Kit de ensayo ELISA de anticuerpos contra el virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) para diagnóstico avícola

Virus de la enfermedad de Newcastle de primavera verde¿ Qué pasa?Kit ELISA de anticuerpos

No de catálogo LSY-30013

1. Introducción

The GreenSpring™ Newcastle disease virus (NDV) antibody ELISA kit is developed to detect the NDV antibodies level in chicken serum sample and can be used to evaluate serological diagnosis of infected chickens and Epidemiological surveys of Newcastle disease virus, análisis del estado de la vacuna contra el virus de la enfermedad de Newcastle en pollos.

2Principio.

Este kit está basado en el principio del ensayo de inmunosorbente enzima-ligado en fase sólida (ELISA), compuesto por la reacción de micro-placa recubierta con antígeno NDV de alta pureza,IgG y otros reactivos antipollos marcados con peroxidasa de rábanoEl mecanismo de reacción es la unión del antígeno recubierto con NDV-Ab en la muestra.y luego con el anticuerpo IgG antipollo etiquetado por la enzima para formar un complejo "antigeno revestido + NDV-Ab + anticuerpo IgG HRP antipollo"La profundidad del color es proporcional a la cantidad de NDV-Ab, cuando la muestra de la reacción cromogénica,los resultados detectados por el lector de microplacas superan un valor umbral establecido y el resultado se considera positivo., lo que indica que existen anticuerpos producidos por el sistema inmune o una infección natural.

3Los componentes del kit

4Materiales requeridos pero no proporcionados

1 Lector de microplacas (longitud de onda doble: 450/630 nm).

2 micropipetas: de un solo canal de 1 a 100 ml,0.5 ~ 10 ml, multicanal 30 ~ 300 ml

3 Lavadora de microplacas.

4 Baño de agua o incubadora.

5 Oscilador.

6 puntas desechables (10ul, 200ul)

7 Agua desionizada

5Requisito de muestra

1La muestra de ensayo es suero de pollo, se recoge la muestra sin bacterias, se almacena a 2°C ≈ 8°C durante menos de una semana, se almacena a menos de -20°C para almacenamiento a largo plazo.

2Evite el uso de muestras de hemólisis severa, sedimentos, que contengan fibrina larga en suspensión y bacterias contaminantes.

3Las muestras con dosis convencionales de EDTA, citrato de sodio o heparina de sodio no afectan al experimento.

6Preparación

1) Para obtener los mejores resultados, los reactivos de ELISA deben mantenerse a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 30 minutos.

2) Dilución de la muestra: utilizar el diluyente de la muestra para diluir la muestra en 40 veces, mezclar la muestra diluida uniformemente puede obtener un mejor resultado.

3) Preparación de la solución de lavado: diluir el tampón de lavado concentrado 20 × con agua desionizada 20 veces.

7Procedimiento de ensayo

1Añadir muestra: Sacar las placas recubiertas requeridas de acuerdo con la cantidad de muestra (se puede separar) y registrar la posición de la muestra en una hoja de trabajo.Conjunto de 2 pozos para el suero de control negativo y 2 pozos para el suero de control positivo, añadir suero de control negativo y positivo no diluido a su pozo, 100 μL/pozo, respectivamente.

2Incubación: cubrir con papel adhesivo después de añadir la muestra.Incubación en37°C para30 minutos.

3. Retire la lámina adhesiva. Verter el líquido fuera de los pozos, añadir la solución de lavado diluida en cada pozo completamente, no hay necesidad de estar estático, verter directamente. Repita 3 veces,Por última vez seco el papel absorbente..

4Añadir 100 μL de enzima conjugada en cada pozo.

5. cubrir con papel adhesivo yIncubación en37°C para30 minutos.

6Repita el paso 3.

7. añadir 100 μl de sustrato en cada pozo, mezclar adecuadamente,Color durante 10 min en37°C en la oscuridad.

8Añadir 50 μL de solución de parada en cada pozo, agitar uniformemente durante 10 segundos y determinar el resultado.

9. Leer el valor de OD de cada pozo con el lector ELISA a doble longitud de onda: 450/630 nm.

8Resultados

En términos generales, el valor medio de OD de los controles NDV-positivos debe ser ≥ 0.6, el valor medio de OD del control NDV-Negativo debe ser inferior a 0.1, de lo contrario el experimento no tiene éxito, volver a probar.

El resultado se juzgará por el valor S/P,

S/P=(OD de la muestra_{No incluidos}- El NC.el número)/( PCel número- El NC.el número), NCel númerosignifica la OD media del control negativo_{No incluidos}Valor en PCel númerosignifica la DO media del control positivo_{No incluidos}Valor

Si S/P≥0.20, es positivo; menor que 0.20, es negativo.

9Interpretación del resultado

1. La hemólisis severa, la fibra proteica en el suero de separación no es suficiente, que contiene eritrocitos, un precipitado, una muestra con bacterias puede conducir a un falso positivo.

2Los resultados negativos pueden ocurrir en gallinas individuales después de las vacunas debido a diferencias individuales o duración inmune.

3Los resultados positivos para el diagnóstico serológico y la investigación epidemiológica del pollo se combinarán con otros métodos y datos clínicos.

10. Desempeño del producto

1Especificidad: utilizar este kit para detectar suero de referencia, la tasa de cumplimiento alcanza el 100%.

2- Sensibilidad: puede alcanzar max. 1:12800.

3Precisión: CV (%) no superior al 8%.

4Estabilidad: almacenar a 2°C ∼ 8°C durante 12 meses o almacenar a 37°C durante 3 días, el resultado puede alcanzar los 3 estándares anteriores.

11. Precauciones y advertencias para los usuarios

1Este kit de prueba es adecuado para el diagnóstico in vitro.

2No utilice los kits con fecha de caducidad pasada, no mezcle los reactivos de diferentes lotes.

3. Lea el manual cuidadosamente antes de utilizar los kits.

4. usar guantes y ropa de trabajo durante el funcionamiento, tratar el kit de ensayo como si contenía material infeccioso.o tratados con 50,0 g/l de desinfectante de hipoclorito de sodio durante 30 minutos y luego desechar.

5. La placa de micropozo retirado del ambiente refrigerado debe ser equilibrada humedad para secar a temperatura ambiente, luego se puede abrir.Colocar de nuevo la placa MicroWell no utilizada en una bolsa de papel seco y sellarla a 2-8 °CEl reactivo líquido no utilizado debe cubrir las tapas, almacenarse a 2-8 °C en la oscuridad con otros componentes del grupo.

6Si el tampón de lavado concentrado 20× parece cristalino, es normal, ponerlo a 37°C hasta disolverse.

7Se debe utilizar un Micropipettor para añadir la muestra y los reactivos, y a menudo probar su exactitud.

8Cuando se añade tampón de lavado, debe estar lleno pero sin desbordamiento, evitar la aparición de enzimas libres en la boca del pozo o la contaminación cruzada entre los pozos.

9La solución de stop es corrosiva, use una gran cantidad de agua para lavarse inmediatamente al tocar la piel o la ropa.

Especificaciones:96 pozos × 2.

Fecha de caducidad:- 12 meses. - ¿Qué es eso?

El almacenamiento:no exponer a la luz fuerte.

Fecha de producción:En el embalaje exterior del kit de ensayo.