Ponga la microplaca no utilizada de nuevo en el saco con deshidratador a 2 ~ 8 °C pronto)

6) Tratar todos los desechos razonablemente antes de verterlos para evitar la contaminación.

7) Siga estrictamente las instrucciones para obtener el mejor resultado. Todos los procedimientos, incluida la pipetación, el tiempo y el lavado, etc., deben ser precisos.

8) La placa de dilución del suero es desechable, no se utilice por segunda vez; su volumen máximo es de 300 μL/pozo.

9Procedimiento ELISA

1) Se toma una microplaca pre-revestida (puede descifrarse durante varias veces de uso según la cantidad de muestra), se añade 100 μL de suero diluido a un pozo, mientras tanto se ponen 1 pozo para el control negativo,Puertos de control positivo y de control en blanco por separado. añadir 100 μl de control negativo/positivo a sus pozos, añadir sólo 100 μl de dilución de muestra en los pozos de control en blanco. agitar suavemente (no derramar),

2) Cobertura yIncubación a los 37 años°Cdurante 30 minutos.

3) Derramar el líquido de los pozos, añadir aproximadamente 350 μL de solución de lavado diluida a cada pozo completamente, estático durante 1 min, verter. Repita 3 veces, luego golpear para secar en papel absorbente.

4) Añadir 100 μL de Enzima Conjugado a cada pozo, cubierta yIncubación a los 37 años°Cdurante 30 minutos.

5) Repita el paso 3 (lavado).

6) Añadir 50 μL de sustrato A y luego de sustrato B (50 μL) a cada pozo, mezclar adecuadamente, cubrir yreaccionar durante 10 minutos a 37°Cen la oscuridad.

7) Añadir 50 μL de solución de parada en cada pozo y medir el resultado en 10 min.

10Resultados

Establecer cero para el pozo en blanco y probar el valor de A450 nm (630 nm como referencia) en el lector de microplacas.Las condiciones para que el ensayo sea tenable son que el valor de los pozos de control positivo ≈ A450 nm sea igual o superior a 0..5, y el valor de los pozos de control negativos A450nm es inferior a 0.15Si el ensayo es inválido, la operación está en duda, volver a probar y observar todos los reactivos cuidadosamente.

Si el valor de la muestra A450 es superior a 0,15+ absorbancia de la media del control negativo, se considera positivo; y si es inferior a 0,15+ absorbancia de la media del control negativo, negativo.Si la absorbancia media del control negativo es inferior a 0.05, se calculará como 0.05

Especificaciones:96 pozos por kit o 96*2 pozos por kit

Fecha de caducidad:- 12 meses. - ¿Qué es eso?

El almacenamiento:Almacenamiento a 2-8°C, en la oscuridad.

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