Carne de ELISA Test Kit de los metabilitos del carbadox LSY-10066 (QCA) que prueba 96wells por equipo

Metabilitos del carbadox (QCA) ELISA Test Kit

No. LSY-10066 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo de un solo paso competitivo indirecto de la enzima para la detección de los metabilitos del carbadox (QCA) en la muestra. Los antígenos de acoplamiento se cubren primero en las rayas micro-bien. Los metabilitos del carbadox (QCA) en la muestra y los antígenos de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para el anticuerpo de los metabilitos del anti-carbadox (QCA). Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con los metabilitos del carbadox (QCA) en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de los metabilitos del carbadox (QCA) se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0,2 ppb

Temperatura de la incubadora: 25℃

Tiempo de la incubadora: 30min~15min

Precisión

Coeficiente de variación en y entre las placas ..............................<10>

Límite de detección:

Tejido ........................................................................................... 0,5 ppb

Tarifa del reacción cruzado:

Metabilitos del carbadox (QCA) .............................................................. 100%

Metabilito de Olaquindox (MQCA) ......................................................... 120%

Olaquindox (OLA) ............................................................................. <1>

Carbadox (COCHE) ................................................................................. <1>

Sulfaquinoxaline (SQX) ...................................................................... <1>

Tarifa de recuperación:

Tejido ...................................................................................... 70%-120%

3. Componentes

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipos: el lector del microplate (450nm/630nm), homogeneizador, oscilador, centrifugadora, midiendo mide con una pipeta, dispositivo y balanza (una sensibilidad de la nitrógeno-sequedad recíproca de 0,01 g), incubadora, impresora
2. Micropipettors: µL monocanal 20 a 200 µL y 100 a 1000 y µl de varios canales 30~300;
3. Reactivo: El acetato de etilo, n-hexano, H₂ TAN₄, desionizó el wate.

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

1. Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
2. Antes del experimento, cada utensilio experimental se debe comprobar para ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la muestra

1) los 2M H₂ TAN₄: Tome 10ml H₂ TAN₄, añada 80ml desionizó el agua, la mezclan uniformemente.

5,1 tejido:

1. Tome 1± 0,01 g de la muestra de tejido homogeneizada en el tubo de centrífuga 50ml, añada 1ml desionizó el agua, vórtice para 1min;
2. Añada el acetato de etilo 6ml, después añada 0.5ml los 2M H₂ TAN₄ NC de 2ml CH₃, vórtice para 2min, centrifugadora en 4000 r/min en la temperatura ambiente para el minuto 5;
3. Tome 3 ml de líquido claro de la para arriba-capa en un tubo de centrífuga 10ml, abajo para secarse con nitrógeno en

baño de agua 50-60℃;

4. Añada 1ml el n-hexano, vórtice para 1min, después añada 0.5ml que redisuelve la solución, vórtice para 30s; centrifugadora en 4000 r/min en la temperatura ambiente para 5 mínimos.
5. Quite las impurezas de la fase y de la medio-capa del n-hexano de la para arriba-capa totalmente.
6. Tome la abajo-capa de 50 µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 1

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

1. Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;
2. Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;
3. La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en los procedimientos de ELISA;
4. Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

1. Saque todos los reactivo y lugar necesarios en la temperatura ambiente (20-25 ℃) por lo menos 30min. Observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar;
2. Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, almacenado en el ℃ 2 - 8;
3. Preparación de la solución: los 15 ml diluídos del 20× concentraron el almacenador intermediario que se lavaba con agua desionizada at1: 19 (el almacenador intermediario concentrado 20× del lavado de 1 porción + 19 porciones desionizó el agua), o se preparan como cantidad necesaria;
4. Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces; registre sus posiciones;
5. Añada el µL 50 la muestra o la solución estándar a los pozos duplicados separados, después añada la conjugación de la enzima 50µL, después añada la solución de trabajo del anticuerpo 50µL en cada pozo. Mézclese por la sacudida suavemente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el℃ 25 en la oscuridad para el minuto 30;
6. Lave el microplate con el almacenador intermediario que se lava en 250 µL/well por cuatro a cinco veces; empape el pozo con el almacenador intermediario que se lava para el sec 15-30, aleta para secarse con el papel absorbente (si hay las burbujas después de agitar, las corta con las extremidades limpias);
7. Coloración: añada 50 el µL de la solución del substrato A, entonces µL 50 de la solución del substrato B en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente, e incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración;
8. Determinación: añada 50 que el µL para la solución en cada pozo. Mézclese sacudiendo suavemente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450nm para determinar el valor del OD. (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630nm en el plazo del minuto 5).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de QCA.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) se puede obtener de la comparación el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,236, y el del Ⅱ de la muestra es 0,666, mientras que los de las soluciones estándar están como los seguidores: 1,949 para 0ppb, 1,434 para 0.2ppb, 0,939 para 0.6ppb, 0,487 para 1.8ppb, 0,157 para 5.4ppb y 0,06 para 16.2ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 1.8ppb-5.4ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0.6ppb-1.8ppb.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción son equivalentes al porcentaje del valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the (pozos dobles) de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de las soluciones estándar y los valores del semilogarithm de las soluciones estándar de QCA (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, así finalmente obteniendo la concentración de QCA en la muestra.

Usando analizando el software profesional de este equipo será más conveniente para el análisis exacto y rápido de una gran cantidad de muestras. (Éntrenos en contacto con por favor para este software)

8. Precauciones

1. La temperatura ambiente debajo del ℃ 20 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD
2. La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable
3. Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción uniformemente y lave el microplate a fondo, si no habrá la reproductibilidad indeseable
4. La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel;
5. Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz
6. No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar
7. Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de las 0 soluciones estándar de menos de 0,5 indica su degeneración
8. Después de añadir el substrato A y el substrato B, es generalmente suficiente desarrollar el color por 15 minutos. Si el color es más ligero, el tiempo de reacción puede ser extendido a 20min (o más largo), pero no más que 30min. Si no, se acorta el tiempo de reacción.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.

Nota: Si el envasado al vacío del microplate tiene salida, es todavía válido utilizar, no afecta al resultado de la prueba, sea relajarse para utilizar.

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