Equipo de prueba ELISA de florfenicol LSY-10008 para detección de carne Diagnóstico de seguridad alimentaria certificado ISO

Kit de prueba ELISA de florfenicol

N.º de catálogo LSY-10008

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de florfenicol en muestras.Los antígenos de acoplamiento están recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos.El florfenicol de la muestra y los antígenos conjugados recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por los anticuerpos anti-Florfenicol.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) tiene una correlación negativa con la concentración de florfenicol en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de Florfenicol.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad:0.1ppb

Temperatura de la incubadora:25 ℃

Tiempo de incubadora:30 minutos~15mín.

Límite de detección:

Miel, pañuelos, huevo 0.1ppb

Leche, pienso 0,2 ppb

Índice de recuperación:

Tejidos, miel, leche, huevo, pienso 90 ±30%

Tasa de reacción cruzada:

Florfenicol 100%

Florfenicol Amina 11%

el tiamfenicol < 0,1%

el cloranfenicol < 0,1%

3. Componentes

• Tiras de micropocillos: 12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una
• Solución estándar 6× (1 ml cada una): 0 ppb, 0,1 ppb, 0,2 ppb, 0,4 ppb, 0,8 ppb y 1,6 ppb
• Conjugado enzimático (7 ml) tapa roja
• Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml) con tapa azul
• Solución de sustrato A (7 ml) tapa blanca
• Solución de sustrato B (7 ml) tapa negra
• Solución de parada (7 ml) tapa amarilla
• Tampón de lavado concentrado 20× (40 ml) tapa blanca
• Tapa transparente de solución redisolunte concentrada 2× (50 ml)

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos:lector de microplacas, homogeneizador, impresora, dispositivo de secado de nitrógeno, oscilador, centrífuga, pipetas medidoras, balanza( una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora.
• Micropipetas:monocanal de 20 a 200 µl y de 100 a 1000 µl, y multicanal de 30 a 300 µl;
• Reactivos:Acetonitrilo, acetato de etilo, N-hexano

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra se deben abordar los siguientes puntos:

• Solo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos.
• Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

Solución ISolución de redisolución de muestra:

Diluya la solución de redisolución concentrada 2X con agua desionizada a 1:1 (1 parte de solución de redisolución concentrada 2X + 1 parte de agua desionizada).

SoluciónⅡ Solución de extracción de muestras:

Mezcle acetonitrilo y acetato de etilo en una proporción 1:2 uniforme (1 parte de acetonitrilo + 2 partes de acetato de etilo).

Preparación de muestras

a)Tejido (pollo/hígado, cerdo/hígado,camarones, pescadoetc.)

• Pese 3,0 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo de centrífuga de 50 ml, primero agregue 3 ml de agua desionizada para mezclar uniformemente, luego agregue 6 ml de acetato de etilo, agite adecuadamente durante 2 minutos, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 mín.
• Tomar 2 ml del sobrenadante y secar con nitrógeno a 50-60 ℃.
• Agregue 2 ml de N-hexano para disolver los residuos secos, luego agregue 1 ml de la solución redisoludora de la muestra, mezcle durante 30 segundos;Centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min.Retire la fase orgánica de la capa superior.
• Tome 50 l de la capa inferior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:1

b)honey

1 Coloque 2 ± 0,05 g de muestra de miel en un tubo de centrífuga y disuelva con 4 ml de agua desionizada.Añadir 4 ml de acetato de etilo, agitar durante 2 min.Centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min.

2 Transfiera 2 ml de sobrenadante a otro tubo de centrífuga y seque con nitrógeno a 50-60 ℃.Agregue 1 ml de la solución redisoludora de la muestra para disolver el residuo seco, mezcle durante 30 segundos.

3 Tome 50 µL para análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:1

C)Leche

• Tome 1 ml de muestra de leche homogeneizada en un tubo de centrífuga de 5 ml, agregue 2 ml de solución de extracción de muestra, agite durante 1 minuto, centrifugue a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 minutos.
• Tomar 1 ml del sobrenadante, secar con nitrógeno a 50-60 ℃.
• Agregue 1 ml de N-hexano para disolver los residuos secos, luego agregue 1 ml de la solución redisoludora de la muestra, mezcle durante 30 segundos;Centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min.Retire la fase orgánica de la capa superior.
• Tome 50 l de la capa inferior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra: 2

d) Alimentar

• Pesar 1 ± 0,05 g de la muestra de alimentación homogeneizada en un tubo de centrífuga de 50 ml, primero agregar 3 ml de agua desionizada, luego agregar 6 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 1 min, centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min.
• Tomar 3 ml del sobrenadante y secar con nitrógeno a 50-60 ℃.
• Agregue 1 ml de N-hexano para disolver los residuos secos, luego agregue 1 ml de la solución redisoludora de la muestra, mezcle durante 30 segundos;Centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min.Retire la fase orgánica de la capa superior.
• Tome 50 l de la capa inferior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra: 2

mi) Huevo

• Pesar 2,0 ± 0,05 g (o 2 ml) de la muestra homogeneizada fresca en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 6 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 1 min, centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min.
• Tomar 3 ml del sobrenadante y secar con nitrógeno a 50-60 ℃.
• Agregue 1 ml de N-hexano para disolver los residuos secos, luego agregue 1 ml de la solución redisoludora de la muestra, mezcle durante 30 segundos;Centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min.Retire la fase orgánica de la capa superior.
• Tome 50 l de la capa inferior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:1

(Si no se pueden obtener 3 ml de sobrenadante durante el procesamiento, se puede tomar la solución después de centrifugaciones repetidas, o se pueden extraer 5 ml después de agregar 10 ml de acetato de etilo y se puede mantener la dilución).

6. Procedimientos ELISA

6.1 Instrucciones

• Deje que todos los reactivos y las tiras de micropocillos alcancen la temperatura ambiente antes de su uso (20-25 ℃).
• Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.
• La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en el ELISA.procedimientos.
• Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

6.2 Implementación de pruebas

1 Saque todos los reactivos necesarios de un ambiente de 2 a 8 ℃, llévelos a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos; tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse uniformemente antes de usarlo.

• Tome las tiras de micropocillos y los marcos de placas necesarios.Vuelva a sellar la microplaca no utilizada, guárdela a 2-8 ℃, no congelada.
• Preparación de la solución: disuelva 40 ml de tampón de lavado concentrado 20X con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado 20X + 19 partes de agua desionizada) o solo hasta el volumen requerido para su uso.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra de prueba y solución estándar deben realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.
• Agregue 50 µL de la muestra o solución estándar para separar los pocillos duplicados, agregue 50 µL del conjugado enzimático y luego agregue 50 µL de la solución de trabajo del anticuerpo en cada pocillo.Mezcle suavemente agitando la placa manualmente, selle la microplaca con la membrana de cubierta yincubar en25℃para30 mín..
• Lave la microplaca con el tampón de lavado a 250 l/pocillo de 4 a 5 veces.Cada vez, remoje el pozo con el tampón de lavado durante 15 a 30 segundos y luego agítelo para que se seque (si quedan burbujas después de aletear, córtelas con las puntas limpias).
• Coloración: agregue 50 µL de la solución del sustrato A y luego 50 µL de la solución del sustrato B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar en25℃para15min en la oscuridad para colorear.
• Determinación: añadir 50 µL de la solución de parada en cada pocillo, mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (recomendamos leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 5 minutos).

7. Juicio de resultados

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de Florfenicol.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestraⅠ es 0,3 y el de la muestraⅡ es 1,0, el valor de DO de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,1 ppb, 1,415 para 0,2 ppb, 0,74 para 0,4 ppb, 0,313 para 0,8 ppb , 0,155 para 1,6 ppb, por lo tanto, el rango de concentración de la muestraⅠ es de 0,8 a 1,6 y el de la muestraⅡ es de 0,2 a 0,4 ppb.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir,

B: el valor de DO promedio (pocillos dobles) de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores de semilogaritmo de las soluciones estándar de Florfenicol (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el factor de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de Florfenicol en la muestra.

Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software).

8. Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada;Continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
• Mezcle uniformemente, de lo contrario habrá una reproducibilidad indeseable;
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 0 inferior a 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;la fecha de producción está en la caja.