Kit ELISA de nitrofurano (SEM) de diagnóstico de seguridad alimentaria para detección en acuicultura

Kit de ensayo ELISA para el nitrofurán (SEM)

No de catálogo: LSY-10004

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de nitrofurano (SEM) en la muestra.El nitrofurán (SEM) en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las tiras de micro-pozo compiten por los anticuerpos anti-SEMEl valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el SEM en ella.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración SEM..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,02 ppm

Temperatura de incubación: 25°C

Tiempo de incubación:30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección Tejido, huevo: 0,1 ppm

Tasa de reacciones cruzadas

SEM·······················································································

Se trata de un producto que se utiliza para la fabricación de productos químicos.

AOZ················································································

AHD·················································································································

Tasa de recuperación

El contenido de la sustancia de origen animal debe ser igual o superior a:

3.Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipo:Lector de microplacas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, centrífuga, pipetas de medición, balanza (con sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora, baño de agua;
2. Los micropipetadores:de un solo canal de 20-200μL, de 100-1000μL y de varios canales de 30-300μl;
3. Los reactivos:NaOH, acetato etílico, n-hexano, HCI (aproximadamente 36,5%), K₂HPO₄·3H₂¿ Qué?

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1. Sólo se podrán utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
2. Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1. 0.1 M K₂HPO₄: disuelven 11,4 g de K₂HPO₄·3H₂O en agua desionizada a 500 ml.
2. 1 M HCl: disolver 8,6 mL de HCI (aproximadamente 36,5%) en agua desionizada hasta 100 mL.
3. 1 M NaOH: se disuelven 4 g de NaOH en agua desionizada hasta 100 ml.
4. la solución de redisolución concentrada 2× se diluye con agua desionizada a 1:1 ((1 ml de solución de redisolución concentrada + 1 ml de agua desionizada), utilizada para la redisolución de la muestra.

5.1 Preparación de las muestras

Tejido, huevo

1) Se pesa 1 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada, se añaden 4 ml de agua destilada, 0,5 ml de 1 M HCI y 100 μl de 2-nitrobenzaldehído (C₇H.₅No₃) a cada tubo, agitar adecuadamente durante 2 min.;

2) Incubación en70°Cpor baño de agua para20 minutos.(O incubar en una incubadora a 75°C durante 25 minutos).

3. Añadir 5 ml 0.1 M K₂HPO₄, 0,4 ml de 1 ml de NaOH y 6 ml de acetato de etilo en cada tubo, agitar durante 30 minutos.
4. Centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 5 minutos (si la emulsión o la capa de acetato de etilo no es suficiente para 3 ml,incubar la muestra en un baño de agua a 80 °C durante 10 minutos y centrifugarla repetidamente; o aumentar la velocidad y prolongar el tiempo de centrifugado).
5. Transfiere 3 ml de la capa de acetato de etilo (líquido de la capa superior) a un nuevo tubo centrífugo y evapora hasta secarse con nitrógeno o aire a 50 °C.
6. Se disuelven los residuos secos en 2 ml de N-hexano, se añade 1 ml de la solución redisolvente diluida, se mezcla adecuadamente durante 30 segundos y se centrifugan a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos.Eliminar la fase N-hexano de la capa superior (si hay emulsión), después de retirar la fase N-hexano de la capa superior, incubar la muestra en un baño de agua a 70 °C durante 10-20 minutos, centrifugando repetidamente).
7. Se tomarán 50 μL de la parte inferior para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 2

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1) Antes de su uso, llevar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C);

2) Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3) La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

4) Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1. Lleve el kit de ensayo a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos, tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de su uso, coloque las tiras de micro-pozo requeridas en los marcos de las placas.Se vuelve a sellar la microplaca no utilizada, almacenar a 2-8 °C, no congelado.
2. Preparación de la solución: diluir 40 ml del tampón de lavado concentrado de 20 × con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado de 20 × + 19 partes de agua desionizada) o preparar según sea necesario.
3. Numeración: se numeran los micro pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado, registrándose sus posiciones.
4. Añadir 50 μl de la muestra o de la solución estándar en pozos duplicados separados; añadir 50 ul de conjugado enzimático y luego 50 μl de la solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos,Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente. Sella la microplaca con la membrana de cubierta yIncubación a 25 °C durante 30 minutos.
5. Derramar líquido del microcubo, secar con una tapa en papel absorbente, añadir 250μL/pozo de amortiguador de lavado para lavar la microplata durante 15-30 segundos, luego sacar y secar con una tapa en papel absorbente, repetir 4-5 veces.(Si hay las burbujas después de batir, cortarlos con las puntas limpias).
6. Coloración: añadir 50 μL de sustrato A y luego 50 μL de sustrato B en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, luegoIncubación a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para la coloración.
7. Determinación: añadir 50μL de la solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente. Establecer la longitud de onda del lector de microplacas en 450nm para determinar el valor de OD de cada pozo.(Se recomienda leer el valor OD a la doble longitud de onda 450/630 nm en un plazo de 5 minutos).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados: el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de SEM.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es de 1,0ppb, el valor de OD de las soluciones estándar es: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0,02ppb, 1,415 para 0,06ppb, 0,74 para 0,18ppb, 0,313 para 0,54ppb, 0,155 para 1,62ppb,Por consiguiente, el rango de concentración de la muestraI es 0..54 a 1.62 ppm, y el de la muestra II es de 0.06 a 0.18 ppm.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia se obtienen para el valor medio de OD (B) de la muestra y la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀∆el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de la solución estándar y los valores del semilogaritmo de la solución estándar SEM (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Leer la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de SEM en la muestra.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada de situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.
3. Mezclar uniformemente, de lo contrario habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico de 2 M, evite el contacto con la piel.
5. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la dosis.No intercambiar los reactivos de los kits de lotes diferentes para su uso..
6. La solución estándar y la solución de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
7. Se desechará la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a una temperatura de 2 a 8 °C, sin congelar.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

D Edificio, Parque industrial biológico nacional de la vida marina, No.2 Binhai Road, Dapeng, Shenzhen, China, 518120

Tel. 86-755-28438788 El teléfono está en el teléfono.

Por fax 86-755-28938800

El correo electrónico:Información sobre las medidas de seguridad

La Comisión ha adoptado una decisión sobre la aplicación de la presente Decisión.