LSY-10020 tilosina ELISA Test Kit para el análisis del tejido y de la miel

Tilosina ELISA Test Kit

No. LSY-10020 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo indirecto de la enzima para la detección de tilosina en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. La tilosina en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para el anticuerpo de la anti-tilosina. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la tilosina en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de la tilosina se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.5ppb

Temperatura de la incubadora: 25℃

Tiempo de la incubadora: 30min~15min

Límite de detección

Tejido (ppb 6 del método 1)

Tejido (ppb 7,5 del método 2)

Tarifa del reacción cruzado

Tilosina 100%

Tarifa de recuperación

Tejido el 70%~120%

3. Componentes

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: el lector del microplate (450 nanómetro nanómetro/630), homogeneizador, oscilador, votex, midiendo mide con una pipeta, centrifugadora, y balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora, impresora.
• Micropipettors: 20~200µL y 100~1000µL monocanal, y µl de varios canales 30~300;
• Reactivo: NaOH, agua desionizada.

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

• Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
• Antes del experimento, cada utensilio experimental se debe comprobar para ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

1) Solución de la extracción A: 1 porción de 20× concentró la extracción A + 19 porciones de agua desionizada;

2) Solución de la extracción B: 1 porción de 2× concentró la extracción B + 1 porción de agua desionizada;

• Solución del NaOH de 1 M: disuelva el NaOH de 4 g en agua desionizada a 100 ml;
• Dilución de la muestra: 1 porción de 10× concentró el dilución de la muestra + 9 porciones de agua desionizada.

5,1 muestra de tejido (método 1)

1) La toma 2±0.05g homogeneizó la muestra de tejido en el tubo de centrífuga de 50 ml, añade la extracción 3ml una solución, sacude con el oscilador para 3min;

2) Entonces añada la solución y 2.4ml la solución de la extracción B, sacudida del NaOH de 600µl el 1M con el oscilador para 3min, centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (20 - el ℃ 25) para el minuto 5;

3) Tome el líquido de la para arriba-capa 100µl, añada el dilución de la muestra 200µl, mézclelo uniformemente;

4) Tome 50ul de la solución mezclada antedicha para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 12

5,2 muestra de tejido (método 2)

1) Tome 1±0.05g homogeneizó la muestra de tejido en tubo de centrífuga plástico 10ml o 15ml o 50mL;

2) Añada el agua desionizada 2ml, sacudida fuertemente para 2min (o vórtice para 1min);

3) Centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (20 - ℃ 25) para el minuto 5;

4) Tome el líquido de la para arriba-capa 100µl, añada el dilución de la muestra 400µl, mézclelo uniformemente;

5) Tome 50ul de la solución mezclada antedicha para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 15

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

• Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar.
• Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso
• La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA
• Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

• Saque todos los reactivo necesarios del equipo y del lugar en la temperatura ambiente (20-25 ℃) por lo menos 30 mínimos. Observe que cada reactivo líquido se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar
• Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2-8, no congelado.
• Preparación de la solución: the15 diluídos ml del almacenador intermediario concentrado 20× del lavado con agua desionizada en el 1:19 (1 porción del almacenador intermediario concentrado 20× del lavado + 19 porciones desionizó el agua), o se preparan como cantidad necesaria.
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones.
• Añada el µL 50 de la muestra o la solución estándar para separar pozos duplicados, entonces añade la conjugación de la enzima de 50 µL y entonces el µL 50 de la solución de trabajo del anticuerpo en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 para el minuto 30
• Vierta el líquido fuera de microwell, añada 250 µL/well del almacenador intermediario del lavado por 15-30 segundos, repita 4-5 veces, entonces aleta de secarse (si hay las burbujas después del aleteo, las corta con las extremidades limpias).
• Coloración: añada el µL 50 el µL del substrato A y entonces 50 del substrato B en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, e incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración;
• Determinación: añada 50 que el µL del para la solución en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450nm para determinar el valor del OD (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo del minuto 5).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de la tilosina.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) se puede obtener de la comparación el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, mientras que los de las soluciones estándar están como los seguidores: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.5ppb, 1,415 para 1.5ppb, 0,74 para 4.5ppb, 0,313 para 13.5ppb y 0,155 para 40.5ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 13,5 a 40.5ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 1,5 a 4.5ppb, multiplicándose por su factor correspondiente del dilución es la concentración real de tilosina en la muestra.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B0) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar de la tilosina (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, así finalmente obteniendo la concentración de la tilosina en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software)

8. Precauciones

• La temperatura ambiente debajo de 25℃ o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD
• La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable
• Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción uniformemente y lave el microplate a fondo, si no habrá la reproductibilidad indeseable
• La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel;
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz
• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 indica su degeneración
• La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.

Observaciones: Si el envasado al vacío de las placas de microtítulo tiene salida, la placa de microtítulo es normal y eficaz, no afecte al resultado experimental. Por favor no dude en utilizar.

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