Kit de detección de ELISA de anticuerpos NSP 3ABC para la fiebre aftosa porcina

Kit de pruebas ELISA de anticuerpos contra la fiebre aftosa porcina 3ABC

No de catálogo LSY-30003
1. Uso
La Primavera Verde^®El kit de ensayo ELISA 3ABC del virus de la fiebre aftosa porcina se utiliza para detectar cualitativamente el anticuerpo 3ABC-IgG no estructural de la fiebre aftosa porcina tipo O en suero porcino.se utiliza para distinguir los anticuerpos contra la fiebre aftosa porcina entre la infección por virus silvestre y los producidos por la vacuna inactivada.
 
2Principio.
En el kit de ensayo se utiliza una placa de microtiter recubierta con el producto de expresión génica no estructural 3ABC de la fiebre aftosa porcina, se añade el suero de control diluido y la muestra de suero, después de la incubación.si hay anticuerpos específicos no estructurales 3ABC contra la fiebre aftosa porcina en la muestra, se combinará con el antígeno recubierto en la placa, después de lavar y eliminar los anticuerpos no unidos y otros componentes; luego añadir conjugado de enzimas, unión específica con el complejo antígeno-anticuerpo en la placa;después de lavar para eliminar el conjugado enzimático no unido, añadir el sustrato TMB, formar el producto azul por reacción enzimática, detener por 2M H₂Así que₄, se leerá el valor OD de cada pozo con el lector ELISA a una longitud de onda doble de 450/630 nm, el valor OD reflejará el nivel de anticuerpos 3ABC en suero porcino.
 
3.Los componentes del kit

Nota: no mezcle los reactivos usados de diferentes lotes.
 
4Materiales requeridos pero no proporcionados
1) Lector de microplacas (longitud de onda doble: 450/630 nm).
2) Micropipeta de precisión (un canal de 1 a 100 ul,0.5-10ul, multicanal 30-300ul)
3) Caja de temperatura constante o caja de baño de agua.
4) Oscilador.
5) Las puntas desechables (10ul, 200ul)
6) Agua desionizada
 
5Requisito de muestra
1) Las muestras son de suero porcino, que debe recogerse sin bacterias. El tiempo de almacenamiento debe ser inferior a 1 semana a 2-8 °C, si es a largo plazo, debe mantenerse a -20 °C.
2) Evite utilizar las muestras con hemólisis severa, precipitados, contaminados por bacterias o suspensión proteica.
3) El EDTA, la heparina sódica y otros anticoagulantes no afectarán los resultados.
 

6Preparación
1) Para obtener los mejores resultados, los reactivos de ELISA deben mantenerse a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 30 minutos.
2) Diluir la muestra: diluir la muestra con el diluyente de la muestra a 40 veces. (por ejemplo: suero de 5ul + diluyente de la muestra de 195ul).
3) Preparación de la solución de lavado: diluir 20 veces el tampón de lavado concentrado con agua desionizada (por ejemplo:50 ml de tampón de lavado 20 × concentrado + 950 ml de agua desionizada) Es normal si hay cristalización en el tampón de lavado 20 × concentrado, poner a 37°C hasta que se disuelva por completo.
 
7Procedimiento
1) elAñadir muestra:Sacar las placas recubiertas necesarias (pueden separarse) según la cantidad de muestra y registrar la posición de la muestra en una hoja de trabajo.añadir suero de control negativo sin diluir, 2 pozos para el control positivo, añadir suero de control positivo no diluido, 100μL/pozo (está bien no establecer el control en blanco).100μL cada una ((Tanto el ensayo de pozo único como el de pozo doble están bien).
2) elIncubación:Mezclar suavemente, cubrir yIncubación a los 37 años°Cdurante 30 minutos.
3) elPlato de lavado:Retire el papel adhesivo. Verter el líquido fuera de los pozos, añadir el tampón de lavado diluido en cada pozo completamente, estar estático durante 10s, verter. Repita 3 veces, en la última vez pal para secar en papel absorbente.
4) elAñadir el conjugado de enzimas:Añadir 100 μL de enzima conjugada en cada pozo.
5) Las demásIncubación:Placa de cubierta con nueva lámina adhesiva.Incubación a los 37 años°Cdurante 30 minutos.
6) elPlato de lavado:Repita el paso 3.
7) elAñadir sustrato:Añadir sustrato 100ul en cada pozo, mezclar adecuadamente,Incubación durante 10 minutos a 37 °C°Cen la oscuridad.
8) elDetener la reacción:Añadir 50 μl de solución de parada en cada pozo, mezclar suavemente y determinar el resultado.
9)Lea los resultados:Se medirá el valor de OD de cada pozo con un lector ELISA a doble longitud de onda de 450 nm/630 nm.
 
8Resultados
Para que el ensayo sea válido, el valor medio de OD de los pozos de control positivo debe ser igual o superior a 0.6, y el valor medio de OD de los pozos de control negativos es inferior a 0.15De lo contrario, la prueba es inválida, necesitamos otra prueba.
El resultado se juzgará por el valor S/P,
S/P=(Muestra OD450/630- NCel número)/( PCel número- El NC.el número), NCel númerosignifica el valor medio de OD450/630 del control negativo, PCel númerosignifica el valor medio de OD450/630 del control positivo
Si S/P≥0.3, es positivo; menor que 0.3, es negativo.
 
9Interpretación del resultado

1) Hemólisis severa, la fibra proteica en el suero no es suficiente, contiene eritrocitos, un precipitado, una muestra con bacterias puede dar un falso positivo.

2) Los resultados negativos pueden ocurrir en cerdos individuales después de las vacunas debido a diferencias individuales o duración inmune.

3) Resultados positivos para el diagnóstico serológico y la investigación epidemiológica de los cerdos que se combinarán con otros métodos y datos clínicos.
 
10. Desempeño del producto
1) Especificidad: para analizar 30 sueros de control negativo, sin falsos positivos.
2) Sensibilidad: para evaluar 30 sueros de control positivo, ningún negativo.
3) Precisión: CV ((%) no superior al 15% ((n=10)
4) Estabilidad: Conservar a 2°C ≈ 8°C durante 12 meses o a 37°C durante 6 días, el resultado puede alcanzar los 3 estándares anteriores.
 
11. Precauciones y advertencias para los usuarios

1Este kit de prueba es sólo para uso de investigación.

2. Use guantes y ropa de trabajo cuando opere, trate el kit de prueba por contener material infeccioso.

3Los desechos de experimentación deben ser tratados con esterilización por vapor a alta presión a 121 °C durante 30 minutos, o tratados con desinfectante de hipoclorito de sodio de 5,0 g/l durante 30 minutos, y luego desechados.

4. La placa de micropozo retirado del ambiente refrigerado debe ser equilibrada humedad para secar a temperatura ambiente, luego se puede abrir.Colocar la placa MicroWell no utilizada en una bolsa de papel seco y sellarla a 4 °CEl reactivo líquido no utilizado debe cubrir las tapas, almacenarse a 2-8 °C en la oscuridad con otros componentes del grupo.

5Si el tampón de lavado concentrado 20× parece cristalino, es normal, ponerlo a 37°C hasta disolverse.
6Se debe utilizar un Micropipettor para añadir la muestra y los reactivos, y a menudo probar su exactitud.

7Cuando se añade tampón de lavado, debe estar lleno pero sin desbordamiento, evitar la aparición de enzimas libres en la boca del pozo o la contaminación cruzada entre los pozos.

8La solución de stop es corrosiva, use una gran cantidad de agua para lavarse inmediatamente al tocar la piel o la ropa.
Especificaciones:96 pozos por 2.
Fecha de caducidad:- 12 meses. - ¿Qué es eso?
El almacenamiento:Conservar a una temperatura de entre 2 y 8 °C, en la oscuridad,No hay congelación.
Fecha de producción:En el embalaje exterior del kit de ensayo.
La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

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