LSY-10026 Kit de detección ELISA de melamina para leche, leche en polvo, dulces y mantequilla

MelaminaKit de prueba ELISA

N.º de catálogo LSY-10026

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo indirecto para la detección de melamina en la muestra.El antígeno de acoplamiento está recubierto previamente sobre las tiras de los micropocillos.La melamina de la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por los anticuerpos anti-melamina.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra de prueba tiene una correlación negativa con la concentración de melamina en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de Melamina.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad:0,5ppb

Temperatura de la incubadora:25 ℃

Tiempo de incubadora: 30 min ~ 15 min

Límite de detección:

Leche fresca, leche pura 5ppb

Yogur, leche en polvo 10ppb

Tasa de reacción cruzada:

Melamina 100%

Índice de recuperación:

Leche fresca, leche pura 90±25%

Yogur, leche en polvo 80±25%

3.Componentes

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

• Equipos:lector de microplacas, impresora, vórtice, centrífuga, pipetas medidoras, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g).
• Micropipetas:monocanal 20~200 µL, 100~1000 µL;y multicanal 30～300 µl;

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben abordarse antes del pretratamiento)

1) Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para diferentes reactivos;

• Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución

A.Solución de extracción de muestras

Diluir 20x la solución de extracción de muestras con agua desionizada a 1:19;

B.Dilución de muestra

Diluya la dilución de la muestra 10x con agua desionizada a 1:9.

5.1 METROcalaña(leche pura, leche fresca)

1. Tomar 50 ul de leche fresca para analizar.

Pliegue de dilución de la muestra:1

5.2 Leche en polvo

1 Tome 1 g de leche fresca en polvo en un tubo de centrífuga de 50 ml, agregue 9 ml de solución de extracción de muestra, agite y agite durante 3 minutos, centrifugue a más de 4000 r/min a 15 ℃ durante 10 min;

2 Deje a un lado la capa superior de grasa proteica condensada, tome 50 ul del líquido de la capa intermedia para analizar

Pliegue de dilución de la muestra: 10

5.3 Yogur

1 Tome 1 g de muestra de yogur fresco en un tubo de centrífuga de 10 ml/15 ml/50 ml, agregue 4,5 ml de dilución de muestra, agite y agite durante 2 minutos;

2 Tome 50 µL de líquido de la capa superior para su análisis.

Pliegue de dilución de la muestra: 5

6. Procedimientos ELISA

6.1 Instrucciones

• Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25 ℃).
• Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.
• La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos de ELISA.
• Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada con la membrana protectora.

6.2 Procedimientos de operación

• Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos; tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse uniformemente antes de usarlo;Coloque las tiras de micropocillos necesarias en los marcos de las placas.Se volvió a sellar la microplaca no utilizada, se almacenó a 2-8 ℃, no se congeló.
• Preparación de la solución: diluya 15 ml del tampón de lavado concentrado 20X con agua desionizada hasta 300 ml para su uso;
• Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.
• Agregue 50 µl de la muestra/solución estándar para separar los pocillos duplicados, luego agregue 50 µl de conjugado enzimático, luego agregue 50 µl de solución de trabajo de anticuerpo a cada pocillo, agite adecuadamente, selle la microplaca con la membrana de cubierta yincubar en25℃ para30 mín.;
• Vierta el líquido de los pocillos, lave la microplaca con el tampón de lavado diluido a 250 l/pocillo durante 5-6 veces.Cada vez, remoje el pocillo con el tampón de lavado diluido durante 15-30 segundos y luego agátelo para secarlo sobre papel absorbente (si quedan burbujas después del aleteo, córtelas con las puntas limpias).
• Coloración: añadir 50 µL del sustrato A, luego 50 µL del sustrato B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yincubar en25℃ para15mín.en la oscuridad para darle color;
• Determinación: añadir 50 µL de la solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD de cada pocillo.(Se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en 5 minutos).

7. Juicio de resultados

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de melamina.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra de prueba con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestraⅠ es 0,3 y el de la muestraⅡ es 1,0, el valor de DO de las soluciones estándar es: 2,043 para 0 ppb, 1,604 para 0,5 ppb, 1,101 para 1,5 ppb, 0,512 para 4,5 ppb, 0,161 para 13,5 ppb , 0,055 para 40,5 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestra Ⅰ es de 4,5 a 13,5 ppb, y el de la muestra Ⅱ es de 1,5 a 4,5 ppb.

• Cuantitativo determinación

El valor medio de los valores de absorbancia es equivalente al porcentaje del valor OD promedio (B) de la muestra de prueba y la solución estándar dividido por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir

B: el valor de DO promedio (pocillos dobles) de la muestra de prueba o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores semilogarítmicos de las soluciones estándar de melamina (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de prueba de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.Posteriormente el valor resultante se multiplica por el factor de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de Melamina en la muestra.

8. Precauciones

• La temperatura ambiente inferior a 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras de prueba que no regresan a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.
• La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada;Continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
• Mezcle uniformemente, de lo contrario habrá una reproducibilidad no deseada.
• La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
• No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.
• Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
• Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) inferior a 0,5 indica su degeneración.
• La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad.

Almacenamiento:almacenado a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;la fecha de producción está en la caja

Nota: Si el paquete al vacío de la microplaca tiene fugas, su uso aún es válido, no afecta el resultado de la prueba, no dude en usarlo.