LSY-10025 Kit de detección ELISA Olaquindox 96 pozos/kit pruebas de seguridad alimentaria

El verde de la primavera OLaquindoxKit de ensayo ELISA

No de catálogo LSY-10025

1Principio.

Este kit de prueba se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de Olaquindox en la muestra.El Olaquindox en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las tiras de micro-pozo compiten por el anticuerpo anti-OlaquindoxDespués de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Olaquindox en ella.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de Olaquindox..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad:0.2Pb y p

Temperatura de la incubadora: 37°C

Tiempo de la incubadora: 30 minutos ~ 30 minutos 15 minutos

Límites de detección:

Tejido 0.2 ppb

Alimentación para animales 20 ppb

Tasa de reacciones cruzadas:

Olaquindox 100%

Carbadox < 7%

Tasa de recuperación:

Tejido 75%±19%

Alimentación para animales 70%±17%

3. Componentes

1) Cintas de micro-pozo: 12 cintas con 8 pozos extraíbles cada una

2) 6 veces la solución estándar (1 ml cada una): 0 ppb, 0,2 ppb, 0,6 ppb, 1,8 ppb, 5,4 ppb,16.2 ppb

3) Conjugado de enzimas (12 ml) con tapa roja

4) Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml) tapa azul

5) Substrato solución A (7 ml) con tapa blanca

6) Solución de sustrato B (7 ml) con tapa negra

7) Detener la solución (7 ml) con tapa amarilla

8) 20 × tampón de lavado concentrado (40 ml) con tapa blanca

9) 2× solución de redisolución concentrada (50 ml) con tapa transparente

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1) elEquipo:Lector de microplacas (450 nm / 630 nm), homogeneizador, oscilador, centrífuga, pipetas de medición, dispositivo de secado de nitrógeno y balanza (con una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora.

2) elLos micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μl y de 100 a 1000 μl y de varios canales de 30 ∼ 300 μl;

3) elLos reactivos:El CH₃No incluido en la NC₂¿ Qué?₃

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1) Solo se pueden utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se utilizan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada utensilio experimental debe comprobarse su limpieza y, si es necesario, debe volver a limpiarse.para evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de las muestras

1) Solución de redisolución de la muestra: diluir 2 × solución de redisolución concentrada con agua desionizada a 1:1

5.1Tejidos (pollo, pato, cerdo/hígado,el pescado, el camarón, etc.)

1. Se toman 2 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, se añaden 10 ml CH₃CN (sin agua), agitar adecuadamente durante 2 minutos. Centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 10 minutos.

2Se toman 5 ml de supernatante, se soplan para secar con nitrógeno o aire a 56°C.

3Se disuelven los residuos secos en 2 ml de N-hexano, se añade 1 ml de la solución de redisolución diluida, se mezcla bien durante 30 minutos, se centrifugan a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos.Eliminar la fase N-hexano de la capa superior.

4Tomar 50 μL para análisis.

Doble de dilución de la muestra:1        

5.2Alimentos para animales

1Pesar 1 ± 0,05 g de muestra homogeneizada en el tubo de centrifugadora, añadir 2 g de Al₂¿ Qué?₃, luego 5 ml CH₃CN, agitar violentamente durante 2 minutos, permanecer estático a temperatura ambiente en la oscuridad durante 8 minutos;

2Se toma un supernatante de 50 ul, se mezcla con una solución de redisolución diluida de 950 ul de manera uniforme, se centrifuga a 4000 r/min a 25°C durante 5 min.

3Tomar 50 μL para análisis.

Plegado de dilución de la muestra: 100   

6.Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1) Antes de su uso, llevar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C);

2) Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3) La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

4) Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1) Retirar todos los reactivos necesarios y colocarlos a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos.

2) Tomar las tiras de micro-pozo y los marcos de las placas requeridos.

3) Preparación de la solución: diluir 40 ml del tampón de lavado concentrado de 20 × con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado de 20 × + 19 partes de agua desionizada),o prepararse según la cantidad necesaria;

4) Numeración: numeración de los micro pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; registrar sus posiciones;

5) Añadir 50 μL de la muestra o de la solución estándar a los pozos duplicados separados, y luego añadir 50 μL de la solución de trabajo de anticuerpos a cada pozos.sellar la microplaca con la membrana de cubierta,y incubar en37°Cpara30 minutos;

6) Lavar la microplaca con el amortiguador de lavado a 250 μL/pozo durante cuatro o cinco veces; remojar el pozo con el amortiguador de lavado durante 15-30 segundos,seco con papel absorbente (si hay burbujas después de golpear, cortarlos con las puntas limpias);

7) Añadir 100 μL de enzima conjugada a cada pozo, mezclar agitando suavemente, sellar la microplaca con la membrana de cubierta,y incubar en37°Cpara30 minutos; verter líquido de los pozos, lavar la microplaca con el tampón de lavado, continuar como en el paso 6).

8) Coloración: añadir 50 μL de la solución de sustrato A y 50 μL de la solución B en cada pozo. Mezclar agitando suavemente.y incubar en37 °Cpara15Min en la oscuridad para colorear;

9) Determinación: añadir 50 μL de solución de parada en cada pozo. Mezclar agitando suavemente. Ajustar la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD.(se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en un plazo de 5 min).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de Olaquindox..

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/ml) se puede obtener al comparar el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, mientras que las de las soluciones estándar son las siguientes: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,2 ppb, 1,415 para 0,6 ppb, 0,74 para 1,8 ppb, 0,313 para 5,4 ppb y 0,155 para 16,2 ppb,En consecuencia, el rango de concentración de la muestra es 5.4 a 16.2 ppb, y la muestra II es de 0.6 a 1.8 ppb.

7.2 Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia son equivalentes al porcentaje del valor medio de OD (B) de la muestra y de la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de Olaquindox (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Leer la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de Olaquindox en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelven a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.

2La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada por situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.

3. mezclar todos los reactivos y mezclas de reacción de manera uniforme y lavar la microplaca a fondo, de lo contrario habrá la reproducibilidad indeseable

4La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evitar el contacto con la piel.

5. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla. La sustancia estándar y la primera de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.

6No utilice el kit después de su fecha de caducidad. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y los valores de detección de la dosis.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lote para su uso.

7Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de la solución estándar 0 inferior a 0,5 indica su degeneración.

8La temperatura de reacción óptima es de 37 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.

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Por fax 86-755-28938800

El correo electrónico:Información sobre las medidas de seguridad

La Comisión ha adoptado una decisión sobre la aplicación de la presente Decisión.