Kit de pruebas de ELISA de la influenza aviar 96wells AIV anticuerpos de prueba de inmunología 2 placas LSY-30028

Kit ELISA de anticuerpos contra el virus de la gripe aviar

No de catálogo LSY-30028

1- Es muy breve.

La gripe aviar, también conocida como gripe aviar verdadera o gripe europea, es una enfermedad infecciosa aguda y altamente letal causada por el virus de la gripe aviar (AIV) tipo A,caracterizado por muerte séptica aguda a intoxicación asintomática.

Este kit ELISA se utiliza para detectar anticuerpos del virus de la influenza aviar tipo A en muestras de pollo de suero, plasma o yema de huevo de pollo, pato, ganso, etc.Y se puede utilizar para la evaluación del efecto inmune y diagnóstico auxiliar.

2Principio.

Este kit está compuesto por una microplaca preencapsulada con antígeno AIV, una solución de trabajo de anticuerpos, un conjugado de enzimas, etc., para detectar anticuerpos del virus de la influenza aviar tipo A en una muestra de suero de aves de corral,Plasma o yema de huevo según el principio del método de ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas competitivas (ELISA de bloqueo)Se añadirá una muestra diluida y una solución de trabajo de anticuerpos a los pozos de microplacas pre-revestidos al ejecutar la prueba, si hay anticuerpos AIV en la muestra.bloqueará la combinación de la solución de trabajo de anticuerpos con el antígeno AIV pre-revestido en microplacasLa profundidad de color de la muestra se correlacionó negativamente con el contenido de anticuerpos específicos en la muestra.Después de añadir la solución de parada, el color se vuelve amarillo. Mide el valor de absorbancia de cada reacción bien por lector de microplacas a 450nm. Entonces podemos saber si hay anticuerpos del virus de la gripe aviar (AIV) tipo A en la muestra.

3.Componentes

4Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Unidad de detección de radioactividad (RD) y unidad de detección de radioactividad.
2. Micropipeta ajustable
3. Equipo de temperatura constante de 37°C

5.Preparación de las muestras

1) elBuffer de lavadopreparación: antes de usar, devuelva el tampón de lavado 20x Concentrado a temperatura ambiente (aproximadamente 25°C), agite para disolver la sal precipitada,luego diluirlo con agua destilada o agua desionizada a 20 veces ((Como: 1 parte 20x tampón de lavado concentrado + 19 partes agua destilada o agua desionizada).

2) elSeero/plasma: Tomar sangre entera de animales, obtener suero o plasma por el método regular, el suero/plasma debe ser claro, sin hemólisis, sin contaminación.para almacenamiento a largo plazo, a -20 °C.

Salsa de huevo: Se toman 2 ml de yema de huevo fresca, se añade 2 ml de solución salina, se agita y se mezcla uniformemente, se centrifuga a 3000 r/min durante 15 min, se toma como muestra el líquido de la capa superior.

3) La muestra de suero, plasma o yema de huevo preparada debe volver a temperatura ambiente, mezclarse uniformemente y estar lista para su uso.

6Procedimiento de ensayo

1) Coloque el kit a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de usarlo.

2) Tome bien la cantidad de microplaca necesaria, establezca 2 pozos para el control negativo, 2 pozos para el control positivo, sella la placa no utilizada, guarde a 2 ̊8 °C pronto.

3) Añadir el control negativo al pozo de control negativo, 50ul/pozo, el control positivo al pozo de control positivo, 50ul/pozo; para los pozos de muestra, primero añadirtampón de lavado diluido40ul/pozo, luego añadirmuestra: 10ul/pozo;

4) Añadir solución de trabajo de anticuerpos a cada pozo, 50ul/pozo. Mezclar uniformemente, cubrir la placa con papel adhesivo, Incubar a 37°C (recomendamos baño de agua) durante 30 minutos en la oscuridad.

5) Arrojar líquido de los pozos y llenar todos los pozos contampón de lavado diluido:Se repite el procedimiento de lavado 5 veces como antes, por último hasta secar.

6) Añadir conjugado enzimático a cada pozo, 100ul/pozo. placa de cubierta con papel adhesivo, Incubación a 37 °C durante 30 minutos en la oscuridad.

7) Lavar como paso 5).

8) Añadir el sustrato A: 50ul/pozo, luego el sustrato B: 50ul/pozo a cada pozo, mezclar uniformemente, cubrir la placa con papel adhesivo, incubar a 37 °C en la oscuridad durante 15 minutos.

9) Añadir solución de parada: 50ul/pozo a cada pozo, mezclar uniformemente, utilizar el lector ELISA para medir el valor de OD a 450 nm (630 nm como referencia) de cada pozo.

7.Referencia

Para que el ensayo sea válido, el valor de OD del control negativo ≥1.0, el valor de OD del control positivo ≤ el valor de OD del control negativo X 50%.

8Resultados

1) PI ((tasa de bloqueo) = (1- valor de la DO de la muestra/ valor medio de la DO del control negativo) X 100%,

El PI ≥ 50%: positivo; el PI < 50%: negativo

2) No hay rebaños inmunes: puede haber infectados para resultados positivos, deben combinarse con datos clínicos para el análisis.

3) Manadas inmunizadas: controlar y registrar el nivel de anticuerpos de la muestra en este momento,analizar la distribución de los niveles de anticuerpos y el movimiento del estado inmunológico de las manadas de acuerdo con los resultados.

9Limitación

El kit solo puede detectar anticuerpos AIV cualitativamente. Haz una evaluación cruda de los niveles de anticuerpos fuertes, medianos y débiles basados en el valor de PI.

10. Notas