Nifursol Metabolitos (DNSAH) Kit de ensayo ELISA para ensayos de seguridad de productos acuáticos LSY-10075

Los metabolitos de nifursol (DNSAH) en el kit de pruebas ELISA

No de catálogo: LSY-10075

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico de enzimas competitivas indirectas para la detección de DNSAH en la muestra.El DNSAH en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las tiras de micro-pozo compiten por los anticuerpos anti-DNSAH.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración. El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el DNSH en ella.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración DNSAH.

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,25 ppm

Temperatura de incubación: 25°C

Tiempo de incubación:30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección

Tejido de productos acuáticos: 0,25 ppm

Tasa de reacciones cruzadas

Metabolitos del nifursol (DNSAH) 100%

Tasa de recuperación

Tejido de productos acuáticos 95±25%

3.Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipo:Lector de microplacas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, centrífuga, pipetas de medición, balanza (con sensibilidad recíproca de 0,01 g), incubadora, baño de agua;
2. Se trata de una micropipeta:de un solo canal de 20-200μL, 100-1000μL y de varios canales de 30-300μl;
3. Los reactivos:NaOH, acetato etílico, HCI (aproximadamente 36,5%), K₂HPO₄·3H₂¿ Qué?

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1. Sólo se podrán utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
2. Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1. 0.1 M K₂HPO₄: disuelven 11,4 g de K₂HPO₄·3H₂O en agua desionizada a 500 ml.
2. 1 M HCl: disolver 8,6 mL de HCI (aproximadamente 36,5%) en agua desionizada hasta 100 mL.
3. 1 M NaOH: se disuelven 4 g de NaOH en agua desionizada hasta 100 ml.
4. la solución de redisolución concentrada 2× se diluye con agua desionizada a 1:1 ((1 ml de solución de redisolución concentrada + 1 ml de agua desionizada), utilizada para la redisolución de la muestra.
5. tampón de lavado: diluir 40 ml del tampón de lavado 10 × concentrado con agua desionizada a 1:9 (1 parte de tampón de lavado 20 × concentrado + 9 partes de agua desionizada) o preparar según sea necesario.

5.1 Preparación de las muestras

Producto acuático Tejido

1) Se pesan 2 ± 0,05 g de la muestra homogeneizada, se añaden 4 ml de agua destilada, 0,5 ml de 1 M HCI y 100 μl de 2-nitrobenzaldehído (C₇H.₅No₃) a cada tubo, agitar adecuadamente durante 2 minutos;

2) Incubación a los 37 años°C durante la noche (aproximadamente 16 h)o incubar en56°Cpor baño de agua para2 horas.

3. Añadir 5 ml 0.1 M K₂HPO₄, 0,4 ml de 1 ml de NaOH y 6 ml de acetato de etilo en cada tubo, agitar durante 30 minutos.
4. Centrifugar a una temperatura superior a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25°C) durante 10 min (si no hay capa de emulsión o acetato de etilo suficiente para 3 ml,incubar la muestra en un baño de agua a 80 °C durante 10 minutos y centrifugarla repetidamente; o aumentar la velocidad y prolongar el tiempo de centrifugado).
5. Transfiere 3 ml de la capa de acetato de etilo (líquido de la capa superior) a un nuevo tubo centrífugo y evapora hasta secarse con nitrógeno o aire a 50 °C.
6. Añadir 1 ml de la solución de redisolución diluida, mezclar adecuadamente durante 30 segundos.
7. Tomar 50 μL para su análisis.

Plegado de dilución de la muestra: 1

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1) Antes de su uso, llevar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C);

2) Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3) La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

4) Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1. Lleve el kit de ensayo a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos, tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de su uso, coloque las tiras de micro-pozo necesarias en los marcos de las placas.Se vuelve a sellar la microplaca no utilizada, almacenar a 2-8 °C, no congelado.
2. Numeración: se numeran los micro pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado, registrándose sus posiciones.
3. Se añaden 50 μl de la muestra o solución estándar en pozos duplicados separados; se añade 50 μl de conjugado enzimático y luego 50 μl de la solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos,Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente. Sella la microplaca con la membrana de cubierta yIncubación a 25 °C durante 30 minutos.
4. Derramar líquido del microcubo, secar con una tapa en papel absorbente, añadir 250μL/pozo de amortiguador de lavado para lavar la microplata durante 15-30 segundos, luego sacar y secar con una tapa en papel absorbente, repetir 4-5 veces.(Si hay las burbujas después de batir, cortarlos con las puntas limpias).
5. Coloración: añadir 50 μL de sustrato A y luego 50 μL de sustrato B en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, luegoIncubación a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para coloración.
6. Determinación: añadir 50μL de la solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente. Establecer la longitud de onda del lector de microplacas en 450nm para determinar el valor de OD de cada pozo.(Se recomienda leer el valor OD a la doble longitud de onda 450/630 nm en un plazo de 5 minutos).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados: el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de DNASH.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.5, y el de la muestra II es de 1,0ppb, el valor de OD de las soluciones estándar es: 1,653 para 0ppb, 1,385 para 0,25ppb, 1,056 para 0,75ppb, 0,826 para 2,25ppb, 0,453 para 6.75ppb, por lo que el rango de concentración de la muestra I es de 2.25 a 6.75 ppm, y la muestra II es de 0.75 a 2.25 ppm.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia se obtienen para el valor medio de OD (B) de la muestra y la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀∆el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/ml

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de la solución estándar y los valores del semilogaritmo de la solución estándar DNSAH (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de DNSAH en la muestra.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada de situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.
3. Mezclar uniformemente, de lo contrario habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evitar el contacto con la piel.
5. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la dosis.No intercambiar los reactivos de los kits de lotes diferentes para su uso..
6. La solución estándar y la primera de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.
7. Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de la solución estándar 1 ((0 ppb) inferior a 0,5 indica su degeneración.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenarse a una temperatura de 2 a 8 °C,No congelados.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

D Edificio, Parque industrial biológico nacional de la vida marina, No.2 Binhai Road, Dapeng, Shenzhen, 518120 China

Tel. 86-755-28438788 - ¿Qué quiere decir?

Por fax 86-755-28938800

El correo electrónico:Información sobre las medidas de seguridad

La Comisión ha adoptado una decisión sobre la aplicación de la presente Decisión.