Equipo de diagnóstico ELISA del verde de la malaquita de la seguridad alimentaria LSY-10027 para los pescados, camarones, agua

Kit ELISA verde malaquita

N.º de catálogo LSY-10027

1. Principio

Este kit de prueba se basa en el inmunoensayo enzimático competitivo.El antígeno de acoplamiento está recubierto previamente sobre las tiras de los micropocillos.El verde de malaquita de la muestra y los antígenos de acoplamiento recubiertos previamente en las franjas de los micropocillos compiten por los anticuerpos anti-verde de malaquita.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el verde de malaquita que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene el contenido de residuos de verde de Malaquita.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.05ppb

Temperatura de la incubadora:25 ℃

Tiempo de incubadora:30 minutos~30 minutos~15 minutos

Límite de detección

Productos acuáticos, por ejemplo, camarones, pescado 0,5 ppb

Agua 0,1 ppb

Índice de recuperación

Camarones, pescado, agua 80%--110%

Tasa de reacción cruzada

Verde malaquita 100%

Verde leucomalaquita 0,1%

Violeta de genciana 95%

Violeta leucocristal 0,1%

Precisión

CV≤12%

3. Componentes

• Tiras de micropocillos: 12 tiras con 8 pocillos extraíbles cada una
• Solución estándar concentrada 10X (1 ml cada una, tapa negra): 0 ppb, 0,5 ppb, 1,5 ppb,

4,5 ppb, 13,5 ppb y 40,5 ppb

• Conjugado enzimático (12 ml) tapa roja
• Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml) con tapa azul
• Solución de sustrato A (7 ml) tapa blanca
• Solución de sustrato B (7 mL)……………………………………………….gorra negra
• Solución de parada (7 ml) tapa amarilla
• Tampón de lavado concentrado 20× (40 ml) tapa blanca
• Tapa negra oxidante (3 ml)

10) Tapa transparente de solución redisolunte concentrada 4× (50 ml)

4. Materiales necesarios pero no proporcionados

1) Equipos:lector de microplacas, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, oscilador, centrífuga, pipetas medidoras, balanza (una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora.

2) Micropipetas:monocanal 20-200 µL y 100-1000 µL, y multicanal 30-300 µL.

3) Reactivos:Acetonitrilo (CH₃CN), cloruro de metileno, N-hexano, sulfato de sodio (Na₂ENTONCES₄).

5. Pretratamiento de muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben abordarse antes del pretratamiento)

1) Sólo se pueden usar puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se usan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y debe volver a limpiarse si es necesario, para evitar contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Spreparación de soluciónantes de la muestrapagretratamiento

• Solución de extracción de muestras:

Acetonitrilo (CH₃CN) -Solución mezcladora de cloruro de metileno:V_acetonitrilo-V_{cloruro de metileno}= 4: 1,tomar 40 ml de acetonitrilo (CH₃CN), luego agregue 10 ml de cloruro de metileno y mezcle uniformemente.

• La solución de redisolución concentrada 4X se diluye con agua desionizada a 1:3 (1 parte de solución de redisolución concentrada 4X + 3 partes de agua desionizada) o se prepara según la cantidad necesaria.

5.1Preparación de muestrasde agua

1) Tome 50ul de muestra de agua clara para detectarla directamente (si es agua turbia, debe filtrarse o centrifugarse a 4000 r/min durante 10 minutos hasta obtener agua clara).La muestra de agua no utilizada debe almacenarse congelada.

Pliegue de dilución de la muestra:1

5.2Preparación de muestrasde productos acuáticos

(1) Pese 2 ± 0,05 g de muestra de tejido homogeneizado en un tubo de centrífuga de 50 ml.Añadir 6 ml de solución de extracción de muestras, 2 g de sulfato de sodio (Na₂ENTONCES₄), agitar durante 5 min, centrifugar a más de 4000 r/min a temperatura ambiente (25 ℃) durante 10 min.

(2) Tome 3 ml de sobrenadante, agregue 20 ul de oxidante, agite uniformemente y sople hasta secar con nitrógeno o aire a 56 ℃.

(3) Agregue 1 ml de N-hexano y 1 ml de solución diluida para redisolver la muestra, agite uniformemente durante 1 min y centrifugue a más de 4000 r/min durante 5 min.

(4) Tome 50 µL para análisis.

Pliegue de dilución de la muestra:1

(Nota: Con este método, el resultado es la cantidad total de Verde Malaquita,leucomverde alaquita, GRAMOvioleta entiany violeta leucocristal.)

6. Procedimientos ELISA

Instrucciones

(1) Lleve todos los reactivos y las tiras de micropocillos a equilibrio a temperatura ambiente (20-25 ℃) antes de su uso.

(2) Devuelva todos los reactivos a 2-8 ℃ inmediatamente después de su uso.

(3) La reproducibilidad del análisis ELISA depende, en gran medida, de la consistencia del lavado de la placa.El correcto funcionamiento del lavado de placas es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

(4) Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe sellarse con la membrana de cubierta.

ELISAoperación

(1) Lleve el kit de prueba a temperatura ambiente (20-25 ℃) durante al menos 30 minutos; tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse uniformemente antes de usarlo.

(2) Tome las tiras de micropocillos y los marcos de placas necesarios.Se volvió a sellar la microplaca no utilizada y se almacenó a 2-8 ℃.

(3)Tampón de lavado diluido: Diluya los 40 ml de tampón de lavado concentrado (20x) con agua desionizada a 1:19 [1 parte de tampón de lavado concentrado (20x) + 19 partes de agua desionizada], o prepárelo según la cantidad necesaria.

PrepararestándarSolución d: diluya cierta cantidad de solución estándar concentrada 10X con solución diluida.solución redisolutivaa 10 veces, prepárese para el uso actual.Ver detalle a continuación:

Estándar 6: 4,05 ppb: tome 50 ul de estándar de 40,5 ppb, agregue 450 ul de solución redisoludora diluida y mezcle uniformemente.

Estándar 5: 1,35 ppb: tome 50 ul de estándar de 13,5 ppb, agregue 450 ul de solución redisoludora diluida y mezcle uniformemente.

Estándar 4: 0,45 ppb: tome 50 ul de estándar de 4,5 ppb, agregue 450 ul de solución redisoludora diluida y mezcle uniformemente.

Estándar 3: 0,15 ppb: tome 50 ul de estándar de 1,5 ppb, agregue 450 ul de solución redisoludora diluida y mezcle uniformemente.

Estándar 2: 0,05 ppb: tome 50 ul de estándar de 0,5 ppb, agregue 450 ul de solución redisoludora diluida y mezcle uniformemente.

Estándar 1: 0ppb: tome 50ul de estándar de 0ppb, agregue 450ul de solución redisoludora diluida y mezcle uniformemente.

(4) Numeración: numerar los micropocillos según las muestras y la solución estándar;cada muestra y solución estándar debe realizarse por duplicado;registrar sus posiciones.

(5) Agregue 50 µL de la muestra o solución estándar en cada pocillo, luego agregue la solución de trabajo de anticuerpos, 50 µL/pocillo, mezcle suavemente agitando la placa manualmente, selle la microplaca con la membrana de cubierta yincubar a los 25 ℃ durante 30 min.

(6) Vierta el líquido del micropocillo, lave la microplaca con el tampón de lavado a 250 µL/pocillo de 4 a 5 veces, cada vez durante 15 a 30 segundos, agite para secar con papel absorbente (si hay burbujas después de agitar , cortarlos con las puntas limpias).

(7) Agregue 100 µL de conjugado enzimático a cada pocillo, selle la microplaca con la membrana de cubierta, mezcle suavemente agitando la placa manualmente yincubar a los 25 ℃ durante 30 minutos, continúe como se describe en el paso (6).

(8) Coloración: agregue 50 µL de sustrato A y luego 50 µL de sustrato B en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando yincubar a los 25 ℃ para15min en la oscuridad.

(9) Determinación: agregue 50 µL de solución de parada en cada pocillo.Mezclar suavemente agitando.Luego, establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de DO de cada pocillo (se recomienda leer el valor de DO en la longitud de onda dual de 450/630 nm en 5 minutos).

7.Juicio de resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados;el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de DO de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de verde de malaquita en la muestra.

(1) Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor de DO promedio de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de DO de la muestra Ⅰ es 0,3 y el de la muestra Ⅱ es 1,0, el valor de DO de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,05 ppb, 1,415 para 0,15 ppb, 0,74 para 0,45 ppb, 0,313 para 1,35 ppb, 0,155 para 4,05 ppb, en consecuencia, el rango de concentración de la muestra Ⅰ es de 1,35 a 4,05 ppb, y el de la muestra Ⅱ es de 0,15 a 0,45 ppb.

(2) Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor OD promedio (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor OD (B₀) de la primera solución estándar (estándar 0) y posteriormente se multiplica por 100%, es decir

B: el valor de DO promedio (pocillos dobles) de la muestra o la solución estándar

B₀—el valor promedio de DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores de semilogaritmo de las soluciones estándar de verde malaquita (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.Posteriormente el valor resultante se multiplica por el factor de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de Verde Malaquita en la muestra.

Usar el software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis rápido y preciso de una gran cantidad de muestras.(Por favor contáctenos para este software)

8. Precauciones

(1) La temperatura ambiente por debajo de 25 ℃ o la temperatura de los reactivos y las muestras que no se devuelven a la temperatura ambiente (20-25 ℃) darán lugar a un valor de DO estándar más bajo.

(2) La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado estará acompañada de situaciones que incluyen curvas estándar no lineales y reproducibilidad no deseada;Continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.

(3) Mezcle uniformemente; de ​​lo contrario, se producirá una reproducibilidad no deseada.

(4) La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.

(5) No utilice el kit superando su fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits provocará cambios en la sensibilidad y los valores de detección de DO.No intercambie los reactivos de los kits de diferentes números de lote a utilizar.

(6) Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa con cierre automático para volver a sellarla.La sustancia estándar y el formador de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.

(7) Desechar la solución colorante con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.El valor de detección de la solución estándar 0 (0 ppb) inferior a 0,5 indica su degeneración.

(8) La temperatura de reacción óptima es 25 ℃, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas provocarán cambios en la sensibilidad de detección y los valores de OD.

9.Fecha de almacenamiento y caducidad.

Almacenamiento:almacenar a 2-8 ℃, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses;la fecha de producción está en la caja.

Observaciones: Si el paquete al vacío de las placas de microtitulación tiene fugas, la placa de microtitulación es normal y efectiva, no afecta el resultado experimental.Siéntase libre de utilizarlo.