Análisis de EIA de residuos de antibióticos Elloramfenicol (CAP) detección ELISA Kit de seguridad de los huevos

El kit de pruebas ELISA de cloranfenicol

No de catálogo LSY-10007

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo indirecto para la detección del cloranfenicol en la muestra.El cloranfenicol en la muestra y el antígeno de acoplamiento pre-revestido en las franjas del micro-pozo compiten por el anticuerpo anti-cloranfenicol.Después de la adición del conjugado enzimático, se añade el sustrato TMB para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el cloranfenicol que contiene.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de cloranfenicol..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 15 ppt

Temperatura de incubación: 25°C

Tiempo de incubación: 30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección:

Método 1 para los tejidos y el agua 7.5ppt

Tejido/agua (método 2), huevo, miel...

Leche, leche en polvo... 50pp

El valor de las emisiones de gases de efecto invernadero es el valor de las emisiones de gases de efecto invernadero.

Tasa de recuperación

Tejidos, acuáticos, óvulos 95±25%

El valor de las emisiones de gases de efecto invernadero es el valor de las emisiones de gases de efecto invernadero.

Leche, leche en polvo, miel 100±30%

Tasa de reacciones cruzadas:

El cloranfenicol es un 100%

Tiamfenicol < 0,1%

Florfenol < 0,1%

3.Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipamiento:Lector de microplacas, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, centrífuga, pipetas de medición y balanza (con una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora.
2. Los micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μL, de 100 a 1000 μL y de varios canales de 30 a 300 μl.
3. Los reactivos:Acetato de etilo, N-hexano, NaCl, H₂- ¿ Qué?

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1) Solo se pueden utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se utilizan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe comprobarse su limpieza y, en caso necesario, debe volver a limpiarse.para evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra

1. Solución de redisolución de la muestra: se diluye la solución de redisolución 2 × concentrada con agua desionizada a 1:1.

5.1 Tejidos (pollo, pato, cerdo, pescado, camarón, carne de vacuno, cordero) Método 1

1. Tomar 3 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml. Primero añadir 3 ml de agua desionizada, luego añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar bien durante 1 min.Centrifugado a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.
2. Tomar 4 ml del supernatante, soplar para secar con nitrógeno en 50-60°C.
3. Disolver los residuos secos en 1 mlN-hexano, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 10 minutos, retirarla fase orgánica de la capa superior.
4. Se tomarán 50 μL de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 0.5

(Si durante la preparación de la muestra no se puede tomar 4 ml de supernatante, se repite la centrífuga para tomar la solución o se añade 9 ml de acetato de etilo y luego se sopla 6 ml de supernatante para secarlo, el factor de dilución es el mismo)

5.2 Tejidos (pollo, pato, cerdo, pescado, camarón, carne de vacuno, cordero) Método 2

1. Tomar 2 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml. Primero añadir 3 ml de agua desionizada, luego añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar bien durante 1 min.centrifugar a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.
2. Se toman 3 ml del supernatante, se soplan para secar con nitrógeno a 50-60 °C.
3. Disolver los residuos secos en 1 ml de N-hexano, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.eliminar la fase orgánica de la capa superior.
4. Se tomarán 50 μL de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 1

(Si durante la preparación de la muestra no se puede tomar 3 ml de supernatante, se repite la centrífuga para tomar la solución o se añade 10 ml de acetato de etilo y luego se sopla 5 ml de supernatante para secarlo, el factor de dilución es el mismo)

5.3 Otras muestras de tejido con alto contenido de grasa (riñón, hígado, intestino, piel, corazón, vientre de cerdo, etc.)

1. Se toman 2 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml. Se añaden 10 ml de N-hexano, se agitan durante 3 minutos, se centrifugan a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos, se desecha el N-hexano.
2. Añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar durante 1 minuto, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.
3. Se toman 3 ml del supernatante, se soplan para secar con nitrógeno a 50-60 °C.
4. Disolver los residuos secos en 1 ml de N-hexano, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.eliminar la fase orgánica de la capa superior.
5. Se tomarán 50 μL de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 1

5.4 Huevo

1. Se toman 2 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada fresca en un tubo centrífugo de 50 ml. Se añade 6 ml de acetato de etilo, se agita correctamente durante 1 minuto, se centrifuga a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.
2. Se toman 3 ml del supernatante, se soplan para secar con nitrógeno a 50-60 °C.
3. Disolver los residuos secos en 1 ml de N-hexano, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.eliminar la fase orgánica de la capa superior.
4. Se tomarán 50 μL de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 1

(Si durante la preparación de la muestra no se puede tomar 3 ml de supernatante, se repite la centrífuga para tomar la solución o se añade 10 ml de acetato de etilo y luego se sopla 5 ml de supernatante para secarlo, el factor de dilución es el mismo)

5.5 Alimentación

1. Tomar 1 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir primero 9 ml de agua desionizada, luego añadir 5 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 3 min.

2. Centrifugar a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.

3Tomar 5 ml de la fase de agua de la capa media, transferirlos a otro tubo de centrifugadora limpio de 50 ml, añadir 10 ml de acetato de etilo, agitar bien durante 10 s.

4. Centrifugar a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.

5Se toman 5 ml del líquido de la capa superior en otro tubo de centrifugadora limpio, se sopla para secar con nitrógeno o aire a 50 °C.

6. Disolver los residuos secos en 2 ml de N-hexano, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 10 min.eliminar la fase orgánica de la capa superior.

4Se tomarán 50 μl de líquido de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 4

5.6 Miel

1. Tomar 2 ± 0,05 g de muestra de miel homogeneizada fresca en un tubo de centrifugadora de 50 ml, añadir 2 ml de agua desionizada para disolver, luego añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 1 min.centrifugar a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.
2. Se introducen 3 ml de supernatante en un nuevo tubo de centrifugadora, se sopla para secar con nitrógeno a 50-60 °C.
3. Añadir 0,5 ml de la solución de redisolución de la muestra para disolver los residuos secos, mezclar durante 30 segundos;
4. Tomar 50 μL para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 0.5

5.7 Leche cruda, leche pasteurizada, leche esterilizada, leche modificada, leche reconstituida, leche fermentada, bebidas lácteas

1Tomar 2 ± 0,05 ml de muestra fresca en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 0,1 ml de tampón de extracción de la muestra, luego añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 1 min.centrifugar a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos.

2Se toman 3 ml del líquido de la capa superior en un nuevo tubo de centrifugadora, se sopla para secar con nitrógeno a 50-60 °C.

3. Disolver los residuos secos en 1 ml de N-hexano, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 10 minutos,eliminación de la fase orgánica de la capa superior;

4Se tomarán 50 μl de líquido de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 1

5.8 Leche en polvo

1. tomar 2 ± 0,05 g de muestra de leche en polvo fresca en un tubo de centrifugadora de 50 ml, añadir 5 ml de agua desionizada, luego añadir 0,5 ml de tampón de extracción de la muestra, agitar adecuadamente durante 1 min;

2. añadir 3 g de NaCl sólido, luego añadir 10 ml de acetato de etilo, agitar adecuadamente durante 1 min, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 min;

3Se toman 5 ml del líquido de la capa superior en un nuevo tubo de centrifugadora, se sopla para secar con nitrógeno a 50-60 °C.

4. Disolver los residuos secos en 1 ml de N-hexano, añadir 1 ml de la solución de redisolución de la muestra, mezclar durante 30 segundos, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos,eliminación de la fase orgánica de la capa superior;

5. Se tomarán 50 μl de líquido de la capa inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 1

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1. Antes de su uso, todos los reactivos y las tiras de micro-pozo deben ponerse a temperatura ambiente (20-25 °C);
2. Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.
3. La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos. El correcto funcionamiento del lavado de platos es el punto clave en los procedimientos ELISA;
4. Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1. Sacar todos los reactivos necesarios del kit y colocarlos a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos. Tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de su uso.
2. Tomar las tiras de micro-pozo y los marcos de placa requeridos, sellar de nuevo la microplaca no utilizada, conservar a 2-8°C, no congelada.
3. Preparación de la solución: diluir 15 ml del tampón de lavado concentrado (20 × concentrado) con el agua desionizada a 1:19 (1 parte del tampón de lavado concentrado 20 × + 19 partes de agua desionizada),o prepararse según la cantidad necesaria.
4. Numeración: numerar los micropozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado, registrándose sus posiciones.
5. Añadir 50 μL de la muestra o solución estándar a los pozos separados; luego añadir 50 μL de enzima conjugada en cada pozos, y por último añadir 50 μL de solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos.Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación a los 25 años°Cdurante 30 minutos.
6. Verter el líquido, lavar la microplaca con el amortiguador de lavado diluido a 250 μL/pozo durante 4 a 5 veces.seco con papel absorbente (si hay burbujas después de golpear, cortarlos con las puntas limpias).
7. Coloración: añadir 50 μL de solución de sustrato A y luego 50 μL de solución B en cada pozo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yIncubación a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para coloración.
8. Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente. Ajustar la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD.(se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en un plazo de 5 min).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de cloranfenicol..

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/ml) se puede obtener comparando el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, mientras que las de las soluciones estándar son las siguientes: 2,243 para 0ppt, 1,816 para 15ppt, 1,415 para 45ppt, 0,74 para 135ppt, 0,313 para 405ppt y 0,155 para 1215ppt,En consecuencia, el rango de concentración de la muestra es de 405 a 1215 ppt., y el de la muestra II es de 45 a 135 pp.

7.2 Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor medio de OD (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de la solución estándar y los valores del semilogaritmo de la solución estándar de cloranfenicol (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor obtenido se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de cloranfenicol en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras. (Por favor póngase en contacto con nosotros para este software).

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor estándar de DO inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada por situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
3. Mezclar todos los reactivos y mezclas de reacción de manera uniforme y lavar bien la microplaca, de lo contrario se producirá la reproducibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evitar el contacto con la piel.
5. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla.
6. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la DO.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.
7. Se desechará la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

D Edificio, Parque industrial biológico nacional de la vida marina, calle Binhai No. 2, Dapeng, Shenzhen, China, 518120

Tel. 86-755-28438788 El teléfono está en el teléfono.

Por fax 86-755-28938800

El correo electrónico:Información sobre las medidas de seguridad

La Comisión ha adoptado una decisión sobre la aplicación de la presente Decisión.