Diagnóstico de la enfermedad del mono Kit ELISA de anticuerpos contra la malaria del mono

Kit ELISA de anticuerpos contra la malaria en simios

1.Principio

El antígeno específico de ingeniería genética se recubre en una placa de microtiter.reacciona con el complejo anticuerpo-antígeno y genera un nuevo sustratoLa adición de solución de TMB conduce a un cambio de color, y se detectan anticuerpos anti-SM en el suero.

2.Componentes

1) Microcisterna recubierta con antígeno 1 pieza (96 pozos)

2) Substrato A 1 frasco ((7 ml)

3) Substrato B 1 botella ((7 ml)

4) Conjugado enzimático 1 botella ((12 ml)

5) Solución de diluyente de muestra 1 frasco ((12 ml)

6) Solución de parada 1 frasco ((7 ml)

7) Suero de control positivo 1 frasco ((1 ml)

8) Suero de control negativo 1 frasco ((1 ml)

9) Membrana de cubierta 1 pieza

10) 20 veces el tampón de lavado 1 frasco ((50 ml)

11) Manual de trabajo 1

12) Desicante para bolsas para automóviles 1 juego

3Procedimiento ELISA

1) Se extraen todos los reactivos a temperatura ambiente ((18-25°C) durante al menos 30 min. y se diluye 20 veces el tampón de lavado con agua desionizada hasta 1000 ml, se agita adecuadamente para su uso.

2) Sacar la microplaca de la bolsa, colocar el pozo de control en blanco, añadir únicamente el diluyente de la muestra, colocar 2 pozos para el control negativo y añadir 100 μL de suero de control negativo.se colocan 2 pozos para el control positivo y se añade 100 μL de suero de control positivo; otros pozos, añadir 100 μL de diluyente de muestra,primero añadir 10 μL de suero de ensayo, agitar adecuadamente y generar un color azul-verde, poner la microplata en el vórtice para mezclar durante 5-10 s,Sella el microcubo con una membrana de cubierta., microondas sin sellar.

3) Incubar la microplaca a 37 °C durante 30 minutos, verter líquido fuera del microondas, lavar 5 veces con tampón de lavado, colocar durante 20-30 s cada vez, abrir para secar en papel absorbente.

4) Añadir 100 μL de enzima conjugada a cada pozo, sellar la microplaca con membrana de cubierta, continuar como se describe en 3.

5) Añadir 50 μL de sustrato A y 50 μL de sustrato B a cada pozo, agitar uniformemente e incubar a 37 °C a oscuras durante 20 minutos, añadir 50 μL de solución de parada a cada pozo.

6) Establecer el lector de microplacas a 450 nm, ajustar el pozo en blanco como 0, determinar el valor de cada pozo A. También determinar a doble longitud de onda 450/630 nm, no ajustar 0.