LSY-10050 Kit de ensayo de eritromicina elisa para leche Kit de ensayo de antibióticos para pollo

Eritromicina de primavera verdeKit de ensayo ELISA

No de catálogo LSY-10050

1Principio.

Este kit de prueba se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de eritromicina en la muestra.La eritromicina de la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por el anticuerpo anti-eritromicina.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de eritromicina..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.2Pb y p

Temperatura de incubación: 25°C

Tiempo de incubación: 30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección:

Leche cruda alrededor de 10ppb

Miel (método 1) aproximadamente 4 ppm

Miel (método 2) alrededor de 0,2 ppm

Nota: ppb=ng/mL o ng/g

Tasa de reacciones cruzadas:

Erythromycin 100%

Tasa de recuperación:

90% ± 30%

3. Componentes

1) Cintas de micro-pozo: 12 cintas con 8 pozos extraíbles cada una

2) Solución estándar (1 ml/ botella): 0 pppb, 0,2 pppb, 0,6 pppb, 1,8 pppb, 5,4 pppb, 16,2 pppb.

3) Conjugado enzimático (7 ml)

4) Substrato A (7 ml)

5) Substrato B (7 ml)

6) Detener la solución (7 ml)

7) 20 × tampón de lavado concentrado (30 ml)

8) 1 × solución de redisolución (50 ml)

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1) elEquipamiento: lector de microplacas (450 nm, 630 nm), evaporador rotativo/dispositivo de secado de nitrógeno, homogeneizador, oscilador, centrífuga (4000 g y más), balanza (con sensibilidad recíproca de 0,01 g), pipetas de medición,incubadora (ajustable a 25°C)El tiempo.

2) elLas demás máquinas: de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de ocho canales de 30 a 300 μL;

3) elReactivos: Agua deionizada, ácido tricloroacético, NaCl, Na₂El CO₃, NaHCO₃El metanol, el acetato de etilo.

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1) Solo se pueden utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se utilizan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1) Solución de 2% de NaCl: pesar 2,0 g de NaCl, añadir 100 ml de agua desionizada para disolverla y mezclarla uniformemente;

2) Metanol: Solución de 2% de NaCl= 2:1: tomar 100 ml de Metanol, añadir en 50 ml de Solución de 2% de NaCl para disolver y mezclar uniformemente;

3) Solución de 1% de ácido tricloroacético: pesar 5 g de ácido tricloroacético, añadir 500 ml de agua desionizada para disolverla y mezclarla uniformemente.

4) 0, 1 M de solución CB: peso de 4, 66 g Na₂El CO₃y 0,5 g de NaHCO₃, añadir 500 ml de agua desionizada para disolverla y mezclarla uniformemente;

5) tampón de lavado: 1 parte 20 × tampón de lavado concentrado + 19 partes de agua desionizada

5.1Leche

1Tomar 1 ml de muestra de leche en 2 ml de tubo de centrifugadora de poliestireno, añadir 1 ml de 1% de solución de ácido tricloroacético, vórtice durante 3 min;

2. Centrifugar a una temperatura superior a 3000 g a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos;

3. Tome 50ul de líquido de capa superior en 2 ml de tubo de centrifugadora de poliestireno, añadir 450ul solución de redisolución, vórtice durante 1min;

4Tomar 50 μL para análisis.

Doble de dilución de la muestra:20

5.2 Miel (método 1)

1) Tomar una muestra de 1,0 ± 0,05 g de miel en un tubo centrífugo de poliestireno de 50 ml;

2) Añadir 2 ml de metanol: 2% de NaCl Solución= 2:1, vórtice durante 2 minutos hasta que la miel se disuelva por completo, centrífuga a 3000 g a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos;

3) Se toma una solución brillante de 100ul en un tubo centrífugo de 2 ml de poliestireno, se añade una solución de redisolución de 900ul;

4) Tomar 50 μL para análisis.

    Doble de dilución de la muestra:20

5.2 Miel (método 2)

1) Tomar una muestra de 2,0 ± 0,05 g de miel en un tubo centrífugo de poliestireno de 50 ml;

2) Añadir 2 ml de solución CB de 0,1 M, en vórtice hasta que la muestra de miel esté completamente disuelta, luego añadir 6 ml de acetato de etilo, agitar durante 5 minutos;

3) Centrifugar a 3000 g a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos;

4) Se toman 3 ml de fase orgánica de capa superior en un tubo de vidrio seco limpio de 10 ml, se soplan para secar en un baño de agua de 50-60 °C con nitrógeno;

5) Añadir 0,5 ml de solución de redisolución, vórtice durante 5 min, mezclar uniformemente;

6) Tomar 50 μL para análisis.

       Doble de dilución de la muestra:0.5

6.Procedimientos de ELISA

 Instruccionesel

1. Colocar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C).

2. Todos los reactivos se devuelven a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3.La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

4Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

Procedimientos de funcionamiento

1. Retirar todos los reactivos necesarios del kit y colocarlos a temperatura ambiente (20 a 25 °C) durante al menos 30 minutos.

2. tomar las tiras de micro-pozo necesarias y los marcos de las placas. volver a sellar la microplaca no utilizada, almacenar a 2-8 °C, no congelada.

3- Numeración: numeración de los micro pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; registrar sus posiciones.

4. Añadir 50 μl de la muestra o solución estándar a los pozos duplicados separados, y luego añadir conjugado enzimático, 50 μl cada uno. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente,sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación en25 °C En la oscuridadpara30 minutos.

5. verter líquido fuera del micro-pozo, añadir 250 μL/pozo de amortiguador de lavado durante 15-30 segundos, repetir de tres a cuatro veces, luego abrir para secar (si hay burbujas después de abrir,cortarlos con las puntas limpias).

6. Coloración: añadir 100 μl de mezcla de sustrato A y sustrato B en cada pozo (Nota: mezclar sustrato A y sustrato B en 1:1, la mezcla debe utilizarse en 10 minutos, nunca utilizar recipiente de metal o metal para agitar la solución, de lo contrario el sustrato puede ser inválido.). Mezcle suavemente sacudiendo la placa manualmente yIncubación en25°C para15minutos en la oscuridad para la coloración.

7. Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo (El color del sustrato de azul a amarillo, significa que la parada tiene éxito). Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Establecer la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la doble longitud de onda 450/630 nm en un plazo de 5 minutos).

7.Enjuiciamiento del resultado

Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia son equivalentes al porcentaje del valor medio de OD (B) de la muestra y de la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de eritromicina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Leer la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de eritromicina en la muestra.

8Las precauciones

1La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.

2La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada por situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.

3Mezclar todos los reactivos y mezclas de reacción de manera uniforme y lavar bien la microplaca, de lo contrario se producirá la reproducibilidad indeseable.

4La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.

5. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla. La sustancia estándar y la primera de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.

6No utilice el kit después de su fecha de caducidad. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y los valores de detección de la dosis.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lote para su uso..

7Se desechará la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.

8La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

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Tel. 86-755-28438788 El teléfono está en el teléfono.

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