Pozos/equipo del equipo 96 de la prueba de LSY-10071 Flunixin ELISA para la leche y el cerdo, detección de la carne de vaca

Equipo de la prueba de Flunixin ELISA

No. LSY-10071 del catálogo

1. Principio

Este equipo de la prueba se basa en el immunoensayo competitivo indirecto de la enzima. El antígeno de acoplamiento se cubre primero en las rayas micro-bien. Los residuos de Flunixin en la muestra y el antígeno de acoplamiento cubiertos primero en las rayas micro-bien compiten para el anticuerpo anti-Flunixin. Después de que la adición de la conjugación de la enzima, el substrato de TMB se añada para la coloración. El valor de la densidad óptica (OD) de la muestra tiene una correlación negativa con el Flunixin en él. Este valor se compara a la curva estándar y la concentración de Flunixin se obtiene posteriormente.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.05ppb

Temperatura de la incubación: ℃ 25

Tiempo de la incubación: 30min-15min

Límite de detección

Tejido animal ................................................................................... 0.1ppb

Leche .................................................................................................... 2ppb

Tarifa de recuperación

Tejido animal .......................................................................... los 70%~120%

Leche ......................................................................................... los 70%~120%

3. Componentes

4. Materiales requeridos pero no proporcionados

1. Equipo: el lector del microplate, impresora, homogeneizador, vórtice, centrifugadora, midiendo mide con una pipeta, y balanza (una sensibilidad recíproca de 0.01g), incubadora.
2. Micropipeta: 20-200µL monocanal, 100-1000µL, y µL de varios canales 30~300.
3. Reactivo: Acetato de etilo, n-hexano, sulfato de sodio anhidro, agua desionizada.

5. Tratamiento previo de la muestra

Instrucciones

Los puntos siguientes se deben ocupar antes del tratamiento previo de la clase de muestra:

1. Solamente las extremidades disponibles se pueden utilizar para los experimentos y las extremidades deben ser cambiadas cuando están utilizadas para absorber diversos reactivo;
2. Antes del experimento, cada equipo experimental se debe comprobar para ser limpio y se debe re-limpiar en caso de necesidad, para evitar la contaminación que interfiere con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del tratamiento previo de la muestra

1. Extracción del almacenador intermediario: 1 porción de 10× que extrae el almacenador intermediario + 9 porciones de agua desionizada, lo mezcla uniformemente.
2. Dilución de la muestra: 1 porción de dilución de la muestra 5× + 4 porciones de agua desionizada, lo mezcla uniformemente
   1. Muestra del tejido mamífero (cerdo, carne de vaca)
   1. Tome 2±0.05g de la muestra de tejido homogeneizada en el tubo de centrífuga 50mL, añada 2mL que extrae el almacenador intermediario, después añada 8ml el acetato de etilo, vórtice para 3min;
   2. Añada el sulfato de sodio anhidro 1g, vórtice para 1min, centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (20-25℃) para 5 mínimos.
   3. Lleve el líquido claro otro tubo, soplo de la para arriba-capa 4ml para secarse con nitrógeno totalmente por la evaporación rotatoria en el ℃ 50
   4. Disuelva los residuos secos en 1 ml del n-hexano, después añada 1 ml de dilución de la muestra, mézclelo uniformemente para 10S; centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (20-25℃) para el minuto 10; Quite la fase superior del n-hexano (si la emulsificación ocurre, quita el n-hexano superior, después la centrifugadora en la temperatura ambiente sobre 4000r/min por 5 minutos);
   5. Tome el líquido de la abajo-capa 50µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 1

1. Muestra de la leche

1. Tome 1ml de la muestra de la leche en tubo de centrífuga 10mL o 15ml o 50ml;
2. Añada 4mL desionizó el agua, vórtice para 3min;
3. Centrifugadora en sobre 4000 r/min en la temperatura ambiente (20-25℃) para el minuto 5;
4. Lleve el líquido claro de la para arriba-capa 200µl otro tubo, añada 600µl del dilución de la muestra, mézclelo uniformemente.
5. Tome 50µL para el análisis.

Doblez del dilución de la muestra: 20

6. Procedimientos de ELISA

6,1 instrucciones

1. Traiga todos los reactivo y tiras micro-bien a la temperatura ambiente (℃ 20-25) antes de usar;
2. Vuelva todos los reactivo al ℃ 2-8 inmediatamente después del uso;
3. La reproductibilidad del análisis de ELISA, depende en gran parte de la consistencia del lavado de la placa. La operación correcta del lavado de la placa es el punto clave en ELISA los procedimientos;
4. Para la incubación en las temperaturas constantes, todas las muestras y reactivo deben evitar la exposición luminosa, y cada microplate se debe sellar por la membrana de la cubierta.

6,2 procedimientos de la operación

1. Saque el equipo del ambiente refrigerado. Saque todos los reactivo necesarios del equipo y del lugar en la temperatura ambiente (20-25 ℃) por lo menos 30 mínimos. Observe que cada reactivo se debe sacudir para mezclarse uniformemente antes de usar.
2. Tome las tiras y los marcos micro-bien requeridos de la placa. Reselló el microplate inusitado, tienda en 2-8℃, no congelado.
3. Preparación de la solución: 15mL diluídos del almacenador intermediario que se lava concentrado 20× con el agua desionizada en el 1:19 (1 porción del almacenador intermediario concentrado 20× del lavado + 19 porciones de agua desionizada) para el uso, o se preparan como cantidad necesaria.
4. Enumeración: número los micro-pozos según muestras y la solución estándar; cada muestra y solución estándar se deben realizar dos veces, registran sus posiciones.
5. Añada 50µL de la muestra o de la solución estándar para separar pozos duplicados; Después añada la conjugación de la enzima 50µL, después añada 50µL de la solución de funcionamiento del anticuerpo en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, el sello el microplate con la membrana de la cubierta, e incube en el ℃ 25 para 30min.
6. Vierta el líquido, lave el microplate con el almacenador intermediario que se lava en 250µL/well por 4-5 veces. Empape cada vez el pozo con el almacenador intermediario que se lava para el sec 15-30, aleta para secarse con el papel absorbente (si hay las burbujas después de agitar, las cortan con las extremidades limpias).
7. Coloración: añada 50µL del substrato A y entonces 50µL del substrato B en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente, e incube en el ℃ 25 para el minuto 15 en la oscuridad para la coloración.
8. Determinación: añada 50µL del paran la solución en cada pozo. Mézclese suavemente sacudiendo la placa manualmente. Fije la longitud de onda del lector del microplate en 450nm para determinar el valor del OD. (recomiende leer el valor del OD en la dual-longitud de onda 450/630nm en el plazo del minuto 5).

7. Juicio del resultado

Hay dos métodos para juzgar los resultados; primer es el juicio áspero, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa. Nota que el valor del OD de la muestra tiene una correlación negativa con el contenido de Flunixin.

7,1 determinación cualitativa

La gama de concentración (ng/mL) se puede obtener de la comparación el valor medio del OD de la muestra con el de la solución estándar. Si se asume que el valor del OD de la muestraⅠ es 0,3, y el del Ⅱ de la muestra es 1,0, mientras que los de las soluciones estándar están como los seguidores: 2,243 para 0ppb, 1,816 para 0.05ppb, 1,415 para 0.15ppb, 0,74 para 0.45ppb, 0,313 para 1.35ppb y 0,155 para 4.05ppb, la gama de concentración del Ⅰ de la muestra es por consiguiente 1,35 a 4.05ppb, y el del Ⅱ de la muestra es 0,15 a 0.45ppb. El multiplicarse por su factor correspondiente del dilución es la concentración real de Flunixin en la muestra.

7,2 determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de la absorción obtenidos para el valor medio del OD (b) de la muestra y de la solución estándar divididas por el valor del OD (B₀) de la primera solución estándar (0 estándares) y multiplicadas posteriormente antes de 100%, es decir,

Valor del OD de la media de B-the de la muestra o de la solución estándar

B₀ — el valor medio del OD de las 0 soluciones estándar de ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de la absorción de la solución estándar y los valores del semilogarithm de la solución estándar de Flunixin (ng/mL) como la y y X-AXIS, respectivamente. Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de la absorción en la curva estándar. El valor resultante es multiplicado posteriormente por el doblez correspondiente del dilución, así finalmente obteniendo la concentración de Flunixin en la muestra.

8. Precauciones

1. La temperatura ambiente debajo del ℃ 25 o la temperatura de los reactivo y de las muestras que no son vueltos a la temperatura ambiente (℃ 20-25) llevará a un valor estándar más bajo del OD.
2. La sequedad del microplate en el proceso que se lava será acompañada por las situaciones incluyendo las curvas estándar no lineales y la reproductibilidad indeseable.
3. Mezcle cada reactivo y mezcla de reacción uniformemente y lave el microplate a fondo, si no habrá la reproductibilidad indeseable.
4. La solución de la parada es la solución ácida sulfúrica de 2 M, evita entrar en contacto con con la piel;
5. Ponga el microplate inusitado en un bolso del auto-lacre para resellarlo. La sustancia estándar y el color descolorido anteriores es sensibles a la luz, y no pueden ser expuestos así directamente a la luz.
6. No utilice el equipo que excede su fecha de vencimiento. El uso de reactivo diluidos o adulterados de los equipos llevará a los cambios en la sensibilidad y los valores de detección del OD. No intercambie los reactivo de los equipos de diversos números de lote para utilizar.
7. Deseche la solución de la coloración con cualquier color que indique la degeneración de esta solución. El valor de detección de la solución estándar 1 (0 ppb) de menos de 0,5 indica su degeneración.
8. La temperatura óptima de la reacción es el ℃ 25, si las temperaturas demasiado altas o demasiado bajas dan lugar a los cambios en la sensibilidad de detección y valores del OD.

9. Fecha del almacenamiento y de vencimiento

Almacenamiento: tienda en el ℃ 2-8, no congelado.

Fecha de vencimiento: 12 meses; la fecha de la producción está en la caja.

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