LSY-10041 Kit de detección ELISA de feniletanolamina A para diagnóstico de residuos de fármacos veterinarios

Feniletanolamina A ELISAPrueba kél(Pañuelos, piensos)

N.º de catálogo LSY-10040

1. Principio

El kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de feniletanolamina A en la muestra.El antígeno conjugado está recubierto previamente en las tiras de los micropocillos.La feniletanolamina A de la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por los anticuerpos anti-feniletanolamina A.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de feniletanolamina A en la muestra.El valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de feniletanolamina A.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.1ppb

Temperatura de la incubadora:25 ℃

Tiempo de incubadora: 30 min ~ 15 min

Límite de detección

Tejido 0,2 ppb

Alimentación 0,5 ppb

Reacciones cruzadas

Feniletanolamina A 100%

Ractomina <1%

Salbutamol <1%

Clenbuterol <1%

Índice de recuperación

Tejido, alimentación 85±25%

3.Componentes

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos:lector de microplacas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, oscilador, centrífuga, pipetas medidoras, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora.
• Micropipetas:monocanal 20-200 µL y 100-1000 µL, y multicanal 30-300 µL;
• Reactivos:Acetato de etilo, N-hexano, Ácido acético glacial

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben abordarse antes del pretratamiento)

• Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;
• Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

• Solución de extracción de muestras: tomar 99 ml de acetato de etilo, añadir 1 ml de ácido acético glacial y mezclar bien.
• Solución de redisolución de muestras: la solución de redisolución concentrada 2x se diluye con agua desionizada a 1:1 (1 ml de solución de redisolución concentrada + 1 ml de agua desionizada), utilizada para la redisolución de muestras.

Preparación de muestras

5.1 Fnecesitar

• Moler la muestra, tomar 1,0 ± 0,05 g en un tubo de centrífuga de 50 ml;
• Agregar 10 mL de solución de extracción de muestra, agitar con oscilador durante 3 min;
• Centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min;
• Tome 2 ml de sobrenadante, seque con nitrógeno o aire a 50-60 ℃;
• Agregue 1 ml de N-hexano, luego agregue 1 ml de solución para redisolver la muestra, agite durante 30 segundos;
• Centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min, retirar la fase orgánica de la capa superior.
• Tome 20 l de capa inferior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:5

(Debido a que hay alteraciones en la muestra, se recomienda2PPB como valor de CORTE de muestra.)

5.2 Tejido

1.Tome una muestra de tejido homogénea de 2,0 ± 0,05 g en un tubo de centrífuga de 50 ml;

2.Agregue 8 ml de solución de extracción de muestra, agite con el oscilador durante 2 min;

3.Centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min;

4.Tomar 2 ml de sobrenadante, secar con nitrógeno o aire a 50-60 ℃;

5.Agregue 1 ml de N-hexano, luego agregue 1 ml de solución para redisolver la muestra, agite durante 30 segundos;

6. Centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 10 min, retirar la fase orgánica de la capa superior.

7.Tome 20 µL de capa inferior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:2

(Debido a que hay alteraciones en la muestra, se recomienda1PPB como valor de CORTE de muestra.)

6. Procedimientos ELISA

6.1 Instrucciones

• Deje que todos los reactivos y las tiras de micropocillos alcancen la temperatura ambiente (20-25 ℃) antes de su uso.
• Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.
• La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas son los puntos clave en los procedimientos de ELISA.
• Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

6.2 Procedimientos de operación

• Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos; tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de usarlo.
• Preparación de la solución: Diluya los 40 ml de tampón de lavado concentrado 20X con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado 20X + 19 partes de agua desionizada) o prepárelo según la cantidad necesaria.
• Coloque las tiras de micropocillos necesarias en marcos de placas.Se volvió a sellar la microplaca no utilizada, se almacenó a 2-8 ℃, no se congeló.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.
• Agregue 50 µL de la muestra o la solución estándar en pocillos duplicados separados;agregue 50 µL de conjugado enzimático, luego agregue 50 µL de la solución de trabajo del anticuerpo en cada pocillo, selle la microplaca con la membrana protectora yincubar a los 25 ℃ durante 30 mín..
• Vierta el líquido del micropocillo, agite para secar sobre papel absorbente;agregar 250 µL/pocillo de agua desionizada, lavar durante 15-30 segundos, luego sacar y agitar para secar con papel absorbente, repetir 4-5 veces.

6 Coloración: agregue 50 µL de la solución del sustrato A y 50 µL de la solución B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar a 25 ℃ durante15min en la oscuridad para colorear.

7 Determinación: agregue 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD de cada pocillo.(Se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 5 minutos).

7. Juicio de resultados

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de DO de la muestra tiene una correlación negativa con la feniletanolamina A en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestraⅠ es 0,3 y el de la muestraⅡ es 1,0, el valor de DO de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,866 para 0,1 ppb, 1,415 para 0,3 ppb, 0,864 para 0,9 ppb, 0,413 para 2,7 ppb , 0,155 para 8,1 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestraⅠ es de 0,3 a 0,9 ppb, y el de la muestraⅡ es de 2,7 ppb a 8,1 ppb.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir

B: el valor OD promedio de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores de semilogaritmo de las soluciones estándar de feniletanolamina A (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el factor de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración real de Feniletanolamina A en la muestra.

Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software)

8. Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada;Continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
• Mezcle uniformemente, lave la placa completamente; la reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de la placa.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 0 inferior a 0,5 (A450 nm < 0,5) indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el paquete al vacío de la microplaca tiene fugas, su uso aún es válido, no afecta el resultado de la prueba, no dude en usarlo.