Kit ELISA de diagnóstico de la inocuidad de los alimentos con sulfametoxidiazina (SMD) para la inspección de la inocuidad de la carne

El kit de ensayo ELISA para la sulfametoxidiazina (SMD)

No de catálogo LSY-10011

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de residuos de sulfametoxidiazina.La sulfametoxidiazina en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por los anticuerpos anti-sulfametoxidiazinaDespués de añadir el conjugado enzimático, se añade el sustrato TMB para la coloración.El valor de la densidad óptica (DO) de la muestra tiene una correlación negativa con la sulfametoxidiazina de la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de sulfametoxidiazina.

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 1 ppb

Temperatura de la incubadora: 25°C

Tiempo en la incubadora: 30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección

Tejido (método de alto límite de detección)

Tejido (método de límite de detección inferior)

Miel, huevo 1 ppb

Suero, orina 4 ppb

Leche 20 ppb

Tasa de reacciones cruzadas

Sulfametoxidiazina (SMD) 100%

Tasa de recuperación

Tejido, orina, leche 85±25%

Miel, suero, huevo 80±23%

3.Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipo:Lector de microplacas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, votex, centrífuga, pipetas de medición, balanza (con una sensibilidad recíproca de 0,01 g), Incubadora
2. Los micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μL, de 100 a 1000 μL y de varios canales de 30 a 300 μL;
3. Los reactivos:Acetonitril (CH)₃No incluido el aceto de etilo, N-hexano, K₂HPO₄·12H₂O, monohidrato de ácido cítrico (C₆H.₈¿ Qué?₇·H₂O), HCl, NaOH, CH₂C.L._2,

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben tratarse antes del pretratamiento)

1. Sólo se podrán utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
2. Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse para evitar la contaminación que interfiera con los resultados del experimento.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1. 0.2M solución de NaOH: se pesan 0,8 g de NaOH, se disuelven con 100 ml de agua desionizada;
2. 0.5M HCl: Se toman 4,3 ml de HCl, se disuelven con agua desionizada hasta 100 ml, se mezclan uniformemente;
3. No.₂HPO₄- ¿ Qué?₆H.₈¿ Qué?₇·H₂O amortiguador: peso 19,85 gNa₂HPO₄·12H₂O y 9,3 g C₆H.₈¿ Qué?₇·H₂O, se disuelven con agua desionizada hasta 1L, se mezclan uniformemente;
4. El CH₃No incluidos en la lista₂C.L.₂Solución: V_{El CH3CN}: V_{El CH2Cl2}= 1: 4 ;
5. La solución de redisolución concentrada de 20 × se diluye con agua desionizada a 1:19 ((1 parte de solución de redisolución concentrada + 19 partes de agua desionizada).

5.1 tejido

A. Método de alto límite de detección

Método uno

1) Se pesan 2,0 ± 0,05 g de la muestra de tejido homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, se añade 6 ml de acetato de etilo, se agita durante 2 minutos y se centrifuga a una velocidad superior a 4000 r/min a 15 °C durante 10 minutos;

2) Tomar 3 ml de la fase orgánica clara en un recipiente seco, soplar para secar con nitrógeno o aire completamente por evaporación rotativa a 50-60 °C

6. Disolver los residuos secos en 1 ml de la solución de redisolución diluida, añadir 1 ml de N-hexano, mezclar durante 30 segundos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 5 minutos.
7. Se extrae una solución de 50 μl en la capa inferior para su posterior análisis.

Plegado de dilución de la muestra: 1

Método dos (Huevo, tejido)

1. Se pesan 2 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada, colocadas en un tubo centrífugo de 50 ml.
2. Añadir 8 ml de CH₃No incluidos en la lista₂C.L.₂solución, agitar durante 5 minutos, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 10 minutos;
3. Transferir 4 ml de fase orgánica a un recipiente seco, soplar para secar con nitrógeno o aire completamente por evaporación rotativa a 56 °C
4. Se añade 1 ml de la solución redisolvente diluida para volver a disolver el residuo seco, se añade 1 ml de N-hexano, se agita durante 30 s. Se centrifugue a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 5 min.
5. Se extrae la fase N-hexano de la capa superior y se toma 50 μL de solución de la capa inferior para su posterior análisis.

Plegado de dilución de la muestra: 1

B. Método de límite inferior de detección de tejidos

1) Se pesan 2,0 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, se añaden 8 ml de solución redissolvente diluida, se agitan durante 2 minutos y se centrifugan a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 10 minutos;

2) Se toma una solución de 50 μL para su posterior análisis.

Doble de dilución de la muestra: 5

5.2 Suero

1) Colocar la muestra de suero a temperatura ambiente durante 30 min, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 10 °C durante 10 min, separar el suero o filtrar el suero

2) Tomar 1 ml de suero y añadir 3 ml de la solución redisolvente diluida, mezclar durante 30 minutos.

3) Se toma una solución de 50 μL para su posterior análisis.

Doble de dilución de la muestra: 4

5.3 Miel

1. Pesar 1 ± 0,05 g de muestra de miel en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 1 ml de solución de 0,5 M HCl, ponerla en un ambiente a 37 °C durante 30 minutos;
2. Añadir 2,5 ml de solución de NaOH de 0,2 M y 3 ml de Na₂HPO₄- ¿ Qué?₆H.₈¿ Qué?₇·H₂O tampón por separado, luego añadir 4 ml de acetato etílico, agitar durante 2 minutos, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a 15 °C durante 10 minutos;
3. Se toman 2 ml de fase orgánica de la capa superior, se soplan para secar con nitrógeno a 50-60 °C, se añaden 0,5 ml de la solución redisolvente diluida para disolver, se mezcla durante 30 minutos.
4. Tomar 50 μL para su posterior análisis

Plegado de dilución de la muestra: 1

5.4 Orina

1. Se añaden 3 ml de la solución redisolvente diluida y 1 ml de la muestra de orina transparente centrifugada, se mezcla adecuadamente durante 30 segundos.
2. Tomar 50 μL para su posterior análisis

Doble de dilución de la muestra: 4

5.5 Leche

1. Se toma 1 ml de leche, se añade la solución redisolvente diluida, se diluye a 1:19 ((V/V) (20 μL de leche + 380 μL de la solución redisolvente diluida), se mezcla durante 30 minutos.
2. Tomar 50 μL para su posterior análisis

Doble de dilución de la muestra: 20

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1. Antes de su uso, todos los reactivos y las tiras de micro-pozo deben ponerse a temperatura ambiente (20-25 °C);
2. Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.
3. La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos, siendo el correcto funcionamiento del lavado de platos el punto clave de los procedimientos de ELISA.
4. Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1. Retirar todos los reactivos necesarios y colocarlos a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos.
2. Se toman las tiras de micro-pozo y los marcos de las placas requeridos, se vuelve a sellar la microplaca no utilizada y se almacena a 2-8 °C;
3. Preparación del amortiguador de lavado: diluir 40 ml del amortiguador de lavado concentrado de 20 × con el agua desionizada a 1:19 (1 parte de amortiguador de lavado concentrado de 20 × + 19 partes de agua desionizada).O preparar tampón de lavado en la cantidad necesaria.
4. Numeración: se numeran los micro-pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; se registran sus posiciones;
5. Añadir 50 μL de la muestra o solución estándar a los pozos duplicados separados, añadir 50 μL de enzima conjugada, y luego añadir 50 μL de la solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos. Mezclar agitando suavemente,sellar la microplaca con la membrana de cubierta,y incubar a los 25 años°Cdurante 30 minutos;
6. Lavar la microplaca con el amortiguador de lavado a 250 μL/pozo durante cuatro o cinco veces.seco con papel absorbente (si hay burbujas después de golpear, cortarlos con las puntas limpias);
7. Coloración: añadir 50 μL de la solución de sustrato A y 50 μL de la solución B en cada pozo. Mezclar agitando suavemente.y incubar a los 25 años°Cdurante 15 minutos en la oscuridad para colorear;
8. Determinación: añadir 50 μL de solución de parada en cada pozo. Mezclar agitando suavemente. Ajustar la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD.(se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en un plazo de 5 min).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de sulfametoxidiazina en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) obtenido por la comparación del valor medio de la OD de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la OD de la muestraI sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, el valor OD de las soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 1ppb, 1,415 para 3ppb, 0,74 para 9ppb, 0,313 para 27ppb, 0,155 para 81ppb,En consecuencia, el rango de concentración de la muestraI es de 27 a 81 pppb., y el de la muestra II es de 3 pppb a 9 pppb (multiplicado por el doble de dilución correspondiente).

7.2 Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia son equivalentes al porcentaje del valor medio de OD (B) de la muestra y de la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀∆el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de sulfametoxidiazina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Leer la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor obtenido se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de sulfametoxidiazina en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada de situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.
3. Mezclar uniformemente, de lo contrario habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico de 2 M, evite el contacto con la piel.
5. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la dosis.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lote para su uso..
6. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla.
7. Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.5) indica su degeneración.

8La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:1 año; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

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Tel. 86-755-28438788 El teléfono está en el teléfono.

Por fax 86-755-28938800

El correo electrónico:Información sobre las medidas de seguridad

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