Equipo de prueba ELISA de lincomicina LSY-10045 para certificado ISO9001 de tejido

Kit de prueba ELISA de lincomicina

N.º de catálogo LSY-10045

1. Principio

El kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo indirecto para la detección de lincomicina en la muestra.El antígeno de acoplamiento está recubierto previamente sobre las tiras de los micropocillos.La lincomicina de la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por los anticuerpos anti-lincomicina.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la lincomicina que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtienen los residuos de Lincomicina.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad:0.1ppb

Temperatura de la incubadora:25 ℃

Tiempo de incubadora: 30 min ~ 15 min

Límite de detección

Tejido 0,4 ppb

Tasa de reacción cruzada

Lincomicina 100%

Índice de recuperación

Tejido………………………………………………………………..……90%±35%

3. Componentes

• Tiras de micropocillos: 12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una
• Solución estándar 6× (1 ml cada una): 0 ppb, 0,1 ppb, 0,3 ppb, 0,9 ppb, 2,7 ppb, 8,1 ppb
• Conjugado enzimático (7 ml) tapa roja
• Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml) con tapa azul
• Solución de sustrato A (7 ml) tapa blanca
• Solución de sustrato B (7 ml) tapa negra
• Solución de parada (7 ml) tapa amarilla
• Tampón de lavado concentrado 20x (15 ml) con tapa blanca
• Extracción de muestra concentrada 10X A (50 ml) ………………tapa transparente

10) 6× extracción de muestra concentrada B (50 mL) …………….…tapa transparente

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos:lector de microplacas, impresora, homogeneizador, vórtice, oscilador, centrífuga, pipetas medidoras, incubadora, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g)
• Micropipetas:monocanal 20-200 µL y 100-1000 µL, y multicanal 300 µL;

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben abordarse antes del pretratamiento)

• Las muestras de tejido analizadas con este kit incluyen: tejido animal, ave y tejido acuático.ej.: pollo, pato, cerdo, pescado, camarones, etc.
• Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;
• Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

• Solución de extracción de muestras A:

1 parte de extracción de muestra concentrada 10× A + 9 partes de agua desionizada.

• Solución de extracción de muestras B:

1 parte de extracción de muestra concentrada 6× B + 5 partes de agua desionizada.

Preparación de muestras

5.1 Tejido (pollo, cerdo/hígado,pato,camarones, pescado, etc.)

• Pesar 2,0 ±0,05 g de muestra de tejido homogeneizado en un tubo de centrífuga de 50 ml.
• Agregue 3 ml de solución de extracción de muestra A, agite durante 2 minutos, luego agregue 3 ml de solución de extracción de muestra B, agite durante 2 minutos, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 minutos.
• Tome 50 µl de líquido de capa superior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:4

6. Procedimientos ELISA

Instrucciones

• Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25 ℃).
• Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.
• La reproducibilidad del análisis ELISA depende, en gran medida, de la consistencia de

lavado de platos.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

• Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

Procedimiento de operación

• Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos; tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse uniformemente antes de usarlo;Coloque las tiras de micropocillos necesarias en los marcos de las placas.Se volvió a sellar la microplaca no utilizada, se almacenó a 2-8 ℃, no se congeló;
• Preparación de la solución: diluya 40 ml del tampón de lavado concentrado (20 × concentrado) con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado (20 ×) + 19 partes de agua desionizada) o prepárelo según la cantidad necesaria.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones;
• Agregue 50 µL de la muestra o la solución estándar en pocillos duplicados separados, luego agregue el conjugado enzimático, 50 µL/pocillo;luego agregue la solución de trabajo de anticuerpos, 50 l/pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cobertura,incubar a 25 ℃ durante 30 min.;
• Vierta el líquido del micropocillo, lave la microplaca con el tampón de lavado diluido a 250 l/pocillo de cuatro a cinco veces.Cada vez remoje el pozo con el tampón de lavado durante 15-30 segundos, agite para secar con papel absorbente (si quedan burbujas después de aletear, córtelas con las puntas limpias).
• Coloración: agregue 50 l de solución de sustrato A y 50 l de solución B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar en25℃ durante 15 min en la oscuridad para colorear;
• Determinación: añadir 50 µL de solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD de cada pocillo.(Se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 5 minutos).

7.Juicio de resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de DO de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de lincomicina en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestra Ⅰ es 0,238 y el de la muestra Ⅱ es 0,946, el valor de DO de las soluciones estándar es: 1,845 para 0 ppb, 1,542 para 0,1 ppb, 1,130 para 0,3 ppb, 0,635 para 0,9 ppb, 0,326 para 2,7 ppb, 0,156 para 8,1 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestra Ⅰ es de 2,7 a 8,1 ppb, y el de la muestra Ⅱ es de 0,3 a 0,9 ppb.

7.2Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir

B: el valor de DO promedio (pocillos dobles) de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores de semilogaritmo de las soluciones estándar de lincomicina (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.Posteriormente el valor resultante se multiplica por el factor de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de Lincomicina en la muestra.

Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software)

8.Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada;Continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
• Mezcle uniformemente, de lo contrario habrá una reproducibilidad no deseada.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• Deseche la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 0 (0 ppb) inferior a 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;la fecha de producción está en la caja.

Observaciones: Si el paquete al vacío de las placas de microtitulación tiene fugas, la placa de microtitulación es normal y efectiva, no afecta el resultado experimental.Siéntase libre de utilizarlo.