LSY-10051 Doxycycline ELISA Test Kit para el tejido, leche, detección de la miel

Doxycycline ELISA Test Kit

No. LSY-10051 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de Doxycycline en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. El Doxycycline en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para el anticuerpo anti del Doxycycline. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Doxycycline en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración del Doxycycline se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,2 ppb

Temperatura de la incubación: 25℃

Tiempo de la incubación: 30min-15min

Límite de detección:

Tejido, miel, leche líquida (método 1) sobre 5ppb

Leche líquida (método 2) sobre 10ppb

Suero sobre 2ppb

Nota: ppb=ng/mL o ng/g

Tarifa del reacción cruzado:

Doxycycline 100%

Tetraciclina 100%

Minociclina 100%

Clorotetraciclina 180%

Oxytetracyline el 40%

Tarifa de recuperación:

el 90±15%

3. Componentes

• Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
• 10× concentró la solución estándar: 0 ppb, 2ppb, 6ppb, 18ppb, 54ppb (0.5ml/bottle)
• 11X concentró la conjugación de la enzima (0,7 ml)
• Dilución conyugal de la enzima (7 ml)
• Substrato A (7 ml)
• Substrato B (7 ml)
• Pare la solución (7 ml)
• 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba (30 ml)
• 20× concentró la redisolución de la solución (10 ml)

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: lector del microplate (450nm, 630nm), dispositivo del evaporador rotatorio/de la nitrógeno-sequedad, homogeneizador, oscilador, centrifugadora (4000g y arriba), balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), midiendo mide con una pipeta, la incubadora (25℃, 37℃, 60℃ ajustables), contador de tiempo
• Micropipettors: µL 20~200 µL monocanal y 100~1000, y µL de varios canales 30~300;
• Reactivo: agua desionizada.

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

1) Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

• 20× diluído concentró la redisolución de la solución con agua desionizada en el 1:19 (1 porción concentrada redisolviendo la solución + 19 porciones de agua desionizada).
• Almacenador intermediario que se lava: 1 porción 20× concentró el almacenador intermediario que se lavaba + 19 porciones de agua desionizada
• solución del 1M HCl: Tome el ácido clorhídrico 1ml, añada 11ml desionizó el agua para disolver, mezclarla uniformemente.

5,1 tejido

• Tome 1± 0,01 g de la muestra homogeneizada en el tubo de centrífuga de 10 ml, añada 5 ml de agua desionizada, sacudida con el oscilador para 2min, centrifugadora en sobre 4000g por 5 minutos.
• Tome el líquido claro de la para arriba-capa 500ul, añada 500ul diluido redisolviendo la solución, sacuda con el oscilador para 2min;
• Tome a 50 el µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 12

5,2 miel

1) Recoja la muestra de la miel de 1± 0.01g en el tubo de centrífuga de 10 ml; Añada el agua desionizada 2ml, sacuda con el oscilador completamente para que 1 minuto disuelva; la toma 100ul disolvió la solución, añade 400ul diluida redisolviendo la solución, oscilador para que 10S lo mezcle uniformemente;

2) Tome 50ul para el análisis inmediatamente.

Doblez del dilución de la muestra: 10

5,3 leche líquida

Método 1

1) Tome la leche líquida recogida, deshielo y volver a la temperatura ambiente para 30min antedicho;

2) Las extremidades puestas en abajo-capa de leche cruda, sacan la muestra 1ml en el tubo de centrífuga 2ml (nota: no tome la crema de la para arriba-capa);

3) Añada 50ul el 1M HCl, sacuda fuertemente para 1min (o el vórtice para 30s);

4) Centrifugadora en sobre 4000 g en la temperatura ambiente para 10min;

5) Tome el líquido claro de la para arriba-capa 50ul en otro tubo de centrífuga (no tome la crema de la para arriba-capa), entonces añada 450ul diluido redisolviendo la solución, sacuda fuertemente para 1min (o el vórtice para 30s);

6) Tome 50ul líquido para probar.

Doblez del dilución de la muestra: 10

Método 2

Recoja a 50ul la muestra de la leche líquida, añada en 1950ul diluyó la redisolución de la solución; el vórtice para 1min, lo mezcla uniformemente; tome 50ul para probar inmediatamente.

Doblez del dilución de la muestra: 40

5,4 suero

Recoja la muestra del suero 100ul, añada en 700ul diluyó la redisolución de la solución; vórtice para que 10S lo mezcle uniformemente; tome 50ul para probar inmediatamente.

Doblez del dilución de la muestra: 8

6. Procedimientos de ELISA

Instrucciones

1. Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25).

2. Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso.

3. La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

4. Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

Procedimientos de la operación

• Saque todos los reactivo necesarios del equipo y del lugar en la temperatura ambiente (20 al ℃ 25) por lo menos 30 minutos. Observe que cada reactivo líquido se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar.
• Diluya los 5 concentró la solución estándar por separado: tome 5 pedazos de tubo de centrífuga 2ml, marca 0,0.2, 0,6, 1,8, 5.4ppb por consiguiente, añada 900µL la solución de redisolución diluida en cada tubo, después añada la solución estándar concentrada cinco 10X en arriba 5 tubos por consiguiente, 100ul/tube. Los 5 diluyeron soluciones estándar serán: 0-0,0.2-2,0.6-6,1.8-18,5.4-54.
• Preparación conyugal de la enzima: tome la conjugación concentrada 11X de la enzima de 1 porción, añada 10 porciones de dilución conyugal de la enzima, dilúyalas en 1: 10.
• Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2-8, no congelado.
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones.
• Añada 50µL de la muestra o la solución estándar para separar pozos duplicados, entonces añade la conjugación de la enzima, µL 50 cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 en la oscuridad por 30 minutos.
• Vierta el líquido fuera de microwell, añada 250 µL/well del almacenador intermediario que se lava por 15-30 segundos, repita tres a cuatro veces, entonces aleta de secarse (si hay las burbujas después del aleteo, las corta con las extremidades limpias).
• Coloración: añada la mezcla de 100 µL del substrato A y del substrato B en cada pozo (nota: el substrato A de la mezcla y el substrato B en el 1:1, la mezcla se deben utilizar en 10min, nunca envase del metal del uso o metal para revolver la solución, si no el substrato puede ser inválido.). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, e incube en el ℃ 25 por 15 minutos en la oscuridad para la coloración.
• Determinación: añada el µL 50 de la solución de la parada en cada uno bien (el color del substrato del azul a amarillear, significa que la parada tiene éxito). Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo de 5 minutos).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido del Doxycycline en la muestra.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) se puede obtener de la comparación el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, mientras que los de las soluciones estándar están como los seguidores: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.2ppb, 1,415 para 0.6ppb, 0,74 para 1.8ppb, 0,313 para 5.4ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 1,8 a 5.4ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0,2 a 0,6 ppb.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar del Doxycycline (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, así finalmente obteniendo la concentración del Doxycycline en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software)

8. Precauciones

• La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
• La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
• Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción uniformemente y lave el microplate a fondo, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
• La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.

Nota: Si el envasado al vacío del microplate tiene salida, es todavía válido utilizar, no afecta al resultado de la prueba, sea relajarse para utilizar.