LSY-10036 pozos/equipo del equipo 96 de la prueba del β-agonista ELISA para el tejido

β-agonistas ELISA Test Kit

No. LSY-10036 del catálogo

1. Principio

^Los ®β-^{agonistas de} GreenSpring prueban el equipo se basan en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de β-agonistas en la muestra. El antígeno de acoplamiento se cubre primero en las rayas micro-bien. Los β-agonistas en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos de los anti-β-agonistas. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con los β-agonistas en la muestra. Este valor se compara a la curva estándar y los residuos de los β-agonistas se obtienen posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,1 ppb

Temperatura de la incubación: 25℃

Tiempo de la incubación: 30min~15min

Límite de detección:

Orina porcina 0.3ppb

Cerdo 0.6ppb

Tarifa del reacción cruzado:

Clenbuterol 100%

Cimaterol <4>

Brombuterol el 60%

Mabuterol 108%

Bambuterol <5>

Clorprenaline <1>

Salbutamol el 75%

Terbutaline el 25%

Penbutolol el 19%

Tulobuterol el 23%

Fenoterol <0>

Ractopamine <0>

Tarifa de recuperación:

Orina porcina, cerdo el 90%±30%

3. Componentes

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: el lector del microplate, impresora, homogeneizador, vórtice, oscilador, centrifugadora, incubadora, midiendo mide con una pipeta, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g)
• Micropipettors: 20-200µL monocanal, 100-1000µL, y 30-300µL de varios canales;
• Reactivo: NaOH, HCI.

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones (los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo)

• Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
• Antes del experimento, cada utensilio experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

• los 0.2M HCI: disuelva 17.2mL HCI en agua desionizada a 1L.
• NaOH del 1M: disuelva NaOH 4g en agua desionizada a 100 ml.

3) Muestra que extrae la solución: la muestra de 1 porción 5X que extraía la solución + 4 porciones desionizó el agua, mezcla uniformemente.

5,1 orina porcina

Tome a 20 el µL orina clara, detéctelo directamente (si la orina es fangosa, debe filtrar o centrifugadora en 4000 r/min para el minuto 10, después toma la orina clara). Tienda en el ambiente congelado si no utilice.

Doblez del dilución de la muestra: 1

5,2 cerdo

• Pese 2±0.05g homogeneizó la muestra de tejido en un tubo de centrífuga 50ml, añaden 3ml los 0.2M HCl, sacudida para 3 mínimos.
• Entonces añada la solución del NaOH de 600ul el 1M y la muestra 2.4ml que extraen la solución, sacudida para 3min, centrifugadora en 4000 r/min en la temperatura ambiente (℃ 20-25) para 10 mínimos.
• Tome el líquido de la para arriba-capa 20µL para el análisis. (Nota: si hay capa gorda después de centrifugadora, quite la capa gorda o la capa gorda separada, toma el líquido claro para el análisis)

Doblez del dilución de la muestra: 4

6. procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

• Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;
• Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;
• La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en ELISA los procedimientos;
• Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

• Traiga el equipo de la prueba al minuto 30 de la temperatura ambiente (℃ 20-25) por lo menos, observe que cada reactivo se debe sacudir uniformemente antes de usar;
• Ponga las tiras micro-bien requeridas en marcos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2-8, no congelado.
• Diluya el almacenador intermediario concentrado 20X del lavado 40ml en el 1:19 con agua desionizada (almacenador intermediario que se lava concentrado 20X de 1 porción + agua desionizada 19 porciones). O prepárese como cantidad necesaria.
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones.
• Añada 20µL de la muestra o de la solución estándar en pozos duplicados separados, después añada la conjugación de la enzima, 50ul/well; entonces añada la solución de funcionamiento del anticuerpo, 80µL/well. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, sello el microplate con la membrana de la cubierta, incube en el ℃ 25 para 30 mínimos.
• Vierta el líquido fuera de microwell, añada 250µL/well del almacenador intermediario que se lava, lavado por 4-5 veces, 15-30s cada vez, después saque y agite para secarse con el papel absorbente (si hay las burbujas después del aleteo, las corta con las extremidades limpias).
• Coloración: añada 50µL del substrato A, después añada 50µL el substrato B en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, e incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración.
• Determinación: añada 50µL del paran la solución en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450nm para determinar el valor del OD de cada pozo. (Recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630nm en el plazo del minuto 5).

7. juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de los β-agonistas en la muestra.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) obtuvo de comparar el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, el valor del OD de soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.1ppb, 1,415 para 0.3ppb, 0,74 para 0.9ppb, 0,313 para 2.7ppb, 0,155 para 8.1ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 2,7 a 8.1ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0,3 a 0.9ppb.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción obtenidos para el valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, de que son

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar de los β-agonistas (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez del dilución, finalmente obteniendo la concentración de los β-agonistas en la muestra.

8. precauciones

la temperatura ambiente 1.The debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.

2.Dryness del microplate en el proceso que se lava será acompañado por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable; Continúe tan al paso siguiente inmediatamente después del lavado.

3.Mix uniformemente, si no allí será la reproductibilidad indeseable.

la solución de la parada 4.The es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.

• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar (0 ppb) de menos de 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.

Observaciones: Si el envasado al vacío de las placas de microtítulo tiene salida, la placa de microtítulo es normal y eficaz, no afecte al resultado experimental. Por favor no dude en utilizar.