LSY-10073 Kit de ensayo ELISA de Cimeterol de primavera verde para detectar residuos de Cimeterol en muestras de orina y carne

Kit de ensayo de ELISA para Cimeterol

No de catálogo LSY-10073

1Principio.

El kit de ensayo se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo indirecto para la detección de Cimeterol en la muestra.El Cimeterol en la muestra y los antígenos de acoplamiento pre-revestidos en las tiras de micro-pozo compiten por los anticuerpos anti-CimeterolDespués de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Cimeterol en ella.Este valor se compara con la curva estándar y posteriormente se obtienen los residuos de Cimeterol.

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0, 1 ppb

Temperatura de la incubadora: 25°C

Tiempo en la incubadora: 30 minutos¿Qué quieres decir?15 minutos

Límites de detección

Orina 0,3 ppb

El tejido (método uno)

Tejido (método dos) 0,2 ppb

Tasa de recuperación

95% ± 30%

Tasa de reacciones cruzadas

Cimeterol 100% de las sustancias enumeradas en el anexo II

3. Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipo:Lector de microplacas, impresora, homogeneizador, dispositivo de secado de nitrógeno, vórtice, oscilador, centrífuga, pipetas de medición, incubadora, balanza (con una sensibilidad recíproca de 0,01 g)
2. Se trata de una micropipeta:de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de varios canales de 30 a 300 μL;
3. Los reactivos:Acetato de etilo, acetonitrilo (CH)₃En el caso de las sustancias químicas de origen vegetal, se utilizará el método siguiente:

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones(Los siguientes puntos deben tratarse antes del pretratamiento)

1. Sólo se podrán utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deberán cambiarse cuando se utilicen para absorber diferentes reactivos.
2. Antes del experimento, cada utensilio experimental debe estar limpio y, si es necesario, debe volver a limpiarse para evitar la contaminación que interfiera con los resultados del experimento.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

1. 0.2 M HCI: se disuelven 17,2 ml de HCI (aproximadamente 36,5%) en agua desionizada hasta 1 L.
2. 1M NaOH: disolver 4 g de NaOH en agua desionizada hasta 100 ml
3. Solución de extracción de la muestra:

5x solución de extracción de la muestra: agua desionizada=1:4, mezclar uniformemente.

4. 0.1 M NaOH: disolver 0,4 g de NaOH en agua desionizada hasta 100 ml
5. 0.1 M HCI: disolver 0,86 ml de HCI (aproximadamente el 36,5%) en agua desionizada hasta 100 ml.
6. Solución de acetonitril-0,1 M HCI: V_Acetonitrilo:Ⅴ_HCI= 84: ¿Qué quieres decir?16
7. la solución de redisolución concentrada 2× se diluye con agua desionizada a 1:1 ((1 ml de solución de redisolución concentrada + 1 ml de agua desionizada), utilizada para la redisolución de la muestra.

Preparación de las muestras

5.1Hidratante

Tome 20 μL de orina clara, detecte directamente (si la orina está fangosa, debe filtrarse o centrifugarse a 4000 r/min durante 10 min, luego tome orina clara).

Doble de dilución de la muestra: 1

5.2 Tejido

Método uno

1. Pesar 2 ± 0,05 g de muestra de tejido homogeneizada en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 3 ml de HCI de 0,2 M, agitar bien durante 3 minutos;
2. A continuación, añadir 600ul de 1M NaOH y 2,4 ml de solución de extracción de la muestra, agitar bien durante 3 minutos, centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 10 minutos.
3. Se tomarán 20 μL de líquido de capa superior transparente para el análisis (consejos: si hay una capa de grasa después de la centrifugadora, se eliminará la capa de grasa y se tomará líquido transparente para el análisis).

Doble de dilución de la muestra: 4

Método dos

1Pesar 2 ± 0,05 g de muestra de tejido homogeneizado en un tubo centrífugo de 50 ml, añadir 6 ml de solución de acetonitril-0,1 M HCI, agitar durante 2 minutos, centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 10 minutos.

2. Tomar 3 ml de líquido transparente de capa superior, añadir 2 ml de 0,1 M NaOH, luego añadir 6 ml de solución de acetato de etilo, agitar durante 1 minuto, centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 10 minutos,tomar todo el líquido transparente de la capa superior, soplar para secar con nitrógeno o aire a 50 ~ 60 °C.

4. Se añade 1 ml de solución diluida para disolver la muestra para disolver los residuos secos y se mezcla durante 30 minutos.
5. Tomar 20 μL para el análisis.

Doble de dilución de la muestra: 1

6Procedimientos de ELISA

Instrucciones

1. Se llevarán todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25°C).
2. Devolver todos los reactivos a 2-8°C inmediatamente después de su uso.
3. La reproductibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la coherencia de los resultados obtenidos.

El correcto funcionamiento del lavado de platos es el punto clave en los procedimientos de ELISA.

4. Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

Procedimiento de funcionamiento

1. Coloque el kit de ensayo a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 minutos, tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse uniformemente antes de su uso; coloque las tiras de micro-pozo necesarias en los marcos de las placas.Se vuelve a sellar la microplaca no utilizada, conservados a 2-8 °C, no congelados;
2. Preparación de la solución: diluir 40 ml del tampón de lavado concentrado (20 × concentrado) con el agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado 20X + 19 partes de agua desionizada),o prepararse según sea necesario.
3. Numeración: se numeran los micro-pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; se registran sus posiciones;
4. Se añaden 20 μL de la muestra o de la solución estándar en pozos duplicados separados, luego se añade el conjugado enzimático, 50 μL/pozo; y la solución de trabajo de anticuerpos, 80 μL/pozo.Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cubierta,Incubación a 25 °C durante 30 minutos.;
5. Se verterá el líquido fuera del microcubo, se lavará la microplaca con el amortiguador de lavado diluido a 250 μl/pozo durante cuatro o cinco veces.seco con papel absorbente (si hay burbujas después de golpear, cortarlos con las puntas limpias).
6. Coloración: añadir 50 μL de solución de sustrato A y 50 μL de solución de B en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente yIncubación a 25 °C durante 15 minutos en la oscuridad para coloración;
7. Determinación: añadir 50 μL de solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente. Ajustar la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD de cada pozo.(Se recomienda leer el valor de OD a la longitud de onda dual 450/630 nm en un plazo de 5 min.).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de Cimeterol en la muestra.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) se puede obtener comparando el valor medio de la OD de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la OD de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, el valor OD de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,1 ppb, 1,415 para 0,3 ppb, 0,74 para 0,9 ppb, 0,313 para 2,7 ppb, 0,155 para 8,1 ppb,en consecuencia, el rango de concentración de la muestra I es de 2.7 a 8.1 ppb, y el de la muestra II es de 0,3 a 0,9 ppb.

7.2 Cuantitativo determinación

Los valores medios de los valores de absorbancia obtenidos para el valor medio de OD (B) de la muestra y la solución estándar divididos por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibujar la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de Cimeterol (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor obtenido se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de Cimeterol en la muestra.

El uso del software de análisis profesional de este kit será más conveniente para el análisis preciso y rápido de una gran cantidad de muestras.

8Las precauciones

1. La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.
2. La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada de situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.Así que continúa con el siguiente paso inmediatamente después de lavar.
3. Mezclar uniformemente, de lo contrario habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evitar el contacto con la piel.
5. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y en los valores de detección de la DO.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.
6. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla.
7. Desechar la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de la solución estándar 0 (0 ppb) de menos de 0,5 indica su degeneración.
8. La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

La empresa de biotecnología Shenzhen Lvshiyuan Co., Ltd.

D Edificio, Parque industrial biológico nacional de la vida marina, No.2 Binhai Road, Dapeng, Shenzhen, 518120 China

Tel. 86-755-28438788 El teléfono está en el teléfono.

Por fax 86-755-28938800

El correo electrónico:Información sobre las medidas de seguridad

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