Sistema de ensayo de antibióticos para la miel Tetraciclinas ELISA Kit límite de detección 2ppb

Las tetraciclinas (TC) Kit de pruebas ELISA (miel)

No de catálogo LSY-10006-2

1Principio.

Este kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de tetraciclinas en la muestra.Las tetraciclinas de la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las tiras de micro-pozo compiten por el anticuerpo de las tetraciclinas.Después de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con las tetraciclinas en ella.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de tetraciclinas..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.2 ppb

Temperatura de incubación: 25°C

Tiempo de incubación: 30min 15min

Límites de detección:

Cariño alrededor de 2ppb.

Nota: ppb=ng/mL o ng/g

Tasa de reacciones cruzadas:

Tetraciclina 100%

Clorotetraciclina 120%

Oxitetracilina 50%

Doxiciclina 20%

Tasa de recuperación:

90 ± 15%

3. Componentes

1. Las bandas de micro-pozo: 12 bandas con 8 pozos extraíbles cada una
2. Solución estándar: 0ppb, 0,2ppb, 0,6ppb, 1,8ppb, 5,4ppb, 16,2ppb (1 ml/ botella)
3. Solución de trabajo de anticuerpos (7 ml)
4. Conjugado de enzimas (7 ml)
5. 20 × tampón de lavado concentrado (30 ml)
6. Solución de diluyente de muestra (40 ml)
7. Substrato A (7 ml)
8. Substrato B (7 ml)
9. Solución de parada (7 ml)

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipamiento: lector de microplacas (450 nm, 630 nm), evaporador rotativo/dispositivo de secado de nitrógeno, homogeneizador, oscilador, centrífuga (4000 g y más), balanza (con sensibilidad recíproca de 0,01 g), pipetas de medición,incubadora (ajustable a 25°C), 37°C, 60°C), temporizador
2. Las demás máquinas: de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de varios canales de 30 a 300 μL;
3. ReactivosAgua desionizada.

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1) Solo se pueden utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se utilizan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse, a fin de evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1. Lavadora de amortiguación: 1 parte 20 × amortiguación de lavado concentrada + 19 partes de agua desionizada

5.1 Miel

1. Se tomarán 1 ± 0,01 g de la muestra de miel homogeneizada en un tubo centrífugo de 10 ml.
2. Se añade 1 ml de agua desionizada, se agita con fuerza durante 3 minutos para que la muestra se disuelva completamente.
3. Se toma un líquido transparente de la capa superior de 50 u.l., se añade una solución de diluyente de 450 u.l. La muestra se vorticea durante 2 min.
4. Tomar 50 μL para su análisis.(La muestra diluida debe examinarse inmediatamente)

Doble de dilución de la muestra: 10

6Procedimientos de ELISA

Instrucciones

1. Colocar todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C).

2. Todos los reactivos se devuelven a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3.La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

4Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

Procedimientos de funcionamiento

1. Sacar todos los reactivos necesarios del kit y colocarlos a temperatura ambiente (20 a 25 °C) durante al menos 30 minutos.
2. Tomar las tiras de micro-pozo y los marcos de placas requeridos.
3. Numeración: se numeran los micro-pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; se registran sus posiciones.
4. Añadir 50 μL de la muestra o de la solución estándar a los pozos duplicados separados, luego añadir el conjugado enzimático, 50 μL/pozo, y añadir la solución de trabajo de anticuerpos 50 uL/pozo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente,sellar la microplaca con la membrana de cubierta, yIncubación a los 25 años°Cen la oscuridad durante 30 minutos.
5. Verter líquido fuera del microcubo, añadir 250 μL/cubo de amortiguador de lavado durante 15-30 segundos, repetir de tres a cuatro veces, y luego abrir para secar (si hay burbujas después de abrir, cortar con las puntas limpias).
6. Coloración: añadir 100 μl de mezcla de sustrato A y sustrato B en cada pozo (Nota: mezclar sustrato A y sustrato B a 1:1, la mezcla debe utilizarse en 10 minutos, nunca utilizar recipiente de metal o metal para agitar la solución, de lo contrario el sustrato puede ser inválido.). Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, yIncubación a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para coloración.
7. Determinación: añadir 50 μL de la solución de parada en cada pozo (el color del sustrato de azul a amarillo significa que la parada ha tenido éxito). Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Establecer la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD (se recomienda leer el valor de OD en la doble longitud de onda 450/630 nm en un plazo de 5 minutos).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de tetraciclinas en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/ml) se puede obtener comparando el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, mientras que las de las soluciones estándar son las siguientes: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0,2ppb, 1,415 para 0,6ppb, 0,74 para 1,8ppb, 0,313 para 5,4ppb,En consecuencia, el rango de concentración de la muestra es 1.8 a 5.4 ppb, y la muestra II es de 0,2 a 0.6 ppb.

7.2 Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia son equivalentes al porcentaje del valor medio de OD (B) de la muestra y de la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de tetraciclinas (ng/mL) en el eje Y y en el eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de tetraciclinas en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada por situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
3. Mezclar todos los reactivos y mezclas de reacción de manera uniforme y lavar bien la microplaca, de lo contrario se producirá una reproducibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evitar el contacto con la piel.
5. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla.
6. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la DO.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.
7. Se desechará la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.

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