Kit de ensayo ELISA de diagnóstico de seguridad alimentaria de sulfaquinoxalina (SQX) para análisis de miel y leche

Kit de ensayo ELISA de sulfaquinoxalina

No de catálogo LSY-10015

1Principio.

Este kit de prueba se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de sulfaquinoxalina en muestras.La sulfaquinoxalina en la muestra y los antígenos conjugados pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por los anticuerpos anti-sulfonamidasDespués de añadir el conjugado enzimático, se añade el sustrato TMB para la coloración.El valor de la densidad óptica (DO) de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de sulfaquinoxalina en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de sulfaquinoxalina.

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 1 ppb

Temperatura de la incubadora: 25°C

Tiempo de la incubadora: 60 minutos¿Qué quieres decir?(20 ~ 30) minutos

Límites de detección:

Tejido, miel 1 ppb

Suero, orina 4 ppb

Leche 20 ppb

Tasa de reacciones cruzadas

Sulfaquinoxalina (SQX) 100%

Tasa de recuperación:

Tejido 90 ± 22%

Leche, miel, suero 83 ± 17%

3. Componentes

1. Las bandas de micro-pozo: 12 bandas con 8 pozos extraíbles cada una
2. 6 veces la solución estándar (1 ml cada una): 0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb y 81 ppb
3. Conjugado de enzimas (7 ml)
4. Solución de trabajo de anticuerpos (10 ml)
5. Substrato Solución A (7 ml) con tapa blanca
6. Solución de sustrato B (7 ml)
7. Solución de parada (7 ml)
8. 20 × tampón de lavado concentrado (40 ml)
9. 2 × solución de redisolución concentrada (50 ml)

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipo:lector de microplacas, impresora, mezclador o estomacador, dispositivo de secado de nitrógeno, oscilador, centrífuga, pipetas de medición, balanza ((con una sensibilidad recíproca de 0,01 g);
2. Los micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de varios canales de 30 a 300 μl;
3. Los reactivos:Acetato de etilo, N-hexano, Na₂HPO₄·12H₂O, NaH₂Oficina de trabajo₄·2H₂O, NaOH, HCl

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben tratarse antes del pretratamiento)

1) Sólo se pueden utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se utilizan para absorber diferentes reactivos;

1. Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse para evitar la contaminación que interfiera con los resultados del experimento.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1) Solución de 0,2 M NaOH: Pesar 0,8 g de NaOH, disolver con 100 ml de agua desionizada;

2) Solución de 0,5 ml de HCl: disolver 4,3 ml de HCL con agua desionizada hasta alcanzar los 100 ml.

3) tampón PB de 0,02 M: peso 5,16 g Na₂HPO₄·12H₂O y 0,87 g de NaH₂Oficina de trabajo₄·2H₂O, se disuelve con 1 litro de agua desionizada.

4) La solución de redisolución concentrada 2× se mezcla con agua desionizada a 1:1 (1 ml de solución de redisolución concentrada + 1 ml de agua desionizada), para la redisolución de la muestra.

5.1 Tejidos animales (carne, hígado), huevos, pescado, camarón, etc.

1. Pesar 2 ± 0,05 g de muestra de tejido en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 6 ml de acetato de etilo, mezclar uniformemente durante 2 minutos, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 10 minutos.
2. Traspasar 3 ml del líquido transparente (capa superior), soplar para secar con nitrógeno o aire a 50-60 °C.
3. Se añade 1 ml de solución redisolvente diluida, luego se añade 1 ml de N-hexano para disolver el residuo seco, se agita vigorosamente durante 30 segundos, se centrifuga a 4000 r/min a temperatura ambiente ((20-25 °C)) durante 5 minutos,quitar la capa superior del líquido.
4. Se tomarán 20 μL de la parte inferior para un análisis adicional.

Plegado de dilución de la muestra: 1

5.2 Suero

1) Colocar el suero a temperatura ambiente ((20-25°C) durante 30 min, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 10 °C durante 10 min, separar o filtrar el suero.

2) Tomar 1 ml de suero, añadir 3 ml de tampón PB de 0,02 M, mezclar adecuadamente durante 30 segundos.

3) Tomar 20 μL para su posterior análisis.

Doble de dilución de la muestra: 4

5.3 Miel

1) Colocar 1,0 ± 0,05 g de miel en un tubo de centrifugadora de 50 ml, añadir 1 ml de 0,5 ml de HCl, poner a 37°C durante 30 minutos.

2) Añadir 2,5 ml de solución de NaOH de 0,2 M (ajustar el valor de pH a 5), luego añadir 8 ml de acetato de etilo, agitar durante 5 min, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 10 min.

3) Tomar 4 ml de líquido de la capa superior, soplar para secar con nitrógeno a 50 °C, añadir 0,5 ml de solución redisolvente diluida para disolver, mezclar durante 30 minutos.

4) Tomar 20 μL para su posterior análisis.

Plegado de dilución de la muestra: 1

5.4 Orina

1) Añadir 3 ml de tampón PB de 0,02 M y 1 ml de la muestra transparente centrifugada, mezclar adecuadamente durante 30 segundos.

2) Tomar 20 μL para su posterior análisis.

Doble de dilución de la muestra: 4

1. Leche

1. Se toma 1 ml de leche, se añade 0,02 M PB tampón, diluido a 1:19 ((V/V) (20 μL de leche + 380 μL de 0,02 M PB tampón ), se mezcla durante 30 s
2. Tomar 20 μL para su posterior análisis.

Doble de dilución de la muestra:20

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1. Todos los reactivos y las tiras de micro-pozo deben ponerse a temperatura ambiente (20-25 °C).
2. Devolver todos los reactivos a 2-8°C inmediatamente después de su uso.
3. La reproductibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.
4. Para la incubación a temperatura constante, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1 Sacar todos los reactivos necesarios del kit y colocarlos a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 min. Tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de su uso.

2 Tomar las tiras de micro-pozo y los marcos de la placa requeridos.

3. Preparación de la solución: diluir el tampón de lavado concentrado de 20 × (40 ml) con agua desionizada hasta un volumen final de 800 ml para su uso.
4. Numeración: se numeran los micro-pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; se registran sus posiciones.
5. Añadir 20 μL de muestra o solución estándar a los pozos separados y añadir 50 μL de enzima conjugada y luego 80 μL de solución de anticuerpos en cada pozo.sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación a los 25 años°Cdurante una hora.
6. Lavar la microplaca con el amortiguador de lavado a 250 μl/pozo durante 4 a 5 veces.seco con papel absorbente (si hay burbujas después de golpear, cortarlos con las puntas limpias).
7. Coloración: añadir 50 μL de solución de sustrato A y luego 50 μL de solución de B en cada pozo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yIncubación a 25 °C durante 20 a 30 minutos en la oscuridad para coloración..
8. Determinación: añadir 50 μL de solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en un plazo de 5 min).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de la DO de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de sulfaquinoxalina.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor medio de la OD de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la OD de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, el valor OD de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 1 ppb, 1,415 para 3 ppb, 0,74 para 9 ppb, 0,313 para 27 ppb, 0,155 para 81 ppb,En consecuencia, el rango de concentración de la muestra I es de 27 a 81 ppb., y la muestra II es de 3 a 9 ppb.

7.2 Cuantitativo determinación

The mean values of the absorbance values obtained for the percentage of the average OD value (B) of the sample and the standard solution divided by the OD value (B0) of the first standard solution (0 standard) and subsequently multiplied by 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de sulfaquinoxalina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Leer la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de sulfaquinoxalina en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o el hecho de que los reactivos y las muestras no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) dará lugar a un valor de OD estándar inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada de situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.
3. Mezclar uniformemente, de lo contrario habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico de 2 M, evite el contacto con la piel.
5. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la dosis.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lote para su uso..
6. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla.
7. Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.5) indica su degeneración.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Observaciones: Si el paquete de vacío de las placas de microtiter tiene fugas, la placa de microtiter es normal y eficaz, no afecta al resultado experimental.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

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Por fax 86-755-28938800

El correo electrónico:Bella.lsybt@gmail.com También puedo ayudar. Información sobre las medidas de seguridad

La Comisión ha adoptado una decisión sobre la aplicación de la presente Decisión.