LSY-10006-2 Kit de prueba ELISA de tetraciclinas (TC) de diagnóstico de seguridad alimentaria para miel y camarones

Tetraciclinas (TC)Kit de prueba ELISA

N.º de catálogo LSY-10006-2

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de tetraciclinas en la muestra de miel.Los antígenos de acoplamiento están recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos.Las tetraciclinas de la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por el anticuerpo anti-tetraciclinas.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con las tetraciclinas que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de Tetraciclinas.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.1ppb

Temperatura de incubación: 25 ℃

Tiempo de incubación: 30 minutos—15 minutos

Límite de detección:

Miel 4ppb

Tasa de reacción cruzada:

Doxiciclina 100%

Tetraciclina 150%

Minociclina 92%

Piritiona 76%

Clortetraciclina 75%

Demetilcromicina 70%

Oxitetraciclina 83%

Índice de recuperación:

Miel 70%~120%

3. Componentes

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos: lector de microplacas, homogeneizador, oscilador, centrífuga, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), pipeta graduada, incubadora.
• Micropipetas: monocanal 20~200 µL y 100~1000 µL, y multicanal 30~300 µL;
• reactivos:NaOH.

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra se deben abordar los siguientes puntos:

1) Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:
1) Extracto de muestra A

1 parte de extracto de muestra 20× A + 19 partes de agua desionizada

2) Extracto de muestra B

1 parte de 2× extracto de muestra B + 1 parte de agua desionizada

3) solución de NaOH 1 M

Pesar 4 g de NaOH y añadir agua desionizada a 100 ml.

4)Sabundante diluyente

1 parte de diluyente de muestra 20× + 19 partes de agua desionizada

5.1 Miel

1) Tome 2 ± 0,05 g de la muestra de miel en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregue 3 ml de extracto de muestra A diluido y agite durante 3 minutos;

2) Luego agregue 600 ul de solución de NaOH 1 M y 2,4 ml de extracto de muestra B diluido, agite durante 3 minutos;Centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente (20 - 25 ℃) durante 5 minutos.

3) Tome 50 ul de líquido transparente de capa superior, agregue 450 ul de diluyente de muestra diluido y mezcle uniformemente;

4) Tome 50ul de la solución mixta anterior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:40

6.Procedimientos ELISA

Instruccións

1. Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25 ℃).

2. Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.

3. La reproducibilidad del análisis ELISA depende, en gran medida, de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

4. Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

Procedimientos de operación

• Saque todos los reactivos necesarios del kit y colóquelos a temperatura ambiente (20 a 25 ℃) durante al menos 30 minutos.Tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse para que se mezcle uniformemente antes de usarlo.
• Tome las tiras de micropocillos y los marcos de placas necesarios.Se volvió a sellar la microplaca no utilizada, se almacenó a 2-8 ℃, no se congeló.
• Preparación del tampón de lavado: diluya 15 ml del tampón de lavado concentrado 20X con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado 20X + 19 partes de agua desionizada).O prepare el tampón de lavado en la cantidad necesaria.
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.
• Agregue 50 µl de la muestra o solución estándar para separar los pocillos duplicados y agregue 50 µl de conjugado enzimático y luego 50 µl de la solución de anticuerpo en cada pocillo.Mezcle suavemente agitando la placa manualmente, selle la microplaca con la membrana de cubierta yincubar en25℃para30 minutos.
• Vierta el líquido del micropocillo, agregue 250 µL/pocillo de tampón de lavado durante 15 a 30 segundos, repita de cuatro a cinco veces, luego agite para secar (si quedan burbujas después de batir, córtelas con las puntas limpias).
• Coloración: añadir 50 µL del sustrato A y luego 50 µL del sustrato B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar en25℃ para15minutos en la oscuridad para colorear.
• Determinación: añadir 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual de 450/630 nm en 5 minutos).

7. Juicio de resultados

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de DO de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de tetraciclinas en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestra Ⅰ es 0,3 y el de la muestra Ⅱ es 1,0, mientras que los de las soluciones estándar son los siguientes: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,1 ppb, 1,415 para 0,3 ppb, 0,74 para 0,9 ppb, 0,313 para 2,7 ppb y 0,155 para 8,1 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestra Ⅰ es de 2,7 a 8,1 ppb, y el de la muestra Ⅱ es de 0,3 a 0,9 ppb.

7.2 Determinación cuantitativa

El valor medio de los valores de absorbancia es equivalente al porcentaje del valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar dividido por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir,

B: el valor de DO promedio (pocillos dobles) de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores de semilogaritmo de las soluciones estándar de tetraciclinas (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el factor de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de Tetraciclinas en la muestra.

Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software)

8. Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada.
• Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción de manera uniforme y lave bien la microplaca; de lo contrario, se producirá una reproducibilidad no deseada.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 0 inferior a 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;La fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el paquete al vacío de la microplaca tiene fugas, su uso aún es válido, no afecta el resultado de la prueba, no dude en usarlo.