Kit de ensayo ELISA indirecto para detectar la gentamicina en la carne, el hígado y la leche

Kit de ensayo ELISA de gentamicina de primavera verde

No de catálogo LSY-10023

1Principio.

Este kit de prueba se basa en el ensayo inmunológico enzimático competitivo para la detección de gentamicina en la muestra.La gentamicina en la muestra y el antígeno de acoplamiento pre-revestido en las franjas de micro-pozo compiten por el anticuerpo anti-gentamicinaDespués de la adición del conjugado enzimático, se agrega el sustrato TMB para la coloración. El valor de densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con la gentamicina en ella.El valor se compara con la curva estándar y se obtiene posteriormente la concentración de gentamicina..

2Especificaciones técnicas

Sensibilidad:0.05Pb y p

Temperatura de la incubadora:25°C

Tiempo de la incubadora:30min15min

Límites de detección

Tejido 2,5 ppb

Hígado, leche 3 ppb

Tasa de recuperación

Tejido 90±20%

Hígado 80±20%

Leche 90±18%

Tasa de reacciones cruzadas

Gentamicina 100%

Estreptomicina < 1%

Dihidrostreptomicina < 1%

Neomicina < 1%

3.Componentes

4- Materiales requeridos pero no proporcionados

1) elEquipo:Lector de microplacas, votex, centrífuga, homogeneizador, pipetas de medición, balanza (con una sensibilidad recíproca de 0,01 g).

2) elLos micropipetadores:de un solo canal de 20 a 200 μL y de 100 a 1000 μL, y de varios canales de 30 a 300 μL;

5Pre-tratamiento de la muestra

Instrucciones

Antes del pretratamiento de cualquier tipo de muestra, se deben examinar los siguientes puntos:

1) Solo se pueden utilizar las puntas desechables para los experimentos y las puntas deben cambiarse cuando se utilizan para absorber diferentes reactivos;

2) Antes del experimento, cada utensilio experimental debe comprobarse su limpieza y, si es necesario, debe volver a limpiarse.para evitar la contaminación que interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:

Diluir la solución de extracción concentrada 10× con el agua desionizada a 1:9 (1 parte de solución de extracción concentrada + 9 partes de agua desionizada)

5.1Tejido (pollo, cerdo, pescado, camarón)y Hígado(Hígado de pollo, hígado de cerdo )

1Se toma 1 ± 0,05 g de la muestra, que ya se descompone y se elimina la grasa, se añade 5 ml de solución de extracción diluida, se agita durante 3 minutos; se centrifuga a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 10 minutos.

2Se toman 50 μl de supernatante (capa superior), se añade 450 μl de la solución de redisolución de la muestra, se mezcla durante 30 segundos.

3Tomar 50 μL para análisis.

Doble de dilución de la muestra:50

5.2 Leche

1. Tomar 0,5 ml de muestra de leche homogénea, añadir 2 ml de solución de extracción diluida, agitar durante 2 min; centrifugar a 4000 r/min a temperatura ambiente (20-25 °C) durante 5 min.

2Se toman 50 μl de supernatante (capa superior), se añade 450 μl de la solución de redisolución de la muestra, se mezcla durante 30 segundos.

3Tomar 50 μL para análisis.

Doble de dilución de la muestra: 50

6Procedimientos de ELISA

6.1 Instrucciones

1 Coloque todos los reactivos y las tiras de micro-pozo a temperatura ambiente (20-25 °C) antes de su uso.

2 Devolver todos los reactivos a 2-8 °C inmediatamente después de su uso.

3 La reproducibilidad del análisis ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de platos.

Para la incubación a temperaturas constantes, todas las muestras y reactivos deben evitar la exposición a la luz y cada microplaca debe estar sellada por la membrana de cubierta.

6.2 Procedimientos de funcionamiento

1. Retirar el kit del ambiente refrigerado. Retirar todos los reactivos necesarios del kit y colocarlos a temperatura ambiente (20-25 °C) durante al menos 30 min.Tenga en cuenta que cada reactivo líquido debe agitarse para mezclarse uniformemente antes de su uso..

2. tomar las tiras de micro-pozo necesarias y los marcos de las placas. volver a sellar la microplaca no utilizada, almacenar a 2-8 °C, no congelada.

3Preparación de la solución: diluir 15 ml del tampón de lavado concentrado 20X con agua desionizada a 1:19 (1 parte de tampón de lavado concentrado 20X + 19 partes de agua desionizada),o cantidad diluida según sea necesario.

4- Numeración: numeración de los micro pozos de acuerdo con las muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar deben realizarse en duplicado; registrar sus posiciones.

5Se añaden 50 μl de la muestra o solución estándar a los pozos duplicados separados y se añade 50 μl de enzima conjugada y luego 50 μl de la solución de trabajo de anticuerpos en cada pozos.Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente, sellar la microplaca con la membrana de cubierta,y incubar a los 25 años°Cpara30 minutos.

6. Se extrae el líquido de los micro-pozos, se añade 250 μL/pozo de tampón de lavado diluido durante 15-30 s, se repite 4-5 veces, y luego se seca con papel absorbente (si hay burbujas después de la batida,cortarlos con las puntas limpias).

7. Coloración: añadir 50 μl de sustrato A y luego 50 μl de sustrato B en cada pozo. Mezclar suavemente agitando la placa manualmente yIncubación a 25 °C durante 15 minutosen la oscuridad para la coloración;

8Determinación: añadir 50 μl de la solución de parada en cada pozo. Mezclar suavemente sacudiendo la placa manualmente.Ajuste la longitud de onda del lector de microplacas a 450 nm para determinar el valor de OD (Se recomienda leer el valor de OD en la doble longitud de onda 450/630 nm dentro de 5 min).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de gentamicina.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/ml) se puede obtener comparando el valor medio de la DO de la muestra con el de la solución estándar, suponiendo que el valor de la DO de la muestra I sea 0.3, y el de la muestra II es 1.0, mientras que las de las soluciones estándar son las siguientes: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0,05ppb, 1,415 para 0,15ppb, 0,74 para 0,45ppb, 0,313 para 1,35ppb y 0,155 para 4,05ppb,En consecuencia, el rango de concentración de la muestra es 1.35 a 4.05 ppm, y la muestra II es de 0.15 a 0.45 ppm (multiplicado por el doble de dilución correspondiente).

7.2 Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia son equivalentes al porcentaje del valor medio de OD (B) de la muestra y de la solución estándar dividido por el valor de OD (B)₀) de la primera solución estándar (0 estándar) y posteriormente multiplicado por 100%, es decir,

B­el valor medio de OD (dobles pozos) de la muestra o de la solución estándar

B. El trabajo₀¢el valor medio de la DO de la solución estándar de 0 ng/mL.

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogaritmo de las soluciones estándar de gentamicina (ng/mL) como eje Y y eje X, respectivamente.Se leerá la concentración correspondiente de la muestra a partir de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándarEl valor resultante se multiplica posteriormente por el doble de dilución correspondiente, obteniendo así finalmente la concentración de gentamicina en la muestra.

8Las precauciones

1La temperatura ambiente inferior a 25 °C o la temperatura de los reactivos y de las muestras que no vuelvan a la temperatura ambiente (20-25 °C) darán lugar a un valor de OD estándar inferior.

2La sequedad de la microplaca en el proceso de lavado se verá acompañada por situaciones como las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.

3Mezclar todos los reactivos y mezclas de reacción de manera uniforme y lavar bien la microplaca, de lo contrario se producirá la reproducibilidad indeseable.

4La solución de parada es la solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.

5. Coloque la microplaca no utilizada en una bolsa de sellado automático para volver a sellarla. La sustancia estándar y la primera de color incoloro son sensibles a la luz y, por lo tanto, no pueden exponerse directamente a la luz.

6No utilice el kit después de su fecha de caducidad. El uso de reactivos diluidos o adulterados de los kits dará lugar a cambios en la sensibilidad y los valores de detección de la dosis.No se intercambien los reactivos de los kits de diferentes números de lotes para su uso.

7Se desechará la solución de coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución.

8La temperatura de reacción óptima es de 25 °C, y temperaturas demasiado altas o demasiado bajas darán lugar a cambios en la sensibilidad de detección y en los valores de OD.

9. Almacenamiento y fecha de caducidad

El almacenamiento:almacenar a 2-8 °C, no congelado.

Fecha de caducidad:12 meses; la fecha de producción está en la caja.

Nota: Si el envase de microplacas Vacuum tiene fugas, sigue siendo válido para su uso, no afecte al resultado del ensayo, sea relajado para su uso.