LSY-10017 Enrofloxacina Kit de ensayo ELISA para peces, camarón kit de seguridad elisa enrofloxacina certificado ISO

Enrofloxacina Enrofloxacina ELISA Kit

No de catálogo LSY-10017

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo indirecto para la detección de enrofloxacina en muestras.La enrofloxacina en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las tiras de micro-pozo compiten por los anticuerpos contra la enrofloxacina.El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la enrofloxacina en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de enrofloxacina..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0, 5 ppb

Temperatura de incubación: 25°C

Tiempo de incubación: 30min 15min

Límites de detección

El contenido de azúcar en el aceite de oliva debe ser igual o superior a 0,5% en peso.

Tasa de reacciones cruzadas:

Enrofloxacina 100%

Tasa de recuperación:

Se trata de una mezcla de aceite de oliva y de aceite de oliva.

3. Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipamiento:Lector de microplacas, impresora, homogeneizador, vórtice, dispositivo de secado de nitrógeno, centrífuga, pipetas de medición, balanza (con sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora.
2. Los micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μL, de 100 a 1000 μL y de varios canales de 250 μL;
3. Los reactivos:Acetato de etilo, N-hexano

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben tratarse antes del pretratamiento)

1. Sólo se podrán utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
2. Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados del experimento.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1. Puffer de extracción: 1 parte de 2X Puffer de extracción + 1 parte de agua desionizada.
2. La solución de redisolución concentrada de 20 × se diluye con agua desionizada a 1:19 (1 parte de solución de redisolución concentrada de 20 × + 19 partes de agua desionizada), utilizada para la redisolución de la muestra.

5.1 Preparación de muestras de tejido (camarones)

1) Se pesan 2,0 ± 0,05 g de la muestra de tejido homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, se añaden 2 ml de tampón de extracción y 8 ml de acetato de etilo, se agita durante 3 min.Centrifugado a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min.,

2) Tomar 1 ml de líquido de capa superior en un nuevo tubo centrífugo de 10 ml, soplar para secar con nitrógeno o aire completamente a 50 °C

3. Disolver los residuos secos en 1 ml de N-hexano, añadir 1 ml de solución redisolvente diluida, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min.Eliminar la fase N-hexano de la capa superior ((Si se produce emulsión, quitar la capa superior de hexano y colocarlo en un baño de agua a 70 °C durante 10 a 20 minutos y repetir la centrifugación).
4. Se tomarán 50 μl de solución de capa inferior para su posterior análisis.

Doble de dilución de la muestra: 4

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1. Antes de su uso, todos los reactivos y las tiras de micro-pozo deben ponerse a temperatura ambiente (20-25 °C);
2. Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.
3. La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos. El correcto funcionamiento del lavado de platos es el punto clave en los procedimientos de ELISA;
4. Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1. Se extraerán todos los reactivos necesarios y se colocarán a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos.
2. Se toman las tiras de micro-pozo y los marcos de las placas requeridos, se vuelve a sellar la microplaca no utilizada y se almacena a 2-8 °C;
3. Preparación de la solución: diluir 15 ml del tampón de lavado concentrado de 20 × con el agua desionizada a 1:19 (1 parte del tampón de lavado concentrado de 20 × + 19 partes de agua desionizada),o prepararse según la cantidad necesaria;
4. Numeración: se numeran los micro-pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; se registran sus posiciones;
5. Añadir 50 μL de la muestra o solución estándar a los pozos duplicados separados, añadir 50 μL de enzima conjugada, y luego añadir 50 μL de la solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos. Mezclar agitando suavemente.sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación a los 25 años°Cdurante 30 minutos;
6. Lavar la microplaca con el amortiguador de lavado a 250 μl/pozo durante cuatro o cinco veces.seco con papel absorbente (si hay burbujas después de golpear, cortarlos con las puntas limpias);
7. Coloración: añadir 50 μL de solución de sustrato A y 50 μL de solución de B en cada pozo. Mezclar agitando suavemente yIncubación a los 25 años°Cdurante 15 minutos en la oscuridad para su coloración;
8. Determinación: añadir 50 μL de solución de parada en cada pozo. Mezclar agitando suavemente. Ajustar la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD.(se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en un plazo de 5 min).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de enrofloxacina en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/ml) obtenido por la comparación del valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestraI sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, el valor OD de las soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0,5ppb, 1,415 para 1,5ppb, 1,8 para 4,5ppb, 0,313 para 13,5ppb,0.155 para 40,5 ppm, por lo que el rango de concentración de la muestra I es de 13,5 a 40,5 ppm, y el de la muestra II es de 1,5 a 4,5 ppm (multipliado por el doble de dilución correspondiente).

7.2 Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia son equivalentes al porcentaje del valor medio de OD (B) de la muestra y de la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de enrofloxacina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de enrofloxacina en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor estándar de DO inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada de situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.
3. Mezclar uniformemente, de lo contrario habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evitar el contacto con la piel.
5. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la DO.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.
6. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla.
7. Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.5) indica su degeneración.

8La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:1 año; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.