Kit de ensayo ELISA de Bacitracina de Primavera Verde para carne de cerdo, pollo 96 pozos LSY-10074 Sensibilidad: 1 ppb

BacitracinaKit de ensayo ELISA

No de catálogo LSY-10074
1Principio.
Este kit de prueba se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de Bacitracina en la muestra.La bacitracina en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las tiras de micro-pozo compiten por el anticuerpo anti-bacitracina.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración. El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la Bacitracina en ella.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de Bacitracina..
 
2Especificaciones técnicas
Sensibilidad: 1 ppb
el rango de curvas estándar: 1ppb-81ppb;
Coeficiente de variación intraplaca: < 5%
Coeficiente de variación entre placas:<15%
Valor óptimo de la absorbancia B0: > 0.8;
Temperatura de incubación: 25°C
Tiempo de incubación: 30min 15min
Límites de detección:
Carne de cerdo, pollo aproximadamente 50 ppm
Nota: ppb=ng/mL o ng/g
Tasa de reacciones cruzadas
Bacitracina 100%
Tasa de recuperación:
90% ± 30%
 
3. Componentes

1. Las bandas de micro-pozo: 12 bandas con 8 pozos extraíbles cada una
2. Solución estándar (1 ml/ botella): 0ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb, 81ppb.
3. 11X Conjugado concentrado de enzimas (0,7 ml)
4. Dilución conjugada de enzimas (7 ml)
5. 20 × tampón de lavado concentrado (30 ml)
6. 10 × solución de diluyente de muestra (10 ml)
7. Substrato A (7 ml)
8. Substrato B (7 ml)
9. Solución de parada (7 ml)

 
4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipo: lector de microplacas (450 nm, 630 nm), evaporador rotativo/dispositivo de secado de nitrógeno, homogeneizador, oscilador, centrífuga (4000 g y más), balanza (con sensibilidad recíproca de 0,01 g), pipetas de medición,incubadora (ajustable a 25°C)El tiempo.
2. Las demás:: de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de ocho canales de 30 a 300 μL;
3. Reactivos: NaCl, agua desionizada

 
5Pre-tratamiento de la muestra
Instrucciones
Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:
1) Solo se pueden utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se utilizan para absorber diferentes reactivos;
2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.
Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1. 3% NaCl: tomar 6 g de NaCl, añadir agua desionizada a 200 ml, disolverlo completamente para su uso.
2. Solución del diluyente de la muestra: 1 parte de 10 × solución del diluyente de la muestra + 9 partes de agua desionizada, mezclada uniformemente para su uso.
3. tampón de lavado: 1 parte de 20 × tampón de lavado concentrado + 19 partes de agua desionizada;

5.1 Pollo y cerdo
1) Se toma una muestra de tejido homogeneizada de 1,0 ± 0,05 g en un tubo centrífugo de 10 ml de poliestireno, se añade 2 ml de 3% de NaCl, se agita fuertemente durante 2 min (o se hace un vórtice durante 1 min),Centrifugado a 4000 g a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 minutos;
2) Tomar 100 μL de líquido transparente de capa superior en un nuevo tubo de centrifugadora de poliestireno.añadir 900ul de laSolución de diluyente de muestra, vórtice durante 30 s.
3) Tomar 50 μl de líquido para análisis.
Doble de dilución de la muestra: 30
 
6Procedimientos de ELISA
Instrucciones
1. Colocar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C).
2. Todos los reactivos se devuelven a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3.La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

4Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.
Procedimientos de funcionamiento

1. Sacar todos los reactivos necesarios del kit y colocarlos a temperatura ambiente (20 a 25 °C) durante al menos 30 minutos.
2. Tomar las tiras de micro-pozo y los marcos de placas requeridos.
3. Numeración: se numeran los micro-pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; se registran sus posiciones.
4. Preparación de conjugado enzimático: tomar 1 parte de conjugado enzimático concentrado 11X, añadir 10 partes de dilución de conjugado enzimático, diluir a 1:10(Nota: Por favor, asegúrese de mezclar y utilizar según sea necesario inmediatamente).
5. Añadir 50 μL de la muestra o solución estándar a los pozos separados; luego añadir conjugado de enzimas, 50 μL cada uno. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente,sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación a los 25 años°Cen la oscuridad durante 30 minutos.
6. Verter líquido fuera del microcubo, añadir 250 μL/cubo de amortiguador de lavado durante 15-30 segundos, repetir de tres a cuatro veces, y luego abrir para secar (si hay burbujas después de abrir, cortar con las puntas limpias).
7. Coloración: añadir 100 μl de mezcla de sustrato A y sustrato B en cada pozo (Nota: mezclar sustrato A y sustrato B a 1:1, la mezcla debe utilizarse en 10 minutos, nunca utilizar recipiente de metal o metal para agitar la solución, de lo contrario el sustrato puede ser inválido.). Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, yIncubación a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para coloración.
8. Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo (el color del sustrato de azul a amarillo significa que la parada ha tenido éxito). Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Establecer la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la doble longitud de onda 450/630 nm en un plazo de 5 minutos).

 
7.Enjuiciamiento del resultado
Determinación cuantitativa
Los valores medios de los valores de absorbancia son equivalentes al porcentaje del valor medio de OD (B) de la muestra y de la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL
Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de Bacitracina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de Bacitracina en la muestra.
 
8.Precauciones

1. Le rogamos que lea atentamente las instrucciones antes de utilizar el kit ELISA.
2. Antes de utilizar el kit ELISA, cada componente dentro del kit debe colocarse en el banco de ensayo y calentarse de nuevo a temperatura ambiente (25 ± 2 °C) (nota: aproximadamente 1 hora).
3. El reactivo debe agitarse bien antes de su uso y evitar burbujas durante la mezcla.
4. Para evitar la contaminación cruzada de los reactivos, no utilice las puntas una y otra vez.
5. No utilizar kits de reactivos caducados y no mezclar los reactivos de kits con números de lotes diferentes.
6. Por favor, analice la muestra inmediatamente después del procesamiento, de lo contrario puede afectar a los resultados de los ensayos.
7. Tanto el sustrato A como el substrato B son líquidos incoloros y transparentes.indica que el reactivo ha sido contaminado o deteriorado.
8. El proceso de muestreo debe ser rápido y garantizar la exactitud para evitar el impacto de las diferencias de tiempo de reacción en los resultados de detección.
9. Si accidentalmente se rocía sobre la piel o la ropa, enjuague inmediatamente con mucha agua.Por favor vaya al hospital para un examen después de una limpieza completa.

 
9. Almacenamiento y fecha de caducidad
El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.
Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

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