Kit de prueba de anticuerpos ELISA indirectos para la brucelosis bovina utilizado para la detección de anticuerpos lisos contra la brucela en suero bovino.

Kit de prueba de anticuerpos ELISA para la brucelosis bovina indirecta

Instrucciones de uso

No de catálogo:Se trata de un documento de referencia.

[Destinado Uso]

Este medicamento se utiliza para la detección de anticuerpos lisos de Brucella en suero bovino.

[Especificación]

192 Pozos / Kit

[Componentes del kit]

[Procedimiento de ensayo e interpretación]

1 Método

1.1 Preparación de las muestras:Se recogerá sangre entera de animales y se separará el suero.

1.2 Preparación de las 1 ×lavado el buffer:Antes de usar, llevar el tampón de lavado 20× a temperatura ambiente (20°C a 25°C) y agitar suavemente para disolver los cristales (puede calentarse en un baño de agua de 37°C durante 5°10 minutos si es necesario).Luego diluir con agua purificada a 120 y mezclar bien.

1.3 Dilución del suero de ensayo y suero de control:Diluir el suero de ensayo, el suero de control negativo y el suero de control positivo con el diluyente de la muestra en una proporción de 1:50 en la placa de dilución del suero.

1.4 Procedimiento

1.4.1 Adición de muestras:Tomar la placa recubierta de antígeno (las tiras pueden separarse y utilizarse en lotes según el número de muestras).

Lavar el plato una vez con 300 μl de tampón de lavado 1× por pozo, luego desechar la solución de lavado.y el suero de control negativo en los pozos correspondientes de la placa ELISACada suero de ensayo se añade a un pozo, mientras que el suero de control positivo y el suero de control negativo se añaden cada uno a dos pozos (pozo 1 y pozo 2).Incubación a 37°C durante 30 minutosRetire la placa y deseche la solución de reacción.

Añadir 300 μl de 1 × tampón de lavado por pozo y lavar tres veces.

Después del último lavado, retire el líquido residual sacudiéndolo o secándolo.

1.4.2 Adición de enzima conjugadael:Diluir IgG antibovina de conejo HRP con su diluyente a 1:200. añadir 100 μl por pozo, incubar a 37°C durante 30 minutos. Lavar tres veces según el método descrito en 1.4.1, y eliminar el líquido residual.

1.4.3 Desarrollo del color:Mezclar la solución de sustrato A y la solución de sustrato B en una proporción de 1:1 (V/V) y añadir inmediatamente 100 μl por pozo a la placa ELISA.Incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 15 minutos para el desarrollo del color.

1.4.4 Terminación de la reacción:Añadir 50 μl de solución de parada por pozo para terminar la reacción.

2 Resultado la interpretación: Después de detener la reacción, medir el- ¿ Qué?450 valor con un lector de microplacas en 15 minutos.

2.1 Cálculo

En promedio- ¿ Qué?450valor del control positivo:

- ¿ Qué?450 ((Bueno 1) +- ¿ Qué?450 ((Bueno 2)

2

En promedio- ¿ Qué?450valor del control negativo:

- ¿ Qué?450 ((Bueno 1) +- ¿ Qué?450 ((Bueno 2)

2

- ¿ Qué?450 (muestra)

SP = X media del 100%- ¿ Qué?450 ((Control positivo)

2.2El número de datos Criterios: Cuando el promedio- ¿ Qué?450 del control positivo ≥ 0.8, y el promedio- ¿ Qué?450 del control negativo < 0.1, y promedio- ¿ Qué?450 valor del control negativo/ promedio- ¿ Qué?450 valor de control positivo × 100% < 10%, el ensayo se considera válido.

2.3 Determinación de los resultados

Cuando el valor S/P sea ≥ 20%, la muestra es positiva para los anticuerpos de la brucelosis bovina.

Cuando el valor S/P es < 20%, la muestra es negativa para los anticuerpos contra la brucelosis bovina.

[Precauciones]

1No utilice componentes de lotes diferentes.

2. Todos los reactivos deben conservarse a 2°8°C. Volver a la temperatura ambiente durante 15°30 minutos antes de su uso.Las tiras deben sellarse en una bolsa sellada para su almacenamiento.

3Si la placa de dilución del suero no se utiliza completamente, los pozos utilizados deben lavarse y secarse cuidadosamente.y claramente marcados para evitar confusiones en ensayos posteriores.

4Durante la adición de la muestra, evitar la formación de burbujas y salpicaduras de líquido tanto como sea posible para evitar la contaminación cruzada entre las muestras.

5La solución de sustrato debe almacenarse protegida de la luz y no debe entrar en contacto con agentes oxidantes.Los recipientes utilizados para la solución de sustrato deben estar limpios y libres de contaminación..

6. La solución de parada contiene 1 M de ácido clorhídrico (HCl) y es corrosiva.

[Condiciones de almacenamiento y estanteLa vida]

1Conservar a una temperatura de 2°8°C.

2- Período de conservación: 12 meses.