LSY-10054 amoxicilina ELISA Test Kit para el tejido y el huevo

Amoxicilina ELISA Test Kit
No. LSY-10054 del catálogo
1. Principio
Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de amoxicilina en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. La amoxicilina en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para el anticuerpo anti de la amoxicilina. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la amoxicilina en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de la amoxicilina se obtiene posteriormente.
 
2. Especificaciones técnicas
Sensibilidad: 1 ppb
Temperatura de la incubación: 25℃
Tiempo de la incubación: 30min-15min
Límite de detección:
Tejido 20ppb
Huevo 10ppb
Nota: ppb=ng/mL o ng/g
Tarifa del reacción cruzado:
Amoxicilina 100%
Tarifa de recuperación:
el 80%±15%
 
3. Componentes

• Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
• Solución estándar (1ml/bottle): 0ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb.
• 11X concentró la conjugación de la enzima (0,7 ml)
• Dilución conyugal de la enzima (7 ml)
• Substrato A (6 ml)
• Substrato B (6 ml)
• Pare la solución (6 ml)
• 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba (30 ml)
• Redisolviendo la solución (30 ml)

 
4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: lector del microplate (450nm, 630nm), dispositivo del evaporador rotatorio/de la nitrógeno-sequedad, homogeneizador, oscilador, centrifugadora (4000g y arriba), balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), midiendo mide con una pipeta, la incubadora (25℃ ajustable), contador de tiempo
• Micropipettors: µL 20~200 µL monocanal y 100~1000, y µL del ocho-canal 30~300;
• Reactivo: Agua desionizada, metanol.

 
5. Tratamiento previo de la muestra
Instrucciones
Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:
1) solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
2) antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.
Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

• Solución del metanol del 40%: tome el metanol 160ml, añada el agua desionizada 240ml, mézclela uniformemente;
• Almacenador intermediario que se lava: 1 porción 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba + 19 porciones de agua desionizada

5,1 tejido (pollo)
1) recoge la muestra de tejido 1.0±0.05g en el tubo de centrífuga del poliestireno 10ml; añada 4ml desionizó el agua, vórtice en de alta velocidad para 1min; centrifugadora en 3000g antedicho en la temperatura ambiente (20 - ℃ 25) para 10min;
2) el líquido claro de la para arriba-capa de la toma 200ul en el tubo de centrífuga del poliestireno 2ml, añade 200ul que redisuelve la solución, el vórtice para 10s y la mezcla uniformemente;
3) toma a 50 el µL para el análisis.
Doblez del dilución de la muestra: 10
5,2 huevo
1) recoge la muestra del huevo 1.0±0.05g en el tubo de centrífuga del poliestireno 10ml; añada la solución del metanol de 3ml el 40%, vórtice en de alta velocidad para 2min; centrifugadora en 3000g antedicho en la temperatura ambiente (20 - ℃ 25) para 10min;
2) el líquido claro de la para arriba-capa de la toma 200ul en el tubo de centrífuga del poliestireno 2ml, añade 200ul que redisuelve la solución, el vórtice para 10s y la mezcla uniformemente;
3) toma a 50 el µL para el análisis.
Doblez del dilución de la muestra: 8
 
6. Procedimientos de ELISA
Instrucciones
1. traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25).
2. vuelta todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso.

3. La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

4. Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.
Procedimientos de la operación

• Saque todos los reactivo necesarios del equipo y del lugar en la temperatura ambiente (20 al ℃ 25) por lo menos 30 minutos. Observe que cada reactivo líquido se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar.
• Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2-8, no congelado.
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones.
• Preparación conyugal de la enzima: tome la conjugación concentrada 11X de la enzima de 1 porción, añada 10 porciones de dilución conyugal de la enzima, dilúyalas en el 1:10, entonces puesto en la temperatura ambiente para que 30min antedicho consiga la conjugación lista para utilizar de la enzima (sugiera para preparar la conjugación de la enzima cuando el equipo de vuelta a la temperatura ambiente o en el tratamiento de la muestra para ahorrar tiempo, el tiempo de mezcla para hacer no más allá de 2h.)
• Añada 50µL de la muestra o la solución estándar para separar pozos duplicados, entonces añade la conjugación de la enzima, µL 50 cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 en la oscuridad por 30 minutos.
• Vierta el líquido fuera de microwell, añada 250 µL/well del almacenador intermediario que se lava por 15-30 segundos, repita tres a cuatro veces, entonces aleta de secarse (si hay las burbujas después del aleteo, las corta con las extremidades limpias).
• Coloración: añada la mezcla de 100 µL del substrato A y del substrato B en cada pozo (nota: el substrato A de la mezcla y el substrato B en el 1:1, la mezcla se deben utilizar en 10min, nunca envase del metal del uso o metal para revolver la solución, si no el substrato puede ser inválido.). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, e incube en el ℃ 25 por 10-15 minutos en la oscuridad para la coloración.
• Determinación: añada el µL 50 de la solución de la parada en cada uno bien (el color del substrato del azul a amarillear, significa que la parada tiene éxito). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo de 5 minutos).

 
7. juicio del resultado
Determinación cuantitativa
Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL
Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar de la amoxicilina (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, así finalmente obteniendo la concentración de la amoxicilina en la muestra.
 
8. Precauciones

• La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
• La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
• Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción uniformemente y lave el microplate a fondo, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
• La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento
Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.
Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.