Kit de ensayo ELISA de nitromidazolina de primavera verde para carne de cerdo, pollo, pescado, camarón y leche cruda

Kit de ensayo ELISA de nitroimidazoles

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de nitroimidazoles en la muestra.Los nitroimidazoles de la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las tiras de micro-pozo compiten por los anticuerpos anti-nitroimidazoles.El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con los nitroimidazoles que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de nitroimidazoles..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,1 ppm

Temperatura de incubación:4°C25°C25°C

Tiempo de incubación:60 minutos¿Qué quieres decir?20 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección

Tejido (carne de cerdo, pollo, pescado, camarón)

Leche cruda aproximadamente 1 ppm

Nota: ppb= ng/ml o ng/g

Tasa de reacciones cruzadas

El metronidazol es un medicamento que contiene el 100% de metronidazol.

Hidroxilo nitroimidazoles 47%

Hidroximetil dimetridazol 53%

El tinidazol es un 2%

Dimetridazol 800%

Ornidazol: 5%

Tasa de recuperación

70% ∼120%

3. Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipamiento:lector de microplacas (450 nm, 630 nm), impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, agitador, centrífuga (3000 g y más), pipetas de medición, balanza (sensibilidad recíproca de 0,01 g),incubadora (4°C), 25°C), baño de agua, temporizador;
2. Los micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μl, de 100 a 1000 μl y de ocho canales de 30 a 300 μl;
3. Los reactivos (AR):Acetato de etilo, n-hexano, agua desionizada, HCl.

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1. Sólo se podrán utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
2. Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1. Buffer de lavado: 1 parte 20 × tampón de lavado concentrado + 19 partes de agua desionizada.
2. 1M HCl: Pesar 1 ml de HCl, añadir 11 ml de agua desionizada para disolver.

5.1 Preparación de las muestras

a) Tejidos (pollo, cerdo, pescado, camarón, mariscos, etc.)

1) Pesar 2 g de la muestra homogeneizada (tejido) en un tubo centrífugo de plástico de 50 ml;

2) Añadir 2 ml de agua desionizada, agitar fuertemente durante 1 minuto (o utilizar el vórtice durante 30 s);

3) Añadir 8 ml de acetato de etilo, agitar o retorcer durante 3 minutos (Nota: si hay Shaker en el laboratorio, agitar durante 1 minuto, luego ponerlo en Shaker a 300 rpm a 25 °C durante 10 minutos);

4) Centrifugar a una temperatura superior a 3000 g a temperatura ambiente durante 5 minutos;

5) Coloque 2 ml de supernatante en un tubo de centrifugadora de vidrio limpio.

6) Se secan soplando en un baño de agua de 50 a 60 °C mediante un dispositivo de secado por nitrógeno.

7) Añadir 0,5 ml de n-hexane, luego 0,5 ml de solución de redisolución, agitar de arriba abajo durante 20 veces.

8) Centrifugar a una temperatura superior a 3000 g a temperatura ambiente durante 5 minutos;

9)Capa superior desechableN-hexanoy capa media de impurezas;

10) Tome 50ul de líquido de la capa inferior para el ensayo.

Doble de dilución de la muestra: 1

b) Leche cruda

1) Tomar la leche cruda recolectada, descongelarla y devolverla a temperatura ambiente durante más de 30 minutos;

2) Poner las puntas en la capa inferior de leche cruda, extraer 1 ml de muestra en el tubo de centrifugadora de 2 ml ((Nota: no tomar la crema de la capa superior);

3) Añadir 50ul 1M HCl, agitar fuertemente durante 1min (o en vórtice durante 30s);

4) Centrifugar a una temperatura superior a 4000 g a temperatura ambiente durante 10 minutos;

5) Tomar 100ul de líquido transparente de capa superior en otro tubo de centrifugadora (no tomar crema de capa superior), luego añadir 400ulSolución de redisolución, agitar fuertemente durante 1 minuto (o en vórtice durante 30 s);

6) Tomar líquido de 50ul para el ensayo.

Doble de dilución de la muestra: 5

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1) Antes de su uso, llevar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C);

2) Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3) La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

4) Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1. Lleve el kit de ensayo a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos, tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de su uso, coloque las tiras de micro-pozo necesarias en los marcos de las placas.Se vuelve a sellar la microplaca no utilizada, almacenar a 2-8 °C, no congelado.
2. Numeración: numerar los micropozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado, registrándose sus posiciones.
3. Añadir 50 μL de la muestra o solución estándar en pozos duplicados separados; luego añadir 50 μL de la solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos, mezclar suavemente sacudiendo manualmente la placa.Sella la microplaca con la membrana de la cubierta, yIncubación a 4 °C durante 60 minutos en la oscuridad.
4. Derramar líquido del microcubo, secar con una tapa en papel absorbente, añadir 250 μL/pozo de amortiguador de lavado para lavar la microplata durante 15-30 s, luego sacar y secar con una tapa en papel absorbente, repetir 3-4 veces.(Si hay las burbujas después de batir, cortarlos con las puntas limpias).
5. Añadir conjugado de enzimas de 100ul, mezclar suavemente sacudiendo el plato manualmente ((Después de lavar el plato, no lo deje a un lado por un rato).Incubación a los 25 años°Cpara20 minutos en la oscuridad.Lavado como paso 4.
6. Coloración: añadir una mezcla de 100ul de solución de sustrato A y solución de sustrato B en cada pozo (Nota: mezclar la solución de sustrato A y la solución de sustrato B a 1:1, use la mezcla en 10 minutos, no use metal para contenerla o revuelva, para evitar que el sustrato no sea válido). mezcle suavemente sacudiendo la placa manualmente, sella la microplaca con la membrana de cubierta y luegoIncubación a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para coloración.
7. Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente. Detenerse con éxito cuando el color del sustrato de azul a amarillo.Se recomienda leer el valor de OD a la doble longitud de onda 450/630 nm en un plazo de 5 minutos..

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados: el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de nitroimidazoles.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/ml) de nitroimidazoles puede obtenerse comparando el valor medio de la DPO de la muestra con el de la solución estándar..3, y el de la muestra II es 1.0, el valor OD de las soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0,05ppb, 1,415 para 0,15ppb, 0,74 para 0,45ppb, 0,313 para 1,35ppb, 0,155 para 4,05ppb,En consecuencia, el rango de concentración de la muestraI es de 1.35 a 4.05 ppm, y el de la muestra II es de 0.05 a 0.45 ppm.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia se obtienen para el valor medio de OD (B) de la muestra y la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de la solución estándar y los valores del semilogaritmo de la solución estándar de nitroimidazoles (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de nitroimidazoles en la muestra.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor estándar de DO inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada de situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.
3. Mezclar uniformemente, de lo contrario habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evitar el contacto con la piel.
5. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la DO.No intercambiar los reactivos de los kits de lotes diferentes para su uso..
6. La solución estándar y la primera de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
7. Se desechará la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.