LSY-10051 Conjunto de pruebas ELISA de doxiciclina para detectar tejidos, miel, suero 96 pozos por conjunto certificado ISO

Kit de pruebas ELISA de doxiciclina

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de doxiciclina en la muestra.La doxiciclina en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por el anticuerpo anti-doxiciclinaEl valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la doxiciclina en ella.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de doxiciclina..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.1 ppb

Temperatura de incubación: 25°C

Tiempo de incubación: 30min 15min

Límites de detección:

Tejido, miel 4 ppm

Seero 2 ppm

Tasa de reacciones cruzadas:

Doxiciclina 100%

El uso de los medicamentos de la categoría "Tetraciclina" debe tener lugar en el momento en que se trate de una prueba de detección.

Clorotetraciclina: 25%

Oxitetracilina 83%

Tasa de recuperación:

Se trata de un producto que se utiliza para la fabricación de productos químicos.

3. Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipamiento: lector de microplacas, homogeneizador, oscilador, centrífuga, balanza (con sensibilidad recíproca de 0,01 g), pipeta graduada, incubadora.
2. Las demás máquinas: de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de varios canales de 30 a 300 μL;
3. Reactivos: NaOH, acetonitrilo

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1) Solo se pueden utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se utilizan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:
1) el Extracto de muestra A

1 parte del extracto de muestra 20 × A + 19 partes de agua desionizada

2) Extracto de muestra B

1 parte de extracto de muestra 2× B + 1 parte de agua desionizada

3) 1M Solución de NaOH

Pesar 4 g de NaOH, añadir agua desionizada a 100 ml

4) Diluente para la muestra

1 parte de 20 × diluyente de la muestra + 19 partes de agua desionizada

5.1 Tejido, cariño

1) Se toman 2 ± 0,05 g de la muestra de tejido/ miel homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, se añade 3 ml de extracto de muestra A diluido, se agita durante 3 min.

2) A continuación, añadir 600ul de solución de 1M NaOH y 2,4 ml de extracto de muestra B diluido, agitar durante 3 minutos; centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20 - 25 °C) durante 5 minutos.

3) Se toma un líquido transparente de la capa superior de 50 u.l., se añade un diluyente de muestra diluido de 450 u.l., y se mezcla uniformemente.

4) Se toma una solución mezclada de 50 ul por encima para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 40

5.2 Suero

1) Se toma una muestra de suero de 1 ml en un tubo centrífugo de 50 ml, se añade 1 ml de acetonitril, se agita durante 3 minutos;

2) Centrifugar a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos.

3) Se toma un líquido transparente de capa superior de 100 u.l., se añade un diluyente de muestra diluido de 400 u.l., y se mezcla uniformemente.

4) Se toma una solución mezclada de 50 ul por encima para su análisis.

Doble de dilución de la muestra: 10

6Procedimientos de ELISA

Instrucciones

1. Colocar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C).

2. Todos los reactivos se devuelven a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3.La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

4Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe sellarse con la membrana de cubierta.

Procedimientos de funcionamiento

1. Sacar todos los reactivos necesarios del kit y colocarlos a temperatura ambiente (20 a 25 °C) durante al menos 30 minutos.
2. Tomar las tiras de micro-pozo y los marcos de placas requeridos.
3. Preparación del amortiguador de lavado: diluir 15 ml del amortiguador de lavado concentrado de 20 × con el agua desionizada a 1:19 (1 parte de amortiguador de lavado concentrado de 20 × + 19 partes de agua desionizada).O preparar tampón de lavado en la cantidad necesaria.
4. Numeración: se numeran los micro-pozos según las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; se registran sus posiciones.
5. Añadir 50 μl de la muestra o solución estándar a los pozos duplicados separados y añadir 50 ul de enzima conjugada y luego 50 μl de la solución de anticuerpos en cada pozos. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente,sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación a los 25 años°Cdurante 30 minutos.
6. Se verterá líquido en el micro-pozo, se añadirá 250 μL/pozo de amortiguador de lavado durante 15-30 segundos, se repetirá de cuatro a cinco veces, y luego se secará con las bolas (si quedan burbujas después de las bolas, se cortarán con las puntas limpias).
7. Coloración: añadir 50 μL de sustrato A y luego 50 μL de sustrato B en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente yIncubación a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para coloración.
8. Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Establecer la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la doble longitud de onda 450/630 nm en un plazo de 5 minutos).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de doxiciclina en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/ml) se puede obtener al comparar el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, mientras que las de las soluciones estándar son las siguientes: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0,1ppb, 1,415 para 0,3ppb, 0,74 para 0,9ppb, 0,313 para 2,7ppb y 0,155 para 8,1ppb,En consecuencia, el rango de concentración de la muestra es 2.7 a 8.1 ppb, y el de la muestra II es de 0,3 a 0,9 ppb.

7.2 Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia son equivalentes al porcentaje del valor medio de OD (B) de la muestra y de la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de doxiciclina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de doxiciclina en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor estándar de DO inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada por situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
3. Mezclar todos los reactivos y mezclas de reacción de manera uniforme y lavar bien la microplaca, de lo contrario se producirá la reproducibilidad indeseable.
4. La solución de parada es el ácido clorhídrico de 0,2 M, evite el contacto con la piel.
5. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla.
6. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la DO.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.
7. Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.