LSY-30039 Kit ELISA de antígeno del virus de la leucosis aviar (ALV) 96*2 pocillos/kit

El virus de la leucosis aviar(ALV)antigeneraciónEl kit ELISA

No de catálogo LSY-30039

1.Introducción

Este kit está basado en el ensayo enzimático de doble anticuerpo sandwich (DAS-ELISA) para detectar el antígeno P27 del virus de leucosis aviar (ALV).control negativo y muestras en sus pozos, después de la incubación, si hay virus de leucosis aviar ((ALV) antígeno P27 en la muestra, se combina con el anticuerpo recubierto en micro-placa, formar complejo antígeno-anticuerpo, de lo contrario no puede.añadir conjugado de enzimasLavar de nuevo, añadir sustrato, con la reacción habrá un color azul,

El color oscuro tiene correlación positiva con el antígeno ALV P27 en la muestra, alcanza el objetivo de la prueba rápida.

2.Reactivos

3.Materiales requeridos pero no suministrados

ELISA Reader ((650nm), agua desionizada, tubo de centrifugadora, micropipettores, temporizador, centrifugadora ((4000r/min), hisopo de algodón, NaCl, KCl, Na2HPO4, KH2PO4.

4. Notas

1) Este kit es sólo para uso en investigación.

2) No intercambiar los reactivos de los kits de diferentes números de lote.

3) No utilice el kit con fecha de caducidad.

4) Debe utilizarse agua (como agua destilada, agua desionizada o agua pura) de acuerdo con la regla de la Farmacopea para diluir el tampón de lavado concentrado.

5) Todos los reactivos deben volver a la temperatura ambiente ((25 ± 2°C) antes de su uso.

6) Coloque de nuevo la microplaca no utilizada en una bolsa de papel de aluminio y sellada, guarde a 2 ~ 8 °C pronto.

7) Evite utilizar material metálico para cargar y mezclar los reactivos.

8) No exponga el sustrato a una luz fuerte.

9) Detenga la solución puede tener efectos excitantes en la piel y los ojos, tenga cuidado al utilizarla.

10) Asegúrese de que el sistema de pipetaje sea claro y preciso, de que el volumen de la solución sea preciso y de que no se evite la contaminación cruzada.

5Procedimiento

5.1 Preparación del reactivo

1) el0.01mol/L pH=7,4 tampón de la SBP: se pesan 8,0 g de NaCl, 0,2 g de KCl, 1,14 g de Na2HPO4 y 0,24 g de KH2PO4, se añade agua desionizada para disolver hasta 1 L.

2) elEl buffer de lavado:devuelva el tampón de lavado 25x concentrado a temperatura ambiente ((20-25°C) antes de su uso, agite para disolver la precipitación ((prefiere calentar a 37°Cincubadora durante 5-10 minutos),Luego diluir con agua desionizada a 25 veces (por ejemploMezclar uniformemente, guardar el tampón diluido a 2-8°C durante 7 días.

5.2 Preparación de las muestras

1) Blanco de huevo: tomar huevo entero, aplastarlo y tomar directamente 100l de blanco de huevo.

2) Esfregón de cloacal: recoger una muestra con un hisopo de algodón de cloacal de pollo, luego ponerlo en 1 ml de tampón PBS (0,01mol/L, pH=7,4), luego descongelarlo a -20°C en refrigerador una vez, después de volver a la temperatura ambiente.,Tomar 100ul para la prueba.

3) Vacuna: disolver la vacuna con el diluyente de la vacuna, luego diluir con tampón PBS de 0,01 mol/ L pH=7,4 durante 10-20 veces, tomar prueba de 100 ul.

4) elMeconio: no es necesario diluir, tomarlo directamente para probar, si hay precipitación o impurezas, centrifugar a 2000-3000 r/min durante 10 minutos, tomar 100ul de líquido transparente de capa superior para probar.

5.3Procedimiento de ELISA

1) Tomar microplaca pre-revestida (puede descifrar durante varios tiempos de uso según la cantidad de muestra), añadir 100μL de muestra a un pozo, mientras tanto establecer 2 pozos para el control negativo, 2 pozos para el control positivo por separado.Añadir 100 μl de control negativo/positivo a sus pozos.Incubación entemperatura ambiente (25 ± 2 °C)°C) en la oscuridadpara60 minutos.

2) Despejar el líquido de los pozos, añadir 300 μL de solución de lavado diluida a cada pozo, agitar y lavar durante 4 veces, cada vez durante 30 segundos, verter.

3) Añadir 100 μL de enzima conjugada a cada pozo, cubierta yIncubación entemperatura ambiente (25 ± 2 °C)°C) en la oscuridadpara60 minutos.

4) Repita el paso 2 (lavado).

5) Mezclar el sustrato A y el sustrato B en proporciones uniformes de 1:1, luego añadir la solución de mezcla a cada pozo, 100ul/pozo, cubrir yIncubación entemperatura ambiente (25 ± 2 °C)°C) para15- ¿Qué es eso?Nota: utilizar la solución de mezcla de sustrato en 5 minutos.

6) Añadir 100 μL de solución de parada en cada pozo y medir el resultado en 5 min. Nota: si hay cristalino floculante en la solución de parada, calentar a 37°C para disolver y luego utilizar.

6.Resultados

6.1Utilice ELISA Reader para leer el valor de OD650nm, calcular NC (valor medio de OD del control negativo) y PC ((valor medio de OD del control positivo).

Nota: NV < 0,200 y 0,500 < PC≤2.000, el ensayo es válido, de lo contrario, vuelva a realizar el ensayo.

6.2Calcular S/P: S/P=(SC-NC)/(PC-NC), SC es el valor OD de la muestra.

6.3Si el S/P< 0.17, no hay proteína ALV P27 en la muestra; si S/P≥0.17, hay proteína ALV P27 en la muestra

Especificaciones:96*2 pozos por equipo.

Fecha de caducidad:- 12 meses. - ¿Qué es eso?

El almacenamiento:Almacenamiento a 2-8°C, en la oscuridad.