LSY-10038 Sulfamethoxazole (SMZ) ELISA Kit 96 pozos/prueba de la comida del equipo

Sulfamethoxazole (SMZ) ELISA Kit

No. LSY-10038 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo de la enzima para la detección de residuo de Sulfamethoxazole (SMZ). Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. El Sulfamethoxazole (SMZ) en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para los anticuerpos antis-Sulfamethoxazole (SMZ). Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Sulfamethoxazole (SMZ) en la muestra. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de Sulfamethoxazole (SMZ) se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 1 ppb

Temperatura de la incubadora: 25℃

Tiempo de la incubadora: minuto 30 ~minuto15

Límite de detección

Tejido (método del alto-detección-límite) 1 ppb

Ppb 5 del tejido (método del bajo-detección-límite) .............................................

Ppb de la miel 1

Suero, ppb de la orina 4

Ordeñe el ppb 20

Tarifa del reacción cruzado

Sulfamethoxazole (SMZ) ..... 100%

Sulfamerazine (SM₁) el 12%

Phthalylsulfathiazole (PST) el 13%

Sulfapyridine el 28%

Sulfamethoxydiazine (SMD) 26,4%

Tarifa de recuperación

Tejido, orina, leche el 85±25%

Miel, suero el 80±23%

3. Componentes

• Tiras micro-bien: 12 tiras con 8 pozos desprendibles por cada uno
• solución estándar 6× (1 ml cada uno): 0 ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb y 81ppb
• Casquillo rojo de la conjugación de la enzima (7 ml)
• Casquillo azul de la solución de funcionamiento del anticuerpo (7 ml)
• Casquillo blanco de la solución del substrato A (7 ml)
• Casquillo negro de la solución del substrato B (7 ml)
• Pare el casquillo amarillo de la solución (7 ml)
• 20× concentró el casquillo blanco del almacenador intermediario que se lavaba (40 ml)
• 20× concentró la redisolución del casquillo transparente de la solución (50 ml)

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

• Equipos: el lector del microplate, impresora, homogeneizador, dispositivo de la nitrógeno-sequedad, votex, centrifugadora, midiendo mide con una pipeta, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora
• Micropipettors: µL 20-200 µL monocanal, 100-1000, y µL de varios canales 30-300;
• Reactivo: Acetonitrilo (NC) del CH₃, acetato de etilo, n-hexano, K₂ HPO₄·12H2O, monohidrato ácido cítrico (C₆ H₈ O₇·H₂ O), ácido clorhídrico, NaOH, Cl₂ del CH_2,

_5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones (los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo)

• Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
• Antes del experimento, cada utensilio experimental debe ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra:

• solución del NaOH de los 0.2M: Pese NaOH 0.8g, disuelva con 100ml desionizó el agua;
• los 0.5M HCl: Tome el ácido clorhídrico 4.3ml, disuelva con agua desionizada a 100ml, mezcla uniformemente;
• Na₂ HPO₄ - C₆ H₈ O₇·Almacenador intermediario_de H₂ O: pese 19.85gNa2HPO4·12H2O y 9.3g C₆ H₈ O₇·H₂ O, disuelve con agua desionizada a 1L, mezcla uniformemente;
• Solución_del Cl_2del CH₃ CN-CH₂: NC DE V CH₃: =1:4 del Cl₂ de V CH₂;
• El 20× concentrado redisolviendo la solución se diluye con agua desionizada en el 1:19 (solución redissolbing concentrada 1 porción + 19 porciones de agua desionizada).

5,1 tejido

Método del Alto-detección-límite del A.

Método uno

1) Pese 2,0 el ± 0,05 g de la muestra de tejido homogeneizada en el tubo de centrífuga de 50 ml, añada 6 ml de acetato de etilo, sacudida para 2 minuto, centrifugadora en sobre 4000 r/min en el ℃ 15 para el minuto 10;

2) Tarde a 3 ml la fase orgánica clara en un envase, un soplo para secarse con nitrógeno o un aire seco totalmente por la evaporación rotatoria en el ℃ 50-60

• Disuelva los residuos secos en 1 ml de la solución de redisolución diluida, añada 1 ml de n-hexano, mezcla por 30 segundos; la centrifugadora en sobre 4000 r/min en 15℃ para 5 mínimos quita la fase superior del n-hexano de la capa,
• Solución de la abajo-capa 50µl de la toma para el análisis adicional.

Doblez del dilución de la muestra: 1

Método dos

• Pese 2 el ± 0,05 g de la muestra homogeneizada, puesto en el tubo centrífugo 50ml;
• Añada la solución del Cl₂ de 8ml CH₃ CN-CH₂, sacudida para 5min, centrifugadora en sobre 4000 r/min en el ℃ 15 para el minuto 10;
• Transferencia fase orgánica de 4 ml en un envase, un soplo a secarse con nitrógeno o un aire seco totalmente por la evaporación rotatoria en el ℃ 56
• Añada 1 ml de la solución de redisolución diluida para redisolver el residuo seco, añada 1 ml de n-hexano, sacudida para 30s. Centrifugadora en sobre 4000 r/min en 15℃ para el minuto 5;
• Quite la fase superior del n-hexano de la capa. Tome a 50 el µL abajo de la solución de la capa para el análisis adicional.

Doblez del dilución de la muestra: 1

Método del bajo-detección-límite de B. Tissue

1) Pese 2,0 el ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, añada 8 ml diluido redisolviendo la solución, sacudida para 2 minuto, centrifugadora en arriba 4000 r/min en el ℃ 15 para el minuto 10;

2) Tome la solución de 50 µL para el análisis adicional.

Doblez del dilución de la muestra: 5

5,2 suero

1) Coloque la muestra del suero en la temperatura ambiente para 30 minuto, centrifugadora en sobre 4000r/min en el ℃ 10 para el minuto 10, separación del suero o suero del filtro

2) Tome el suero de 1 ml y añada 3mL la solución de redisolución diluida, mezcla para 30s.

3) Tome la solución de 50 µL para el análisis adicional

Doblez del dilución de la muestra: 4

5,3 miel

• La muestra de la miel de g del ± 0,05 del peso 1 en el tubo centrífugo de 50 ml, añade la solución de 1ml los 0.5M HCl, la puso en el ambiente 37℃ para 30min;
• Añada la solución del NaOH de 2.5ml los 0.2M y 3ml Na₂ HPO₄ - C₆ H₈ O₇·El almacenador intermediario_de H₂ O por separado, después añade 4ml el acetato de etilo, sacudida para 2min, centrifugadora en arriba 4000 r/min en el ℃ 15 para el minuto 10;
• Tarde a para arriba-capa 2mL la fase orgánica, soplo para secarse con nitrógeno en el ℃ 50-60, añada 0,5 ml de la solución de redisolución diluida para redisolver, mezcla para 30s.
• Tome a 50 el µL para el análisis adicional

Doblez del dilución de la muestra: 1

5,4 orina

• Añada 3 ml la solución de redisolución diluida y 1 ml de la muestra de orina clara centrifugada, mezcla correctamente para 30s.
• Tome a 50 el µL para el análisis adicional

Doblez del dilución de la muestra: 4

5,5 leche

• Tome 1 ml de leche, añada la solución de redisolución diluida, dilúyala en el 1:19 (Ⅴ/Ⅴ) (leche de 20 µL + el µL 380 la solución de redisolución diluida), mezcla para 30s.
• Tome a 50 el µL para el análisis adicional

Doblez del dilución de la muestra: 20

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

• Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;
• Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;
• La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA;
• Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

• Saque todos los reactivo y lugar necesarios en la temperatura ambiente (20-25 ℃) por lo menos 30min. Observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar;
• Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2 - 8;
• Preparación del almacenador intermediario que se lava: 40 ml diluídos del almacenador intermediario que se lava concentrado 20× con el agua desionizada en el 1:19 (almacenador intermediario concentrado 20× del lavado de 1 porción + 19 porciones de agua desionizada). O prepare el almacenador intermediario que se lava como cantidad necesaria.
• Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones;
• Añada el µL 50 de la muestra o la solución estándar a los pozos duplicados separados, añade el µL 50 de la conjugación de la enzima, después añade el µL 50 de la solución de trabajo del anticuerpo en cada pozo. Mézclese por la sacudida suavemente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el℃ 25 para el minuto 30;
• Lave el microplate con el almacenador intermediario que se lava en 250 µL/well por cuatro a cinco veces.; empape el pozo con el almacenador intermediario que se lava para el sec 15-30, aleta para secarse con el papel absorbente (si hay las burbujas después de agitar, las corta con las extremidades limpias);
• Coloración: añada el µL 50 el µL de la solución del substrato A y 50 de la solución de B en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente, e incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración;
• Determinación: añada el µL 50 de la solución de la parada en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450 nanómetro para determinar el valor del OD. (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630 nanómetro en el plazo del minuto 5).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de Sulfamethoxazole (SMZ) en la muestra.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) obtuvo de la comparación el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, el valor del OD de soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 1ppb, 1,415 para 3ppb, 0,74 para 9ppb, 0,313 para 27ppb, 0,155 para 81ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 27ppb a 81ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 3ppb a 9ppb. (multiplicado por el doblez correspondiente del dilución)

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de la solución estándar 0ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar de Sulfamethoxazole (SMZ) (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, finalmente obteniendo la concentración de Sulfamethoxazole (SMZ) en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software)

8. Precauciones

• La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
• La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable; Continúe tan al paso siguiente inmediatamente después del lavado.
• Mézclese uniformemente, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
• La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel.
• No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
• Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
• Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 (A450 nanómetro< 0="">

8. La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, y las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 1 año; la fecha de la producción está en la caja.

Nota: Si el envasado al vacío del microplate tiene salida, es todavía válido utilizar, no afecta al resultado de la prueba, sea relajarse para utilizar.