Kit de ensayo ELISA de tiamulina para la detección de la inocuidad de los huevos en los piensos para tejidos LSY-10076

TiamulinaKit de ensayo ELISA

No de catálogo LSY-10076

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo indirecto para la detección de tiamulina en muestras.La tiamulina en la muestra y los antígenos conjugados pre-revestidos en las franjas de micro-pozo compiten por los anticuerpos anti- tiamulina.Después de la adición del conjugado enzimático, se añade el sustrato TMB para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) tiene una correlación negativa con la concentración de tiamulina en la muestra.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de tiamulina..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,03 ppm

Temperatura de la incubadora: 25°C

Tiempo en la incubadora: 30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección:

Tejido, huevo 1 ppm

El valor de las emisiones de dióxido de carbono es el valor de las emisiones de dióxido de carbono.

Tasa de recuperación:

Tejidos, huevos, piensos... 90 ± 30%

Tasa de reacciones cruzadas:

Tiamulina: 100%

3. Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipo:Lector de microplacas, homogeneizador, impresora, dispositivo de secado de nitrógeno, oscilador, centrífuga, pipetas de medición, balanza (con una sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora.
2. Se trata de una micropipeta:de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de varios canales de 30 a 300 μl;
3. Los reactivos:Metanol anhidro, etanol anhidro

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1. Para los experimentos se podrán utilizar únicamente las puntas desechables y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
2. Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados del experimento.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

Solución I Solución de redisolución de la muestra:

Diluir la solución de redisolución concentrada 2× con agua desionizada a 1:1 (1 parte de solución de redisolución concentrada 2× +1 parte de agua desionizada).

Preparación de las muestras

a) Tejidos (pollo, cerdo, pato)

1. Pesar 1 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada en un tubo centrífugo de 10 ml, añadir 2 ml de metanol anhidro, agitar adecuadamente durante 3 minutos, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 minutos.
2. Se toman 100 μl del supernatante, se añade 900 μl de solución de redisolución de la muestra, se agita para mezclar uniformemente.
3. Se tomarán 50 μl de líquido para análisis.

Doble de dilución de la muestra: 30

b) Alimentos para animales

1. Pesar 1 ± 0,05 g de la muestra de alimentación triturada en un tubo centrífugo de 10 ml o 50 ml, añadir 5 ml de metanol anhidro, agitar adecuadamente durante 3 min.Centrifugado a una velocidad superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 min..
2. Se toman 100 μl del supernatante, se añade 900 μl de solución de redisolución de la muestra, se agita para mezclar uniformemente.
3. Se tomarán 50 μl de líquido para análisis.

Doble de dilución de la muestra: 50

c) Huevo

1. Pesar 1 ± 0,05 g de la muestra de huevo en un tubo centrífugo de 10 ml, añadir 2 ml de etanol anhidro, agitar adecuadamente durante 3 minutos, centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente durante 5 minutos.
2. Se toman 100 μl del supernatante, se añade 900 μl de solución de redisolución de la muestra, se agita para mezclar uniformemente.
3. Se tomarán 50 μl de líquido para análisis.

Doble de dilución de la muestra: 30

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1. Antes de su uso, debe poner todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C).
2. Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.
3. La reproductibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.
4. Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Ejecución del ensayo

1) Sacar todos los reactivos necesarios de un ambiente de 2 a 8 °C, llevarlos a temperatura ambiente (20 a 25 °C) durante al menos 30 min. Tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse uniformemente antes de su uso.

2) Tomar las tiras de micro-pozo necesarias y los marcos de las placas.

3) Preparación de la solución: disolver 40 ml del tampón de lavado 20 × concentrado con agua desionizada a 1:19 (1 parte de 20 × tampón de lavado concentrado + 19 partes de agua desionizada) o sólo al volumen requerido para su uso.

4) Numeración: numeración de los micro pozos según las muestras y la solución estándar; cada muestra de ensayo y solución estándar deben realizarse en duplicado; registrar sus posiciones.

5) Añadir 50 μL de la muestra o solución estándar a los pozos duplicados separados, añadir 50 μL del conjugado enzimático y luego añadir 50 μL de la solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos.Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación a los 25 años°Cdurante 30 minutos.

6) Lavar la microplaca con el amortiguador de lavado a 250 μL/pozo durante 4-5 veces.cortarlos con las puntas limpias).

7) Coloración: añadir 50 μL de solución de sustrato A y luego 50 μL de solución de sustrato B en cada pozo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yIncubación a los 25 años°Cdurante 15 minutos en la oscuridad para la coloración.

8) Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo, mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la longitud de onda dual 450/630 nm en un plazo de 5 min).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de tiamulina..

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es 0.7, el valor de la DO de las soluciones estándar es: 2.043 para 0ppb, 1.716 para 0.03ppb, 1.015 para 0.09ppb, 0.44 para 0.27ppb, 0.064 para 0.81ppb, por lo que el rango de concentración de la muestraI es de 0.27 a 0.81, y el de la muestra II es de 0,09 a 0,27 ppm.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor medio de OD (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de tiamulina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de tiamulina en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada de situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.
3. Mezclar uniformemente, de lo contrario se producirá la reproductibilidad indeseable;
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evitar el contacto con la piel.
5. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la dosis.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.
6. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa que se sella automáticamente para volver a sellarla.
7. Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Sugerencia: Si hay alguna fuga de aire en la bolsa de embalaje al vacío de la placa de ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas (ELISA), la placa de ELISA sigue siendo válida y no afecta a los resultados experimentales.Por favor, siéntase libre de usarlo..

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