LSY-10018 Análisis de ELISA de ampicilina Kit de diagnóstico de seguridad alimentaria antibiótico

Kit de pruebas de ELISA de ampicilina

No de catálogo LSY-10018

1Principio.

Este kit de prueba se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de Ampicilina en la muestra.La ampicilina de la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por el anticuerpo anti-ampicilina.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración. El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la ampicilina en ella.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de ampicilina..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.5 ppb

El rango de curvas estándar es de 0,05 pppb a 4,05 pppb.

Coeficiente de variación intraplaca: < 5%

Coeficiente de variación entre placas:<15%

Valor óptimo de la absorbancia B0: > 0.8;

Temperatura de incubación: 25°C

Tiempo de incubación: 30 minutos 10 ~ 15 minutos

Límites de detección:

Tejido, huevo, leche pura aproximadamente 1 ppm

Nota: ppb=ng/mL o ng/g

Tasa de reacciones cruzadas

Ampicilina 100% de las cuales:

Tasa de recuperación:

90% ± 30%

3. Componentes

1. Las bandas de micro-pozo: 12 bandas con 8 pozos extraíbles cada una
2. Solución estándar (1 ml/ botella): 0ppb, 0,05ppb, 0,15ppb, 0,45ppb, 1,35ppb, 4,05ppb.
3. 11X Conjugado concentrado de enzimas (0,7 ml)
4. Dilución conjugada de enzimas (7 ml)
5. 20 × tampón de lavado concentrado (30 ml)
6. Solución de diluyente de muestra (20 ml)
7. Substrato A (7 ml)
8. Substrato B (7 ml)
9. Solución de parada (7 ml)

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipamiento: lector de microplacas (450 nm, 630 nm), evaporador rotativo/dispositivo de secado de nitrógeno, homogeneizador, oscilador, centrífuga (4000 g y más), balanza (con sensibilidad recíproca de 0,01 g), pipetas de medición,incubadora (ajustable a 25°C)El tiempo.
2. Las demás máquinas: de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de ocho canales de 30 a 300 μL;
3. Reactivos: Agua deionizada, ácido clorhídrico concentrado (reactivo analítico).

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1) Solo se pueden utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se utilizan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1. Lavadora tampón: 1 parte 20 × tampón de lavado concentrado + 19 partes de agua desionizada;
2. 1M HCl: tomar 8,6 ml de ácido clorhídrico concentrado, añadir agua desionizada a 100 ml;

5.1 tejido

1) Tomar una muestra de tejido de 1,0 ± 0,05 g en un tubo centrífugo de 10 ml de poliestireno, añadir 4 ml de agua desionizada, girar durante 1 minuto, centrifugar a 3000 g a temperatura ambiente (20 - 25 °C) durante 5 minutos;

2) Se toma un líquido transparente de capa superior de 200 ml en un tubo de centrifugadora de poliestireno de 2 ml.añadir 200ul de laSolución de diluyente de muestra, vórtice durante 10 s.

3) Tomar 50 μl de líquido para análisis.

Doble de dilución de la muestra: 10

5.2 Huevo

1) Tomar una muestra de huevo homogeneizada de 1,0 ± 0,05 g en un tubo centrífugo de 10 ml de poliestireno, añadir 4 ml de agua desionizada y luego añadir 150 uL1M HCl, vórtice durante 1 minuto, centrifugado a 3000 g a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos;

2) Tomar 200ul de líquido transparente de capa superior en un tubo de centrifugadora de poliestireno de 2 ml, añadir 200ul de la solución del diluyente de la muestra, vórtice durante 10 s;

3) Tome 50ul para el análisis.

Doble de dilución de la muestra: 10

5.3 Leche pura

1) Tomar 1.0 ml de muestra de leche pura en un tubo centrífugo de 10 ml de poliestireno, añadir 4 ml de agua desionizada, luego añadir 40 uL1M HCl, vórtice durante 1 minuto, centrifugado a 3000 g a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos;

2) Tomar 200ul de líquido transparente de capa superior en un tubo de centrifugadora de poliestireno de 2 ml, añadir 200ul de la solución del diluyente de la muestra, vórtice durante 10 s;

3) Tome 50ul para el análisis.

Doble de dilución de la muestra: 10

6Procedimientos de ELISA

Instrucciones

1. Colocar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C).

2. Todos los reactivos se devuelven a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3.La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

4Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

Procedimientos de funcionamiento

1. Sacar todos los reactivos necesarios del kit y colocarlos a temperatura ambiente (20 a 25 °C) durante al menos 30 minutos.
2. Tomar las tiras de micro-pozo y los marcos de placas requeridos.
3. Numeración: se numeran los micro-pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; se registran sus posiciones.
4. Se añaden 50 μl de la muestra o de la solución estándar a pozos duplicados separados;
5. Preparación de conjugado enzimático: tomar 1 parte de conjugado enzimático concentrado 11X, añadir 10 partes de dilución de conjugado enzimático, diluir a 1:10(Nota: Por favor, asegúrese de mezclar y utilizar según sea necesario inmediatamente).
6. Añadir conjugado de enzimas, 50 μL por pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de la cubierta yIncubación a los 25 años°Cen la oscuridad durante 30 minutos.
7. Verter líquido fuera del microcubo, añadir 250 μL/cubo de amortiguador de lavado durante 15-30 segundos, repetir de tres a cuatro veces, y luego abrir para secar (si hay burbujas después de abrir, cortar con las puntas limpias).
8. Coloración: añadir 100 μl de mezcla de sustrato A y sustrato B en cada pozo (Nota: mezclar sustrato A y sustrato B a 1:1, la mezcla debe utilizarse en 10 minutos, nunca utilizar recipiente de metal o metal para agitar la solución, de lo contrario el sustrato puede ser inválido.). Mezcle suavemente sacudiendo la placa manualmente yIncubación a 25 °C durante 10 a 15 minutos en la oscuridad para coloración.
9. Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo (el color del sustrato de azul a amarillo significa que la parada ha tenido éxito). Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Establecer la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la doble longitud de onda 450/630 nm en un plazo de 5 minutos).

7.Enjuiciamiento del resultado

Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia son equivalentes al porcentaje del valor medio de OD (B) de la muestra y de la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de ampicilina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Leer la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de ampicilina en la muestra.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada por situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
3. Mezclar todos los reactivos y mezclas de reacción de manera uniforme y lavar bien la microplaca, de lo contrario se producirá una reproducibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico de 2 M, evite el contacto con la piel.
5. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla.
6. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la dosis.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lote para su uso..
7. Se desechará la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

D Edificio, Parque industrial biológico nacional de la vida marina, No.2 Binhai Road, Dapeng, Shenzhen, China, 518120

Tel. 86-755-28438788 El teléfono está en el teléfono.

Por fax 86-755-28938800

El correo electrónico:Información sobre las medidas de seguridad

La Comisión ha adoptado una decisión sobre la aplicación de la presente Decisión.