Equipo antibiótico de la prueba del residuo de LSY-10017 Enrofloxacin ELISA Test Kit

Enrofloxacin ELISA Kit

No. LSY-10017 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de Enrofloxacin en muestras. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. El Enrofloxacin en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos antis de Enrofloxacin. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Enrofloxacin en la muestra. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de Enrofloxacin se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 1 ppb

Temperatura de la incubación: 25℃

Tiempo de la incubación: 30min-15min

Límite de detección

Tejido, ppb del huevo 1

Suero, ppb de la miel 2

Tarifa del reacción cruzado:

Enrofloxacin 100%

Tarifa de recuperación:

Tejido, huevo, suero el 80±15%

Miel el 75±15%

3. Componentes

• Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
• solución estándar 6× (1 ml cada uno): 0ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb y 81ppb
• Casquillo rojo de la conjugación de la enzima (7ml) ..........................................................
• Casquillo azul de la solución de funcionamiento del anticuerpo (7 ml)
• Casquillo blanco de la solución del substrato A (7 ml)
• Casquillo negro de la solución del substrato B (7 ml)
• Pare el casquillo amarillo de la solución (7 ml)
• 20× concentró el casquillo blanco del almacenador intermediario que se lavaba (40 ml)
• 2× concentró la redisolución del casquillo transparente de la solución (50 ml)

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: el lector del microplate, impresora, homogeneizador, dispositivo de la nitrógeno-sequedad, vórtice, centrifugadora, midiendo mide con una pipeta, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g)
• Micropipettors: µL 20-200 µL monocanal, 100-1000, y µL de varios canales 250;
• Reactivo: Ácido clorhídrico, cloruro de metileno, acetonitrilo (NC) del CH₃, n-hexano, Na₂ HPO₄·12H2O, NaH₂ PO₄·2H2O, sodio de la heparina

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones (los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo)

1) Este equipo de la prueba puede detectar la muestra de tejido: tejido animal, aves de corral, acuáticas. Eg.: Pollo, pato, bóvidos, conejo, pescados, camarón etc.

• Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
• Antes del experimento, cada utensilio experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

• 0,1 M HCl: 860µl HCI (el 36%) + agua desionizada 100 ml.
• Acetonitrilo (NC) del CH₃ - solución de mezcla del cloruro de metileno

_{Cloruro de Vacetonitrile-Vmethylene} = 1: 4

• almacenador intermediario del PB de pH7.2 los 0.02M: disuelva Na₂ HPO₄ de 5,16 g·12H2O + 0,87 g NaH₂ PO₄·2H2O en el agua desionizada a 1 L.
• Acetonitrilo (NC) del CH₃ - cloruro de metileno solución de mezcla de 0,1 M HCl

acetonitrilo 100ml (NC) del CH₃ - solución de mezcla del cloruro de metileno (_{cloruro de} Vacetonitrile-Vmethylene = 4: 1), añade la solución de 5ml 0,1 M HCl.

• El 2× concentrado redisolviendo la solución se diluye con agua desionizada en el 1:1 (1 ml concentrado redisolviendo la solución + 1 ml de agua desionizada), usado para la muestra que redisuelve.

5,1 tejidos (pollo/hígado, cerdo/hígado, pescados, camarón etc.), huevo

1) Pese 2,0 el ± 0,05 g de la muestra de tejido homogeneizada o de la muestra del huevo en el tubo de centrífuga de 50 ml

2) Añada 8 ml del acetonitrilo (NC_del CH₃) - solución de mezcla del cloruro de metileno, sacudida para 5 minuto, centrifugadora en arriba 4000 r/min en el ℃ 15 para el minuto 10

3) Tarde a 4 ml la fase orgánica clara (capa superior) en un tubo, un soplo para secarse con nitrógeno o un aire seco totalmente por la evaporación rotatoria en el ℃ 56

• Disuelva los residuos secos en 1 ml de la solución de redisolución diluida, añada 1 ml de n-hexano, mezcla por 30 segundos; centrifugadora en sobre 4000 r/min en 15℃ para 5 mínimos.
• Quite la capa superior, tome a 50µl una solución más baja de la capa para el análisis adicional.

Doblez del dilución de la muestra: 1

5,2 suero

1) Tubo de centrífuga del uso con el sodio de la heparina (sangre de 20-30 unit/ml) para recoger la muestra de sangre del pollo (sugerencia: las jeringuillas de la colección de la sangre son enjuague recomendado con heparina). Coloque la muestra de sangre en la temperatura ambiente para 1 hora. Después de que obtenga el plasma, la centrifugadora en sobre 4000r/min en el ℃ 15 para el minuto 10, saca 1 ml de plasma.

2) Añada el NC_del CH₃ (sin el agua) 4 ml, mezcla de arriba a abajo a fondo para 5 minuto, centrifugadora en sobre 4000r/min en el ℃ 15 para 10 mínimos.

3) Mueva el sobrenadante claro (capa superior) a otro tubo de centrífuga, añada el almacenador intermediario del PB de 2ml los 0.02M, mezcla uniformemente.

4) Añada 5 ml de cloruro de metileno, mezcla uniformemente para 5 minuto, centrifugadora en sobre 4000r/min en

el ℃ 15 para el minuto 10, quita la capa superior, lleva la fase orgánica más baja la botella seca (clara sin impurezas), el soplo para secarse con nitrógeno o el aire totalmente por la evaporación rotatoria en el ℃ 50

5) Disuelva los residuos secos en 1 ml de la solución de redisolución diluida, añada 1 ml de n-hexano, mezcla por 30 segundos; centrifugadora en sobre 4000 r/min en 15℃ para 5 mínimos.

6) Absorba hacia fuera ligeramente el superior y las impurezas blancas de la capa media, tardan una fase más baja 100µl, añaden 100µl diluidas redisolviendo la solución, mezcla para 30s.

7) Tome la solución 50µl para el análisis adicional.

Doblez del dilución de la muestra: 2

5,3 miel

• Pese la muestra de la miel 2.0±0.05g en el tubo de centrífuga 50ml, añada 8 ml de acetonitrilo (NC) del CH₃ - cloruro de metileno solución de mezcla de 0,1 M HCl, sacuda completamente para 3min, centrifugadora en sobre 4000 r/min en el ℃ 15 para 10 mínimos.
• Tome a 2ml el flotante (capa superior), el soplo para secarse con nitrógeno o el aire en el ℃ 56.
• Añada 1 ml la solución de redisolución diluida, sacuda completamente para 1min.
• Tome a 50 el µL para el análisis adicional

Doblez del dilución de la muestra: 2

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

• Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;
• Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;
• La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA;
• Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

• Saque todos los reactivo y lugar necesarios en la temperatura ambiente (20-25 ℃) por lo menos 30min. Observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar;
• Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2 - 8;
• Preparación de la solución: diluya 40 ml del almacenador intermediario concentrado 20× del lavado con el agua desionizada en el 1:19 (1 porción del almacenador intermediario concentrado 20× del lavado + 19 porciones de agua desionizada), o prepárese como cantidad necesaria;
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones;
• Añada el µL 50 de la muestra o la solución estándar a los pozos duplicados separados, añade el µL 50 de la conjugación de la enzima, después añade el µL 50 de la solución de trabajo del anticuerpo en cada pozo. Mézclese por la sacudida suavemente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el℃ 25 para 30min;
• Lave el microplate con el almacenador intermediario que se lava en 250 µL/well por cuatro a cinco veces.; empape el pozo con el almacenador intermediario que se lava para el sec 15-30, aleta para secarse con el papel absorbente (si hay las burbujas después de agitar, las corta con las extremidades limpias);
• Coloración: añada el µL 50 el µL de la solución del substrato A y 50 de la solución de B en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente, e incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración;
• Determinación: añada el µL 50 de la solución de la parada en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD. (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo del minuto 5).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de Enrofloxacin en la muestra.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) obtuvo de la comparación el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,238, y el del Ⅱ de la muestra es 0,946, el valor del OD de soluciones estándar es: 1,845 para 0 ppb, 1,542 para 1 ppb, 1,130 para el ppb 3, 0,635 para el ppb 9, 0,326 para el ppb 27, 0,156 para el ppb 81, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente el ppb 27 a 81, y el del Ⅱ de la muestra es el ppb 3 a 9. (multiplicado por el doblez correspondiente del dilución)

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de la solución estándar 0ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar de Enrofloxacin (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, finalmente obteniendo la concentración de Enrofloxacin en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software)

8. Precauciones

• La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
• La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable; Continúe tan al paso siguiente inmediatamente después del lavado.
• Mézclese uniformemente, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
• La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 (A450 nanómetro< 0="">

8. La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 1 año; la fecha de la producción está en la caja.

Nota: Si el envasado al vacío del microplate tiene salida, es todavía válido utilizar, no afecta al resultado de la prueba, sea relajarse para utilizar.