LSY-10041 Kit de prueba ELISA de ciproheptadina para detección de orina, tejidos y alimentos

Kit de prueba ELISA de ciproheptadina

N.º de catálogo LSY-10041

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de ciproheptadina en orina y muestras de tejido.Los antígenos de acoplamiento están recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos.La ciproheptadina en la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por el anticuerpo anti-ciproheptadina; agregue el sustrato TMB para la coloración.Cuanto mayor sea la ciproheptadina en la muestra, menos anticuerpo ELISA se combinará en la fase sólida y más clara será la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la ciproheptadina que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de Ciproheptadina.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.04ppb

Temperatura de incubación: 25 ℃

Tiempo de incubación: 30 minutos—15 minutos

Límite de detección

Orina 0,04 ppb

Tejido 0,08 ppb

Alimentación 0,4 ppb

Tasa de reacción cruzada

Ciproheptadina 100%

Índice de recuperación

Orina 95±20%

Tejido 85±25%

Alimentación 85±25%

3. Componentes

1) Tiras de micropocillos: 12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una

2) Solución estándar 6X (1 ml cada una): 0 ppb, 0,04 ppb, 0,12 ppb, 0,36 ppb, 1,08 ppb y 3,24 ppb

3) Tapa roja del conjugado enzimático (7 ml)

4) Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml) con tapa azul

5) Tapa blanca de solución de sustrato A (7 ml)

6) Tapa negra de solución de sustrato B (7 ml)

7) Tapa amarilla de solución de parada (7 ml)

8) Tapa blanca de tampón de lavado concentrado 20X (40 ml)

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos:lector de microplacas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, centrífuga, pipetas medidoras y balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g);
• Micropipetas:monocanal 20-200 µL, 100-1000 µL y multicanal 30-300 µl;
• reactivos: Acetonitrilo, CH₂CL₂, ácido acético glacial

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra se deben abordar los siguientes puntos:

• Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;
• Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar contaminación que interfiera con los resultados experimentales..

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1) Acetonitrilo-CH₂CL₂Solución: Mezcle 80 ml de acetonitrilo y 20 ml de CH₂CL₂igualmente.

2) Solución de extracción de muestra: Añadir 1 ml de ácido acético glacial en 100 ml de acetonitrilo-CH₂CL₂Solución.

5.1 Preparación de muestras

a)Orina

Tome directamente 50 µL de orina brillante para realizar la prueba (si la orina está turbia, debe filtrarse o centrifugarse durante 10 minutos a 4000 r/min hasta obtener orina brillante), la orina no utilizada debe almacenarse congelada.

Pliegue de dilución de la muestra:1

b) Tejido

1) Pese 2 ± 0,05 g de muestra de tejido homogeneizado en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregue 8 ml de solución de extracción de muestra, agite completamente durante 3 minutos, centrifugue a 4000 r/min a 20 ℃ durante 10 minutos;

2) Tome 2 ml de sobrenadante, seque con nitrógeno o aire a 56 ℃, agregue 1 ml de N-hexano para disolver el residuo seco, luego agregue 1 ml de agua desionizada, agite durante 30 s, centrifugue a 4000 r/min a 20 ℃ durante 10 min, deseche la fase orgánica de la capa superior.

3) Tome 50 µL de capa inferior para realizar la prueba.

Pliegue de dilución de la muestra:2

C)Alimentar

1) Triturar la muestra, pesar 1,0 ± 0,05 g en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregar 10 ml de solución de extracción de muestra, agitar completamente durante 3 minutos, centrifugar a más de 4000 r/min a 20 ℃ durante 10 minutos.

2) Tome 1 ml de sobrenadante, seque con nitrógeno o aire a 56 ℃, use 1 ml de agua desionizada para disolver el residuo seco, agite completamente durante 90 segundos;

3) Tomar 50 µL para análisis.

Pliegue de dilución de la muestra: 10

6. Procedimientos ELISA

6.1 Precauciones

• Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a equilibrio a temperatura ambiente (20-25 ℃) antes de su uso.
• Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.
• La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos de ELISA.
• Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

6.2 Operación

• Lleve los kits de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos.Tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse para que se mezcle uniformemente antes de usarlo;
• Coloque las tiras de micropocillos necesarias en marcos de placas.Vuelva a sellar la microplaca no utilizada, guárdela a 2-8 ℃, no congelada.
• Preparación de la solución: Diluya 40 ml (20x) de tampón de lavado concentrado con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado + 19 partes de agua desionizada), o prepare la solución según sea necesario.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.
• Agregue 50 µL de la muestra o solución estándar para separar los pocillos duplicados, agregue 50 µL de conjugado enzimático en cada pocillo, luego agregue 50 µL de solución de trabajo de anticuerpo, agite para uniformar, luego selle la microplaca con la membrana de cubierta yincubar en25℃ durante 30 minutos.
• Vierta el líquido de los pocillos, agite para secar sobre papel absorbente, agregue 250 l/pocillo de tampón de lavado para lavar la microplaca durante 15-30 segundos, luego saque y agite para secar con papel absorbente, repita 4-5 veces.(Utilice una punta de lanza limpia para perforar las burbujas)
• Coloración: agregue 50 µL de la solución del sustrato A y luego 50 µL de la solución B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar en25℃ durante 15 minutosen la oscuridad para la coloración;
• Determinación: añadir 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de DO de cada pocillo en 5 minutos (se recomienda leer el valor de DO en la longitud de onda dual de 450/630 nm).

7. Juicio de resultados

Hay dos métodos para juzgar los resultados: el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de DO de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de ciproheptadina.

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7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestraⅠ es 0,3 y el de la muestraⅡ es 1,0 ppb, el valor de DO de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,04 ppb, 1,415 para 0,12 ppb, 0,74 para 0,36 ppb, 0,313 para 1,08 ppb, 0,155 para 3,24 ppb; en consecuencia, el rango de concentración de la muestraⅠ es de 1,08 a 3,24 ppb y el de la muestraⅡ es de 0,12 a 0,36 ppb.Multiplicar la carpeta de dilución correspondiente, luego se obtiene la concentración real de Ciproheptadina.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia se obtienen para el valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar dividido por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir,

B: el valor de DO promedio (pocillos dobles) de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de la solución estándar y los valores de semilogaritmo de la solución estándar de ciproheptadina (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.Posteriormente el valor resultante se multiplica por el factor de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de Ciproheptadina en la muestra.

Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software).

8. Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada por situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada, por lo tanto, continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
• Mezcle uniformemente, de lo contrario habrá una reproducibilidad no deseada.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) inferior a 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:conservar entre 2 y 8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;la fecha de producción está en la caja.

Observaciones: Si el paquete al vacío de las placas de microtitulación tiene fugas, la placa de microtitulación es normal y efectiva, no afecta el resultado experimental.Siéntase libre de utilizarlo.