LSY-10020 Kit de prueba de seguridad alimentaria de la Tylosina ELISA de ensayo de alimentos

Kit de ensayo de ELISA para la tilosina

No de catálogo: LSY-10020

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo indirecto para la detección de tilosina en la muestra.La tilosina en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por el anticuerpo anti-tilosinaDespués de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de tilosina..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.5 ppm

Temperatura de la incubadora: 25°C

Tiempo en la incubadora: 30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección

El método de ensayo de los tejidos es el siguiente:

Método 2 para el tejido: 7.5 ppb

Tasa de reacciones cruzadas

Tiolosina 100%

Tasa de recuperación

Tejido 70% ~ 120%

3. Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipo:Lector de microplacas (450 nm / 630 nm), homogeneizador, oscilador, votex, pipetas de medición, centrífuga y balance (con una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora, impresora.
2. Los micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μl y de 100 a 1000 μl, y de varios canales de 30 a 300 μl;
3. Los reactivos:NaOH, agua desionizada.

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1. Sólo se podrán utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
2. Antes del experimento, cada utensilio experimental debe comprobarse su limpieza y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1) Extracción de una solución: 1 parte de 20 × extracción concentrada de A + 19 partes de agua desionizada;

2) Solución de extracción B: 1 parte de 2 × extracción concentrada B + 1 parte de agua desionizada;

3. 1 M de solución de NaOH: se disuelven 4 g de NaOH en agua desionizada hasta 100 ml;
4. Dilución de la muestra: 1 parte de 10 veces la dilución de la muestra concentrada + 9 partes de agua desionizada.

5.1 Muestra de tejido ((método 1)

1) Se toman 2 ± 0,05 g de muestra de tejido homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, se añaden 3 ml de extracción de solución A, se agitan con oscilador durante 3 min.

2) Luego añadir 600μl de solución de 1M NaOH y 2,4 ml de solución de extracción B, agitar con oscilador durante 3 min, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20 - 25 °C) durante 5 min;

3) Se toma 100 μl de líquido de capa superior, se añade 200 μl de dilución de la muestra, se mezcla uniformemente;

4) Tomar 50ul de la solución mezclada anterior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 12

5.2 Muestra de tejido ((método 2)

1) Tomar 1 ± 0,05 g de muestra de tejido homogeneizado en un tubo centrífugo de plástico de 10 ml, 15 ml o 50 ml;

2) Añadir 2 ml de agua desionizada, agitar fuertemente durante 2 min (o vórtice durante 1 min);

3) Centrifugar a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos;

4) Tomar 100 μl de líquido de capa superior, añadir 400 μl de dilución de la muestra, mezclar uniformemente;

5) Tomar 50ul de la solución mezclada anterior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 15

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1. Antes de su uso, llevar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C).
2. Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso
3. La reproductibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.
4. Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1. Sacar todos los reactivos necesarios del kit y colocarlos a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos. Tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de su uso.
2. Tomar las tiras de micro-pozo y los marcos de placas requeridos.
3. Preparación de la solución: diluir los 15 ml del tampón de lavado concentrado de 20 × con agua desionizada a 1:19 (1 parte del tampón de lavado concentrado de 20 × + 19 partes de agua desionizada),o prepararse según la cantidad necesaria.
4. Numeración: se numeran los micro-pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; se registran sus posiciones.
5. Se añaden 50 μL de la muestra o solución estándar a los pozos duplicados separados, luego se añaden 50 μL de enzima conjugada y luego 50 μL de la solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos.Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación a los 25 años°Cdurante 30 minutos
6. Se verterá líquido en el microcubo, se añadirá 250 μL/cubo de amortiguador de lavado durante 15-30 segundos, se repetirá 4-5 veces, y luego se secará con las bolas (si quedan burbujas después de las bolas, se cortarán con las puntas limpias).
7. Coloración: añadir 50 μL de sustrato A y luego 50 μL de sustrato B en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente yIncubación a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para coloración.
8. Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Ajuste la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la doble longitud de onda 450/630 nm en un plazo de 5 min).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de tilosina.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/ml) se puede obtener al comparar el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es de 1,0, mientras que los de las soluciones estándar son los siguientes: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0,5ppb, 1,415 para 1,5ppb, 0,74 para 4,5ppb, 0,313 para 13,5ppb y 0.155 por 40.5ppb, por lo que el rango de concentración de la muestra I es de 13,5 a 40,5ppb y el de la muestra II es de 1,5 a 4,5ppb,Multiplicando por el factor de dilución correspondiente se obtiene la concentración real de tylosin en la muestra.

7.2 Determinación cuantitativa

The mean values of the absorbance values is equivalent to the percentage of the average OD value (B) of the sample and the standard solution divided by the OD value (B0) of the first standard solution (0 standard) and subsequently multiplied by 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibujar la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de tilosina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Leer la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de tilosina en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada por situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
3. Mezclar cada reactivo y mezcla de reacción de manera uniforme y lavar la microplaca a fondo, de lo contrario habrá la reproducibilidad indeseable
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico de 2 M, evitar el contacto con la piel.
5. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa que se sella automáticamente para volver a sellarla.
6. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la dosis.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lote para su uso.
7. Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Observaciones: Si el paquete de vacío de las placas de microtiter tiene fugas, la placa de microtiter es normal y eficaz, no afecta al resultado experimental.