LSY-10047 Nitroimidazoles ELISA Test Kit para el tejido, la miel, la leche y el huevo

Nitroimidazoles ELISA Test Kit

No. LSY-10047 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de Nitroimidazoles en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. El Nitroimidazoles en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos antis de Nitroimidazoles. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Nitroimidazoles en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de Nitroimidazoles se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,1 ppb

Límite de detección

Cerdo, pollo sobre 0.5ppb

Miel sobre 0.1ppb

Leche cruda (método 1) sobre 1ppb

Leche cruda (método 2) sobre 0.2ppb

Huevo crudo (método 1) sobre 0.5ppb

Huevo crudo (método 2) sobre 1.5ppb

Huevo cocinado sobre 1ppb

Nota: ppb= ng/ml o ng/g

Tarifa del reacción cruzado

Metronidazole 100%

Hidróxido Nitroimidazoles el 47%

Dimetridazole hidroximetílico el 53%

Tinidazole el 2%

Dimetridazole el 800%

Ornidazole el 5%

Tarifa de recuperación

el 90±30%

3. Componentes

• Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
• solución estándar 6× (1mL cada uno): 0ppb, 0.1ppb, 0.3ppb, 0.9ppb, 2.7ppb y 8.1ppb
• Conjugación de la enzima (12 ml) 1 botella
• Solución de funcionamiento del anticuerpo (6mL) 1 botella
• Solución del substrato A (6 ml) 1 botella
• Solución del substrato B (6 ml) 1 botella
• Pare la solución (6 ml) 1 botella
• 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba (30 ml) 1 botella
• Redisolviendo la solución (50 ml) 1 botella
• Solución del tratamiento de la muestra de tejidoⅠ (polvo, opcionales secos) 1 botella
• Solución del tratamiento de la muestra de la leche (10ml, opcionales) .................................. 1 botella

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: el lector del microplate (450nm, 630nm), impresora, homogeneizador, dispositivo de la nitrógeno-sequedad, vórtice, coctelera, centrifugadora (3000g y arriba), midiendo mide con una pipeta, la balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora (4℃, 25℃), baño de agua, contador de tiempo;
• Micropipettors: µL 20-200 µL monocanal, 100-1000, y µl del ocho-canal 30~300;
• Reactivo (AR): Ácido clorhídrico, NaOH, acetato de etilo, n-hexano.

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

• Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
• Antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

• Solución del tratamiento de la muestra de tejidoⅠ: disuelva el polvo seco con 200ml desionizó el agua (pregunte a proveedor si es necesario).
• Solución del tratamiento de la muestra de tejidoⅡ: acetato de etilo de la mezcla 400ml y n-hexano 100ml.
• Almacenador intermediario que se lava: 1 porción 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba + 19 porciones de agua desionizada.
• NaOH de 0,1 M: disuelva NaOH 0.8g en 200ml desionizó el agua.
• ácido clorhídrico del 1M: Pese el ácido clorhídrico 1ml, añada 11ml desionizó el agua para disolver.

5,1 preparación de las muestras

a) Tejido (pollo, cerdo)

1) Pese 2 g de la muestra homogeneizada (tejido) en el tubo de centrífuga plástico 50ml;

2) Añada la solución del tratamiento de la muestra de tejido 2mlⅠ, sacuda fuertemente para 1min (o utilice el vórtice para 30s), haciendo la mezcla del Ⅰ de la solución del tratamiento de la muestra de tejido con la muestra totalmente;

3) Añada la solución, la sacudida o el vórticeⅡ del tratamiento de la muestra de tejido 8ml para 3min (nota: si hay la coctelera en el laboratorio, sacudida para 1min, después lo puso en coctelera en 300rpm en 25℃ para 10min);

4) Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

5) Tome el sobrenadante 4ml en un tubo de centrífuga de cristal limpio;

6) Soplo a secarse en el baño de agua 50-60℃ por el dispositivo de la nitrógeno-sequedad;

7) Añada el n-hexano 2ml, después 0.5ml que redisuelven la solución, sacuden fuertemente para 1min (o utilice el vórtice para 30s);

8) Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

9) Deseche el n-hexano de la para arriba-capa y la capa de la impureza de la medio-capa;

10) Tome el líquido de la abajo-capa 50ul para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 0,5

b) Miel

1) Pese la muestra de la miel de 2± 0,05 g en el tubo de centrífuga plástico 50ml;

2) Añada el NaOH de 2ml los 0.1M, sacuda fuertemente para 1min (o utilice el vórtice para 30s) para disolver;

3) Añada el acetato de etilo 4ml, la sacudida fuertemente para 5min (o el vórtice para 3min), haciendo el contacto de la muestra y del acetato de etilo totalmente;

4) Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

5) Tome el sobrenadante 2ml en el tubo de vidrio 10ml (nota: no tarde la fase del agua de la abajo-capa), soplo para secarse en el baño de agua 50-60℃ por el dispositivo de la nitrógeno-sequedad;

6) Añada 0.5ml que redisuelve la solución, sacuda fuertemente para 2min (o utilizar el vórtice para 1min);

7) Tome el líquido de la abajo-capa 50ul para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 0,5

c) leche cruda

Método 1

1) Tome la leche cruda recogida, deshielo y volver a la temperatura ambiente para 30min antedicho;

2) Las extremidades puestas en abajo-capa de leche cruda, sacan la muestra 1ml en el tubo de centrífuga 2ml (nota: no tome la crema de la para arriba-capa);

3) Añada 50ul el 1M HCl, sacuda fuertemente para 1min (o el vórtice para 30s);

4) Centrifugadora en sobre 4000 g en la temperatura ambiente para 10min;

5) Tome el líquido claro de la para arriba-capa 100ul en otro tubo de centrífuga (no tome la crema de la para arriba-capa), entonces añada 400ul que redisuelve la solución, sacuda fuertemente para 1min (o el vórtice para 30s);

6) Tome 50ul líquido para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 5

Método 2

1) Tome la leche cruda recogida, deshielo y volver a la temperatura ambiente para 30min antedicho;

2) Las extremidades puestas en abajo-capa de leche cruda, sacan la muestra 2ml en el tubo de centrífuga 50ml (nota: no tome la crema de la para arriba-capa);

3) Añada la solución del tratamiento de la muestra de la leche 100ul, después añada el acetato de etilo 6ml, sacuda fuertemente para 5min (o el vórtice para 1min);

4) Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

5) Tome el líquido claro en otro tubo de centrífuga de cristal limpio, soplo de la para arriba-capa 1.5ml para secarse en el baño de agua 50-60℃ por el dispositivo de la nitrógeno-sequedad;

6) Añada el n-hexano 1ml, después añada 0.5ml que redisuelve la solución, sacuda fuertemente para 1min (o el vórtice para 30s);

7) Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

8) Deseche el n-hexano de la para arriba-capa y la capa de la impureza de la medio-capa;

9) Tome el líquido de la abajo-capa 50ul para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 1

d) Huevo crudo

Método 1

1) Recoja a 1ml la muestra del huevo entero en el tubo de centrífuga plástico 50ml;

2) Añada NaOH de 1ml los 0.1M, acetato de etilo 8ml, sacuda fuertemente para 5min (o el vórtice para 3min), haciendo el contacto de la muestra y del acetato de etilo totalmente;

3) Centrifugadora en 3000g antedicho en la temperatura ambiente para 5min;

4) Tome el sobrenadante 4ml en un tubo de centrífuga de cristal limpio (nota: no tarde la fase del agua de la abajo-capa); Soplo a secarse en el baño de agua 50-60℃ por el dispositivo de la nitrógeno-sequedad;

5) Añada 0.5ml que redisuelve la solución, 1ml n-hexano, sacudida fuertemente para 2min (o utilice el vórtice para 1min);

Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

6) Deseche el n-hexano de la para arriba-capa y la capa de la impureza de la medio-capa;

7) Tome el líquido de la abajo-capa 50ul para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 1

Método 2

1) Recoja la muestra 1ml en el tubo de centrífuga 2ml;

2) Añada 100ul el 1M HCl, sacuda fuertemente para 1min (o utilice el vórtice para 30s);

3) Centrifugadora en 4000g antedicho en la temperatura ambiente para 10min;

4) Tome el líquido claro de la para arriba-capa 100ul en otro tubo de centrífuga de cristal limpio, añada 400ul que redisuelve la solución, sacuda fuertemente para 1min (o utilizar el vórtice para 30s);

5) Tome 50ul líquido para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 5

e) Huevo cocinado

1) Tome 1ml cocinó la muestra del huevo en el tubo de centrífuga plástico 50ml;

2) Añada NaOH de 1ml los 0.1M, acetato de etilo 8ml, sacuda fuertemente para 5min (o el vórtice para 3min), haciendo el contacto de la muestra y del acetato de etilo totalmente;

3) Centrifugadora en 3000g antedicho en la temperatura ambiente para 5min;

4) Tome el sobrenadante 2ml en el tubo de centrífuga de cristal 10ml (nota: no tarde la fase del agua de la abajo-capa); Soplo a secarse en el baño de agua 50-60℃ por el dispositivo de la nitrógeno-sequedad;

5) Añada 0.5ml que redisuelve la solución, 1ml n-hexano, sacudida fuertemente para 2min (o utilice el vórtice para 1min); Centrifugadora en sobre 3000 g en la temperatura ambiente para 5min;

6) Deseche el n-hexano de la para arriba-capa y la capa de la impureza de la medio-capa;

Tome el líquido de la abajo-capa 50ul para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 2

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

1) Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;

2) Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;

3) La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en ELISA los procedimientos;

4) Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

• Traiga el equipo de la prueba al minuto 30 de la temperatura ambiente (℃ 20-25) por lo menos, observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar, ponga las tiras micro-bien requeridas en marcos de la placa. Reselló el microplate inusitado, tienda en el ℃ 2-8, no congelado.
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces, registran sus posiciones.
• Añada el µL 50 de la muestra o de la solución estándar en pozos duplicados separados; entonces añada 50 el µL de la solución de funcionamiento del anticuerpo en cada pozo, mezcla suavemente sacudiendo la placa manualmente. Selle el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 4 para 60min en oscuridad.
• Vierta el líquido fuera del microwell, aleta para secarse en el papel absorbente, añada 250 µL/well del almacenador intermediario que se lava para lavar el microplate para 15-30 s, después saque y agite para secarse con el papel absorbente, repita 3-4 veces. (Si hay las burbujas después de agitar, las cortó con las extremidades limpias).
• Añada la conjugación de la enzima 100ul, mezcla suavemente sacudiendo la placa manualmente (después de placa del lavado, no la ponga aparte para a). Selle el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 para 20min en oscuridad. Lavado como paso 4.
• Coloración: añada la mezcla 100ul de solución del substrato A y de solución del substrato B en cada pozo (nota: la solución del substrato A de la mezcla y la solución del substrato B en el 1:1, utilizan la mezcla en 10min, no utilizan el metal para contener o para revolver, para evitar el substrato inválido). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, sello que el microplate con la membrana de la cubierta entonces incuba en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración.
• Determinación: añada 50 que el µL del para la solución en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Parada con éxito cuando color del substrato del azul a amarillear. Recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo de 5 minutos.

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados: primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de Nitroimidazoles.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) de Nitroimidazoles se puede obtener de comparar el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, el valor del OD de soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.1ppb, 1,415 para 0.3ppb, 0,74 para 0.9ppb, 0,313 para 2.7ppb, 0,155 para 8.1ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 2,7 a 8.1ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0,1 a 0.9ppb.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción se obtienen para el valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de la solución estándar y los valores del semilogarithm de la solución estándar de Nitroimidazoles (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, finalmente obteniendo la concentración de Nitroimidazoles en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software).

8. Precauciones

• La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
• La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable; Continúe tan al paso siguiente inmediatamente después del lavado.
• Mézclese uniformemente, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
• La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversas porciones para utilizar.
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La solución estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) de menos de 0,5 indica su degeneración.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.